ТОП 10:

Занятие. Иммунограмма в клинической практике



Занятие. Иммунограмма в клинической практике

Организация иммунологической лаборатории.

Показания к назначению иммунологического обследования.

Иммунодиагностика нарушений фагоцитоза, клеточного звена иммунитета, синтеза иммуноглобулинов.

Цель иммунодиагностики –идентификация нарушенного звена иммунной системы, от которого зависит развитие данного заболевания.

Иммунограмма – набор тестов, позволяющих оценить различные звенья иммунной системы.

Выделяют четыре группы заболеваний иммунной системы, при которых показано иммунологическое обследование:

ü иммунодефициты;

ü аутоиммунные заболевания;

ü аллергические заболевания;

ü лимфопролиферативные заболевания.

Наибольшее значение иммунодиагностика имеет при иммунодефицитах, которые подразделяют на первичные и вторичные.

Первичные иммунодефицитывозникают при наличии в организме генетического дефекта. В соответствии с критериями ВОЗ к настораживающим признакам первичных иммунодефицитов относят:

1. наличие семейного анамнеза, факты ранних смертей от тяжелых инфекций;

2. частые отиты (8 и более в течение года);

3. тяжелые синуситы (2 и более в течение года);

4. пневмонии не менее 2 раз в год;

5. длительное применение антибиотиков (в течение 2-х месяцев и более за год);

6. осложнения при вакцинации живыми вакцинами;

7. отставание в росте и развитии грудного ребенка;

8. рецидивирующие глубокие абсцессы кожи или внутренних органов;

9. не менее двух тяжелых инфекций в год (менингит, остеомиелит, сепсис);

10. персистирующий кандидоз кожи и слизистых а течение 1 года;

11. гастроэнтерологические расстройства в раннем детском возрасте;

12. рецидивирующие системные инфекции, вызванные атипичными микобактериями.

 

Вторичные иммунодефициты делят на приобретенные (ВИЧ) и индуцированные.

Вторичные иммунодефициты развиваются у детей и взрослых с исходно нормальной иммунной системой на фоне иммуносупрессивных воздействий:

ü применение иммунодепрессантов, кортикостероидов, моноклональных антител;

ü болезни обмена: уремия, сахарный диабет, гиповитаминозы, гипотрофия, нефротический синдром;

ü хирургическая патология: спленэктомия, ожоги, анестезия;

ü инфекции: ВИЧ, инфекционный мононуклеоз, врожденная краснуха, ЦМВИ, тяжелые бактериальные инфекции,

ü прочие причины: СКВ, хронический гепатит, цирроз печени, прием противосудорожных препаратов.

Подозрение на вторичные иммунодефициты возникает при наличии у пациента хронических или рецидивирующих инфекций бронхолегочной системы, придаточных пазух носа, ЖКТ, кожи, мягких тканей, нередко вызванных условно-патогенными микроорганизмами.

В соответствии с российскими рекомендациями (Р.В. Петров, Б.В. Пинегин, 1984, 2014 гг) все методы иммунодиагностики разделены на тесты I и II уровня. Тесты I уровня направлены на идентификацию грубых дефектов иммунной системы и позволяют осуществить диагностику основных первичных иммунодефицитов. Тесты II предназначены для углубленного изучения функционального состояния иммунной системы и применяются для выявления причин вторичной иммунной недостаточности. При этом их объем для каждого конкретного случая должен быть строго индивидуален.

Иммунодиагностика нарушений фагоцитоза

Фагоцитоз –комплекс клеточных реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма корпускулярных частиц размером более 0,5 мкм. Процесс фагоцитоза состоит из следующих стадий: хемотаксис, адгезия, поглощение, киллинг и переваривание объекта.

Тесты I уровня

Стадия поглощения

Поглотительная активность(фагоцитарное число – ФЧ). Метод исследования: микроскопический. Выявляет процент нейтрофилов, способных поглощать корпускулярные антигены (дрожжи, латекс, культура стафилококка). Поглотительная активность нарушается реже, чем другие функции фагоцитирующих клеток. Норма (объект фагоцитоза – дрожжи): 60-90%.

Поглотительная активность снижена – миелопролиферативные заболевания, тяжелые инфекции, сепсис, перитонит/

Стадия переваривания (завершенность фагоцитоза)

Методы исследования: микроскопический, проточная цитометрия. Микроскопический метод основан на подсчете количества живых и мертвых микробных клеток в 100 нейтрофилах и вычислении индекса бактерицидности (ФИ=Чубитыхживых). Метод проточной цитометрии включает автоматизированную регистрацию количества живых и мертвых микробных клеток до и после их взаимодействия с нейтрофилами. Норма (микроскопический метод): 60-70%.

