Установление специфичности в тестах «Количественное определение»

Титриметрические методы. Главным является то, что растворители и сопутствующие компоненты не должны вступать в реакцию с титрантом, кроме того необходимо убедиться в специфичности индикатора. При анализе конкретных объектов следует приготовить модельную смесь и провести её титрование. Поскольку, в ряде случаев, затрачивается часть титранта на взаимодействие с растворителем, проводится контрольный опыт. На основании полученных данных принимается решение о специфичности методики.

Результаты анализа:

К 1 мл трех модельных смесей добавляем по 10 мл 0,1 М раствора йода,10 мл 1% NaOH, на 10-15 мин оставляем в темном месте, затем добавляем по 10 мл серной кислоты разведенной, и титруем в присутствии крахмала, раствором тиосульфата натрия до перехода окраски от синего до бесцветного.

Модельная смесь №1(полный состав) - наблюдали переход окраски. На титрование пошло 5 мл титранта.

Модельная смесь №3(соляная кислота) - наблюдали переход окраски. На титрование пошло 10 мл титранта.

Контрольный опыт. В мерную колбу добавили 10 мл воды очищенной, 1-2 капли соляной кислоты, затем 10 мл йода 0,1М и 10 мл натрия гидроксида 1%, поставили в темное место на 10-15 мин. После этого добавили 10 мл серной кислоты разведенной и титровали в присутствии крахмала раствором натрия тиосульфата. На титрование пошло 10 мл титранта.

Заключение: Так как на титрование 10 мл раствора модельной смеси № 3 пошло столько же титранта, как и в контрольном опыте, то можно сделать вывод о том, что в данной модельной смеси отсутствует титруемое вещество. Это в свою очередь свидетельствует о том, что растворитель (кислота хлористоводородная) не мешает определению глюкозы методом обратной йодиметрии, и данная методика количественного определения глюкозы является специфичной.

 

2.2. Валидационная оценка методик титриметрического анализа раствора глюкозы для инъекций по показателю «Линейность»

Линейность – прямопропорциональная зависимость количества вещества от результата.

Методика:

1) Готовят 5 растворов различной концентрации;

2) Проводят количественное определение;

3) По полученным данным строят градуировочный график;

4) Визуально оценивают линейность.

Если линейность установлена, результаты испытаний оценивают соответствующими статистическими методами:

-Рассчитывают уравнение градуировочного графика

y=bx+a,

y-величина сигнала;

x-концентрация;

b-угловой коэффициент;

а-свободный член.

Значения параметров a и b вычисляются методом регрессионного анализа. В настоящее время пользуются соответствующими компьютерными программами (например, Excel).

Основной характеристикой линейности является коэффициент корреляции — мера взаимосвязи измеренных явлений. Коэффициент корреляции (обозначается «r») рассчитывается по специальной формуле:

-Рассчитывают значение коэффициента корреляции (r), который указывает на наличие или отсутствие линейной связи между x и y. Если r≥0,99 – методика линейна; если r<0,99, то необходимо: 1-повторить методику, 2-изменить параметры методики.

Точную навеску СО глюкозы (0,500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят растворителем до метки (раствор А).

В колбы для титрования последовательно вносят 5,0; 10,0;15,0; 20,0;25,0 мл раствора А, прибавляют в каждую по 15 мл 0,05 М раствора иода, 3 мл 10% раствора натрия гидроксида, закрывают склянку пробкой и оставляют на 5 минут в темном месте. Затем прибавляют 6 мл кислоты серной разведенной и титруют 0,1 М раствором натрия тиосульфата до обесцвечивания раствора (индикатор - крахмал).

1 мл 0,05 М раствора иода соответствует 0,0099 г водной глюкозы.

Параллельно проводят контрольный опыт. Результаты вносят в таблицу 3.

Таблица 3. – Результаты титрования

Навеска 0,5% раствора глюкозы, мл	5,0	10,0	15,0	20,0	25,0
Содержание глюкозы в навеске, г	0,025	0,05	0,075	0,1	0,125
V(I2)-V(Na2S2O3), мл	4,0	5,2	6,2	6,8	7,5

 

Строим градуировочный график:

С,г

График 1. Зависимость объема титранта от концентрации.

Рассчитываем коэффициент корреляции:

r=0,992513

Заключение: Таким образом результаты оценки методики показывают, что зависимость объема титранта от концентрации глюкозы в растворе является линейной.