Интерпретация полученных результатов тест- системы при проведении исследования иммунохроматографическим методом.

Иммунохроматографический анализ (ИХА) – метод, основанный на разделении частиц методом парной связки и реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах (моча, слюна, цельная кровь, сыворотка или плазма крови и т.п.). Данный вид анализа проводится с помощью специальных экспресс-тестов, тест-полосок или тест-кассет. Принцип действия: При погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с жидкостью движется жидкая фаза тест полоски содержащая антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, онкологический или инфекционный маркер), то происходит его связывание, как с первым типом антител, так и со вторым. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител. Визуально накопление антител с красителем проявляется в виде окрашивания тест полоски. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют с вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса.

14. Приготовить препарат из бульонной культуры, окрасить спирто-водным раствором метиленового синего, изучить под микроскопом и сделать заключение.

 

Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло нанести 1-2 петли исследуемого бульонного материала и равномерно распределить по стеклу (не требуется использование воды). С обратной стороны стекла карандашом по стеклу должен быть записан номер мазка. Высушивание мазка производится на воздухе. Фиксация мазка над пламенем горелки или спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх. На мазок нанести несколько капель раствора красителя так, чтобы весь мазок был покрыт краской. Метиленовым синим - окраска в течение 3-5 мин. Этот краситель простой, для обнаружения в микроскопируемом материале микробов, определения их количества, формы и расположения.

15. Приготовить препарат из агаровой культуры, выращенной в чашке Петри, окрасить по методу Грама-Синева, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Препараты для исследования готовят на чистых предметных стеклах, обезжиривая их поверхность мылом. Наносим культуру. Фиксируем мазок. Окрашиваем препарат по Синеву: 1) На препарат наложить смоченную в воде бумажку по Синеву на 1-2 мин, 2) не промывая водой, наносят р-р Люголя на 1 мин, 3) не промывая водой, наносят 96% спирт, промывают водой, 4) докрашивают фуксином Пфейффера 1-2 мин, промывают водой, высушивают. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы

16. Приготовить препарат из бульонной культуры, окрасить по методу Грама-Синева, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Наносим культуру. Фиксируем мазок. Окрашиваем препарат по Синеву: 1) На препарат наложить смоченную в воде бумажку по Синеву на 1-2 мин, 2) не промывая водой, наносят р-р Люголя на 1 мин, 3) не промывая водой, наносят 96% спирт, промывают водой, 4) докрашивают фуксином Пфейффера 1-2 мин, промывают водой, высушивают. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы

 

17. Приготовить препарат из чистой культуры антракоидов, окрасить по методу Ожешко, изучить под микроскопом и сделать заключение.

 

На нефиксированный мазок наносят 0,5%р-р HCL и подогревают над пламенем 1-2 мин, остатки к-ты сливают. Остывший мазок промывают под водой, подсушивают и фиксируют над пламенем. Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят фуксин Циля. Препарат подогреть над пламенем до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще раз. После охлаждения снимают бумагу и промывают под водой. Наливают 5% р-р серной к-ты до обесцвечивания. Промывают под водой. Окрашивают р-ром метиленового синего 3-5 мин. Промывают под водой, высушивают, промокая фильтровальной бумагой. Кислотоустойчивые споры окрашиваются в красный цвет, а бактериальная клетка – в голубой (синий).

18. Приготовить препарат из бульонной культуры, окрасить по методу Циля-Нильсена, изучить под микроскопом и сделать заключение.

1.Фиксированный препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще 2 раза. После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой.

2.Перепарат обесцвечивают 5% р-ром серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор или наливая кислоту на стекло, затем несколько раз промывают водой.

3.Окрашивают водно-спиртовым р-ром метил.синего в течении 3-5 мин. И промывают водой и высушивают.

Микроскопируют с иммерсионной системы. Килотоустойчивые споры розово-красного цвета, а бактериальная клетка - в голубой цвет.

19. Приготовить препарат из агаровой культуры антракоидов, окрасить по методу Бурри-Гинса, изучить под микроскопом и сделать заключение.

1. Препараты для микроскопического исследования готовят на чистых предметных стеклах, обезжиривая их поверхность мылом, затем наносят каплю физ. р-ра. 2. Бактериальную петлю прокаливают докрасна в пламени горелки. Захватывают небольшое количество микробной массы, равномерно эмульгируя ее в капле физ. р-ра. Окраска по Бурри-Гинсу: черную тушь смешивают в культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд.

20. Приготовить мазок-отпечаток, окрасить щелочным метиленовым синим Леффлера, изучить под микроскопом и сделать заключение.

 

Поверхность органа или пищевого продукта прижигают раскаленным скальпелем и из этого участка вырезают кусочек материала. Пинцетом осторожно захватывают этот кусочек и поверхностью среза прикасаются к предметному стеклу в двух - трех местах, делая ряд мазков-отпечатков. Нанести на фиксированный мазок р-р метиленового синего на 3-10 минут. Микроскопическая картина. Дает окраску в синий цвет различной интенсивности для разных видов микроорганизмов и тканевых элементов.

21. Приготовить нативный препарат «раздавленная капля» из агаровой культуры, изучить под микроскопом и сделать заключение.

На предметное стекло наносят пипеткой каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. Чтобы не образовывалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его.Для предохранения препарата от высыхания его помещения во влажную камеру. И затем микроскопируют при увеличении объектива 40 в темном поле.

22. Приготовить нативный препарат «висячая капля» из бульонной культуры, изучить под микроскопом и сделать заключение.

Для приготовления висячей капли берут пинцетом покровное стекло, проводят через пламя и остужают. В центр стекла наносят каплю исследуемого материала, взвешенного в изотоническом растворе хлорида натрия. Затем покровное стекло быстро поворачивают каплей вниз и кладут на стерильное предметное стекло с вышлифованной посредине лункой, края которой предварительно смазывают вазелином. Можно наложить предметное стекло на покровное и перевернуть. Микрокопируем.