Переваривающая активность снижена – рецидивирующие бактериальные инфекции; вялотекущие гнойно-воспалительные процессы; длительно не заживающие раны; миелолейкозы, сахарный диабет, уремия, ожоги, полостные опера­ции, иммуносупрессивная терапия.

Бактерицидная активность (киллинг)

Антимикробные факторы нейтрофилов делятся на кислородзависимые и кисло­роднезависимые. Методы исследования кислородзависимых факторов: НСТ-тест, хемилюминесценция.

НСТ-тест спонтанный (тест восстановления нитросинего тетрозолия) основан на способности частиц нитросинего тетразолия, поглощенных нейтрофилом, менять окраску под действием активных форм кислорода. Тест выявляет процент нейтрофилов с активными формами кислорода. Метод исследования: микроскопический. Норма: 4-10%.

НСТ-тест повышен – острые бактериальные инфекции (в начальном периоде), генерализация очаговых воспалительных процессов, туберкулез легких, хронические гепатиты, ревматизм, ревматоидный артрит.

НСТ-тест снижен – хронизация воспалительного процесса, злокачественные новообразования, тяжелые ожоги, травмы, стресс, недостаточность питания, лечение цитостатиками и иммунодепрессантами.

НСТ-тест отрицателен – врожденный дефект фагоцитоза(хроническая гранулематозная болезнь).

НСТ-тест стимулированный (фагоцитарный резерв) отражает потенциальную способность нейтрофилов продуцировать активные формы кислорода в ответ на антигенное раздражение. Норма(фагоцитарный резерв) 2,4-3,5.

Фагоцитарный резерв снижен – гнойно-воспалительные процессы, тяжелые пиогенные инфекции кожи; миелолейкоз, сахарный диабет, уремия, ожоги, полостные операции, иммуносупрессивная терапия.

Иммунодиагностика нарушений клеточного звена иммунитета

Тесты I уровня. Фенотипирование лимфоцитов

Согласно рекомендациям ВОЗ оценка популяционного состава лимфоцитов имеет диагностическое значение при первичных и вторичных иммунодефицитах, лимфопролиферативных заболеваниях и ВИЧ-инфекции.

Под световым микроскопом все лимфоциты выглядят одинаково, однако их можно отличить по антигенам клеточной поверхности, их обозначают CD-молекулами (СD1, СD2, СDЗ и т.д. до СD130) и выявляют с помощью моноклональных антител. Набор антигенов зависит от типа клеток и их функций. В соответствии с общепринятой в мире СD-кластерной классификацией маркером всех Т-лимфоцитов считают CD3, маркером Т-хелперов CD4, маркером Т-киллеров/цитотоксических CD8 и т.д.

Метод исследования: проточная цитофлуориметрия с использованием меченых флуорохромными красителями моноклональных антител к специфическим поверхностным маркерам этих клеток и последующей автоматической регистрацией.

 

Таблица

Численность основных субпопуляций лимфоцитов крови (нормальные значения)

Показатель 0-3 мес. 3-12 мес. 1-2 года 2-6 лет 6-16 лет 16-80 лет
  CD3+ % 55-78 45-79 53-81 62-80 66-76 55-80
abs *109 2,07-6,54 2,28-6,45 1,46-5,54 1,61-4,23 1,40-2,00 0,80-2,00
  CD3+CD4+ % 41-64 36-61 31-54 35-51 33-41 31-49
abs *109 1,46-5,12 1,69-4,60 1,02-3,60 0,90-2,86 0,7-1,10 0,6-1,60
  CD3+CD8+ % 16-35 16-34 16-38 22-38 27-35 12-30
abs *109 0,65-2,45 0,72-2,49 0,57-2,23 0,63-1,91 0,60-0,90 0,19-0,65
  CD16+CD56+ % 2-14 2-13 3-16 4-23 4-27 6-20
abs *109 0,04-0,92 0,04-0,92 0,04-0,92 0,10-1,33 0,10-0,50 0,15-0,60
  CD19+(CD20+) % 19-31 19-31 19-31 21-28 12-22 5-19
abs *109 0,50-1,50 0,50-1,50 0,50-1,50 0,70-1,30 0,30-0,50 0,10-0,50
CD3+HLADR+ % 1-9 1-7 3-12 3-13 3-10 0-12

Т-лимфоциты (CD3)

Уровень CD3+ повышен – начальный период острого воспалительного процесса, лимфолейкоз, обострение хронического воспалительного процесса.

