Освоение микроскопических методов исследования

Правила работы в микробиологических лабораториях

Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний — патогенными микроорганизмами.

Для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутреннего распорядка:

1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску из марли. Работа с особо опасными микробами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях.

2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.

4. При случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности, это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором.

5. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специальной инструкции. Культуры патогенных микробов регистрируют в специальном журнале.

6. По окончании работы руки следует тщательно вымыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.

Микроскопы и методы микроскопии

Рисунок 6 Микроскопы

а — общий вид микроскопа "Биолам"; б — микроскоп МБР-1: 1 — основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты для перемещения предметного столика; 4 — клеммы, прижимающие препарат; 5 — конденсор; 6 — кронштейн конденсора; 7 — винт, укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы конденсора; 10 — зеркало; 11 — тубусодержатель; 12 — рукоятка макрометричес-кого винта; 13 — рукоятка микрометрического винта; 14 — револьвер объективов; 15 — объективы; 16 — наклонный тубус; 17 — винт для крепления тубуса; 18 — окуляр.

Рисунок 7 Люминесцентный микроскоп в БашНПВЛ

Для микробиологических исследований используют несколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный) и специальные методы микроскопии (фазово-контрастный, темнопольный).

В микробиологической практике применяют микроскопы отечественных марок: МБР-1, МБИ-2, МБИ-3, МБИ-6, "Биолам" Р-1 и др. Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков различных микробов, величина которых не менее 0,2—0,3 мкм.

Иммерсионная микроскопия

Применяется для увеличения разрешающей способности метода световой микроскопии. Разрешающая способность системы светооптической микроскопии определяется длиной волны видимого света и числовой апертурой системы. Числовая апертура показывает величину угла максимального конуса света, попадающего в объектив, и зависит от оптических свойств (преломляющей способности) среды между объектом и линзой объектива. Погружение объектива в среду (минеральное масло, вода), имеющую высокий коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, препятствует рассеянию света от объекта.

Таким образом, достигается увеличение числовой апертуры и соответственно разрешающей способности. Для иммерсионной микроскопии применяют специальные иммерсионные объективы, снабженные меткой (МИ — масляная иммерсия, ВИ — водная иммерсия). Предельная разрешающая способность иммерсионного микроскопа не превышает 0,2 мкм.

Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, увеличение микроскопа с иммерсионным объективом 90 и окуляром 10 составляет: 90*10 = 900.

Микроскопия в проходящем свете (светлопольная микроскопия) используется для изучения окрашенных объектов в фиксированных препаратах.

Темнопольная микроскопия. Применяется для прижизненного изучения микробов в нативных неокрашенных препаратах. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоид-конденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе. При этом способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенном поле зрения) видны ярко светящиеся частицы.

Фазово-контрастная микроскопия. Предназначена для изучения нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Свет проходит через различные биологические структуры с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое глазом. Фазовое устройство, включающее особые конденсор и объектив, обеспечивает преобразование изменений фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом достигается усиление различия в оптической плотности объектов. Они приобретают высокую контрастность, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объекта на темном фоне.

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство КФ-1 или КФ-4, а также специальные осветители.

Люминесцентная (или флуоресцентная) микроскопия (рис. 8). Основана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее под воздействием внешнего излучения: светового, ультрафиолетового, ионизирующего и др. Фотолюминесценция — люминесценция объекта под влиянием света. Если освещать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта (рис. 9) [8].

Рисунок 8 Цветное изображение объекта под люминесцентным микроскопом