Уровень CD3+ снижен – первичные и вторичные иммунодефициты с наруше­нием Т-клеточного звена иммунитета; воспалительные заболевания, злокачественные новообразования, состояние после травмы, операции, прием цитостатиков, гормонов, иммунодепрессантов.

Т-хелперы (CD3CD4)

Уровень CD3+CD4+ повышен – острый инфекционно-воспалительный процесс, обострение аллергических и аутоиммунных заболеваний.

Уровень CD3+CD4+ снижен – врожденные и приобретенные иммунодефициты, ВИЧ-инфекция, инфекционный мононуклеоз, злокачественные новообразования, длительное лечение цитостатиками, гормонами, иммунодепрессантами.

Иммунорегуляторный индекс

При некоторых заболеваниях диагностическое и прогностическое значение имеет соотношение CD4/CD8 или иммунологический индекс (ИРИ). Норма: 1,2-2,5.

CD4/CD8 (ИРИ) повышен –аутоиммунные заболевания, острый Т-лимфобластный лейкоз, тимома.

CD4/CD8 (ИРИ) снижен – вирусные инфекции (герпес, корь вирусный гепатит, инфекционный мононуклеоз, ВИЧ/СПИД), хронические заболевания, опухоли, множественная миелома. Величина ИРИ менее 1 косвенно соответствует иммунодефициту.

Натуральные киллеры (НK-клетки, CD16CD56)

НK-клетки – большие гранулярные лимфоциты, лизирующие клетки - мишени, инфицированные вирусами, внутриклеточными возбудителями, а также мутантные и опухолевые клетки, без специфического распознавания, необходимого для Т-киллеров.

Уровень НK-клеток (CD3+-CD16+CD56+) повышен – острый воспалительный процесс, бронхиальная астма, злокачественные новообразования, лейкоз.

Уровень НK-клеток (CD3-CD16+CD56+) снижен – врожденные иммунодефициты, паразитарные инфекции, аутоиммунные заболевания, опухоли, стресс, прием цитостатиков и кортикосероидов.

НКТ-клетки (CD3CD16CD56)

НKТ-клетки имеют рецепторы, как НK-клеток, так и Т-лимфоцитов. Осуществляют регуляторную функцию, синтезируя цитокины.

Уровень (CD3+ CD16+ CD56+) повышен – при острых тяжелых воспалительных процессах, онкологических заболеваниях.

Уровень (CD3+ CD16+ CD56+) снижен – при аутоиммунных заболеваниях.

В-лимфоциты (CD19,CD20)

Уровень СD19+,CD20+ повышен – бактериальные и паразитарные инфекции, ВИЧ-инфекция; хронический В-лимфолейкоз, аутоиммунные заболевания (СКВ, ревматоидный артрит); бронхиальная астма.

Уровень СD19+,CD20+ снижен – гипо- и агаммаглобулинемии (врожденные и приобретенные); лимфолейкозы, лимфомы не В-клеточного типа; спленэктомия; прием иммунодепрессантов.

Содержание сывороточных иммуноглобулинов у здоровых людей (г/л)

Возраст IgG IgA IgM
пуповинная кровь 6,5-14,0 0,01-0,04 <0,25
до 1 мес. 2,5-9,0 0,02-0,5 0,2-0,8
1-6 мес. 2,0-7,0 0,1-0,8 0,25-1,0
6-12 мес. 2,2-9,0 0,18-0,9 0,35-1,50
1-3 года 2,9-12,0 0,33-1,43 0,55-1,76
3-7 лет 4,6-12,4 0,58-2,01 0,64-1,76
7-16 лет 6,5-16,0 0,80-3,19 0,63-1,72
Взрослые 6,5-16,0 0,55-2,50 0,60-4,05

Иммуноглобулин М (IgM)- белок глобулиновой природы, молекулярной массой 900 кДА, синтезируемый В-лимфоцитами преимущественно при первичном контакте с антигеном.

Иммуноглобулин М образуется через 3-6 дней после взаимодействия с антигеном и осуществляет основную защиту организма при бактериемии. Не проникает через сосудистую стенку, плацентарный барьер.

Уровень IgM повышен – ранние стадии вирусных, бактериальных или паразитарных инфекций; внутриутробные инфекции; болезни печени (гепатит, цирроз); аутоиммунные заболевания, миеломная болезнь; острый и хронический лимфолейкоз.

Уровень IgM снижен – первичные иммунодефициты с нарушением гуморального звена,гастроэнтеропатии с потерей белка, ожоговая болезнь, множественная миелома IgG или IgA-типа, спленэктомия, иммуносупрессивная терапия.

Иммуноглобулин G (IgG) –белок глобулиновой природы молекулярной массой 150 кДА, синтезируемый В-лимфоцитами в ответ на антигенный стимул. При первичном инфицировании появляется через 8-14 дней и осуществляет защиту организма от возбудителей и их токсинов.IgG проникает через сосудистую стенку и плаценту.

Уровень IgG повышен – затяжные, хронические и рецидивирующие инфекции, аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, СКВ, болезнь Шегрена), болезни печени (гепатиты, циррозы), злокачественные новообразования, множественная миелома IgG-типа, доброкачественная парапротеинемия.

Уровень IgG снижен – первичные иммунодефициты с нарушением гуморального звена, гастроэнтеропатии с потерей белка, ожоговая болезнь, нефротический синдром, множественная миелома IgA или IgM-типа, спленэктомия, иммуносупрессивная терапия.

Иммуноглобулин А (IgA) - белок сыворотки крови и секретов слизистых оболочек с молекулярной массой 160 кДА, синтезируемый В-лимфоцитами в ответ на антигенное воздействие. Появляется через 15-21 день после контакта с антигеном, преобладает в выделениях слизистых (слюна, слезная жидкость, носовой секрет, пот, бронхиальный секрет), где обеспечивает защиту от возбудителей, пыльцевых и пищевых аллергенов.

Уровень IgA повышен – хронические инфекции органов пищеварения и дыхательных путей, опухоли нижних отделов ЖКТ, аутоиммунные заболевания (на ранней стадии), множественная миелома IgA-типа, болезни печени (гепатит, цирроз), остеосаркома, миеломная болезнь, муковисцидоз.

Уровень IgA снижен – врожденные дефициты с нарушением гуморального звена, хронические и рецидивирующие заболевания респираторного тракта, гастроэнтеропатии с потерей белка, ожоговая болезнь, нефротический синдром, множественная миелома IgG и IgM-типа, спленэктомия, иммуносупрессивная терапия.

Иммуноглобулин Е (IgE) –белок сыворотки крови и секретов слизистых оболочек с молекулярной массой 200 кДА. Синтезируется В-лимфоцитами в ответ на антигены внешней среды (домашняя пыль, пыльца растений, инфекционные агенты, пищевые продукты и т.д.) и вызывают аллергические реакции немедленного типа.

Определение общего IgE показано при подозрении на болезнь Джоба (синдром гипер IgE), при аллергических заболеваниях атопического генеза, паразитарных инфекциях.

Таблица

Тесты I уровня

Комплемент – система сывороточных белов крови, каскадная активация которых приводит к лизису бактерий, собственных инфицированных клеток, разрушению иммунных комплексов. Методы исследования: реакция 50% гемолиза. Норма: 50-140 ЕД/мл.

Отдельные компоненты комплементаМетоды исследования: нефелометрия. Норма: С3 – 0,5-1,2 г/л; С40,2-0,5 г/л.

Активность общего комплемента повышена – острые инфекции, чаще бактериальные, опухоли, аутоиммунные заболевания, бактериальный эндокардит.

Активность общего комплемента снижена – тяжелые болезни печени, бактериальные и вирусные инфекции, септические состояния, аутоиммунные заболевания, опухоли, тяжелая травма, ожоги, иммуносупрессивная терапия.

Содержание С3 повышено – острые инфекции, опухоли, активная фаза аутоиммунных заболеваний, сахарный диабет, тиреоидит, холестаз, желчнокаменная болезнь.

Содержание С3, снижено – наследственная недостаточно­сть образования, тяжелые заболевания печени, хронические инфекции, болезни ИК ( гломерулонефрит, СКВ, ревматоид­ный артрит, бактериальный эндокардит), нарушение белкового питания, ДВС, грамотрицательная бактериемия, ожоги, гастроэнтеропатии.

Содержание С4 повышено – опухоли.

Содержание С4 снижено – врожденный дефицит, СКВ, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, наследственный ангионевротический отек, ожоги, энтеропатии с потерями белка, иммуносупрессивная терапия.

Тесты II уровня

Цитокины – белковые продукты активированных клеток иммунной системы. Обуславливают межклеточные взаимодействия при иммунном ответе, воспалении, гемопоэзе. Метод исследования: ИФА.

Клиническое значение. Определение цитокинов в секретах позволяет оценить активность инфекционного, аллергического и аутоиммунного воспаления. Длительная продукция провоспалительных цитокинов (ФНО, ИЛ1, ИЛ6) поддерживает хронический воспалительный процесс, вызывая разрушение органа и разрастание соединительной ткани. Изменение активности цитокинов в плазме крови свидетельствует о развитии системной воспалительной реакции. Определение синтеза цитокинов отдельных семейств позволяет диагностировать нарушения иммуногенеза, кроветворения, противоопухолевой резистентности, обмена веществ.

 

Таблица

Содержание цитокинов в сыворотке крови у здоровых людей (пг/мл)

 

ИЛ1α ИЛ1β ИЛ2 ИЛ4 ИЛ6 ИЛ8 ИЛ10 ФНО ИФα ИФγ Г-КСФ М-КСФ ГМ-КСФ
0-50 0-50 0-50 0-50 0-50 0-50 0-5 0-50 0-10 10-100 1800-7000 10-100

 

 

 

 

Занятие. Иммунограмма в клинической практике

Организация иммунологической лаборатории.

Показания к назначению иммунологического обследования.

Иммунодиагностика нарушений фагоцитоза, клеточного звена иммунитета, синтеза иммуноглобулинов.

Цель иммунодиагностики –идентификация нарушенного звена иммунной системы, от которого зависит развитие данного заболевания.

Иммунограмма – набор тестов, позволяющих оценить различные звенья иммунной системы.

Выделяют четыре группы заболеваний иммунной системы, при которых показано иммунологическое обследование:

ü иммунодефициты;

ü аутоиммунные заболевания;

ü аллергические заболевания;

ü лимфопролиферативные заболевания.

Наибольшее значение иммунодиагностика имеет при иммунодефицитах, которые подразделяют на первичные и вторичные.

Первичные иммунодефицитывозникают при наличии в организме генетического дефекта. В соответствии с критериями ВОЗ к настораживающим признакам первичных иммунодефицитов относят:

1. наличие семейного анамнеза, факты ранних смертей от тяжелых инфекций;

2. частые отиты (8 и более в течение года);

3. тяжелые синуситы (2 и более в течение года);

4. пневмонии не менее 2 раз в год;

5. длительное применение антибиотиков (в течение 2-х месяцев и более за год);

6. осложнения при вакцинации живыми вакцинами;

7. отставание в росте и развитии грудного ребенка;

8. рецидивирующие глубокие абсцессы кожи или внутренних органов;

9. не менее двух тяжелых инфекций в год (менингит, остеомиелит, сепсис);

10. персистирующий кандидоз кожи и слизистых а течение 1 года;

11. гастроэнтерологические расстройства в раннем детском возрасте;

12. рецидивирующие системные инфекции, вызванные атипичными микобактериями.

 

Вторичные иммунодефициты делят на приобретенные (ВИЧ) и индуцированные.

Вторичные иммунодефициты развиваются у детей и взрослых с исходно нормальной иммунной системой на фоне иммуносупрессивных воздействий:

ü применение иммунодепрессантов, кортикостероидов, моноклональных антител;

ü болезни обмена: уремия, сахарный диабет, гиповитаминозы, гипотрофия, нефротический синдром;

ü хирургическая патология: спленэктомия, ожоги, анестезия;

ü инфекции: ВИЧ, инфекционный мононуклеоз, врожденная краснуха, ЦМВИ, тяжелые бактериальные инфекции,

ü прочие причины: СКВ, хронический гепатит, цирроз печени, прием противосудорожных препаратов.

Подозрение на вторичные иммунодефициты возникает при наличии у пациента хронических или рецидивирующих инфекций бронхолегочной системы, придаточных пазух носа, ЖКТ, кожи, мягких тканей, нередко вызванных условно-патогенными микроорганизмами.

В соответствии с российскими рекомендациями (Р.В. Петров, Б.В. Пинегин, 1984, 2014 гг) все методы иммунодиагностики разделены на тесты I и II уровня. Тесты I уровня направлены на идентификацию грубых дефектов иммунной системы и позволяют осуществить диагностику основных первичных иммунодефицитов. Тесты II предназначены для углубленного изучения функционального состояния иммунной системы и применяются для выявления причин вторичной иммунной недостаточности. При этом их объем для каждого конкретного случая должен быть строго индивидуален.







Последнее изменение этой страницы: 2016-04-07; Нарушение авторского права страницы

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.232.125.29 (0.018 с.)