Характеристика компонентов, сущность техники постановки и учет РСК. Контроли реакции.

-для обнар-ия спец-их АТ в исслед. сыворотке по извест. АГ или наоборот. Широко примен. для диагнос-ки: бруцеллеза, сапа, чумы КРС, ящура.Участвуют 2 системы: Бактериолитическая(БС): Антитела (исслед. сыворотки или диагност-ой), Антиген, Комплемент (комплекс белков, актив-ся при наличии комплекса АГ+АТ = лизис АГ, предварительно его титруют). Гемолитическая(ГС): Гемолизин (сыворотка кролика, иммунизированная эритроцитами барана, содержащая АТ к ним), лизирует эритроциты ТОЛЬКО в присутствии комплемента(К), Эритроциты барана (АГ для гемолизина)

Условия: разрушить комплемент сыворотки нагрев. в бане, сначала БС а потом ГС, компоненты перед р-ей титруют, исслед. сыв. в рав-ии 1:5 и 1:10

Сущность: Если в БС образуется комплекс АГ+АТ, то К связывается с ним, и для ГС не остается К = задержка гемолиза эритроцитов

Полож. - эритр. в взвеси, жидкость мутная, потом они оседают, прозрач. жидк.

Отриц – К идет на ГС – эритроциты гемолизируются = жидк. прозрач, красная – лаковая.

Титр гемолизина – максим. разведение, при кот. он, в присут-ии опт. К, способен полностью лизировать эритр. за 10 мин 37-38С

Титр комплемента –его миним. кол-во, вызыв. полный лизис эритроцитов в проб. с отриц. сывороткой и АГ, и с полож. сывор. без. АГ, в теч 20 мин 37-38С.

Контроли реакции: 1) отриц. сыворотка в раз 1:5 и 1:10 с АГ и без 2)полож. бруцеллезная сыворотка с АГ и без 3) ГС

Учет оценивается в плюсах, учитывается цвет надосадочной жидкости и наличие осадка из эритроцитов.

Сущность техники постановки, учет и контроли РА.

Агглютинация – склеивание микробных тел в результате специфического взаимодействия АГ и АТ, которые оседают на дно пробирки, обр. осадок «зонтика». Для диагностики бруцеллеза, сальмонеллеза, лептоспироза, листериоза, колибактериоза.

2 компонента: агглютиноген и агглютинин = осадок агглютинат

РА на стекле а) на обезжир. стекло +исслед-ую сыворотку и смеш. с каплей АГ б) на обезж. пред. стекло + каплю физ. р-ра, туда бак. петлей +культуру с плотной пит.среды + капля полож-ой сыв-ки. Положит: когда когда АГ исслед. культ. спец-ны АТ имм-х сыв-к – появл-ся хлопья агглютината Отриц-я: при несоотв-вии равном-ое помутнение взвеси. Контроли: 1) физ. р-р +полож. сывор-ка 2)физ. р-р+АГ-диагн-ум 3) АГ-диаг +полож. сывор-ка.

Кольцевая с молоком: на благоп. стад по бруцеллезу, оценка молока. Цветной бруц-ый АГ, молоко, полож-ая бруцел-я сыворотка. В пробирки с молоком 2 см2, вносят АГ 0,1см2, перемешивают, в термостат 37-38С на 1 час. Контроли: 1) молоко здоровой коровы+цветной бруц. АГ 2) молоко здоровой коровы в смеси с полож. сыв-кой +цвет. бруц. АГ.

Учет: +++ синее кольцо, остальное белое; ++ достат. выраж. синее кольцо; +синее кольцо слабо, столбик синий; - весь столбик раномерно синий, сливки белые

Сущность техники постановки, учет и контроли РП.

Осадочная р-я. Участвуют преципитиноген и преципитин = осадок преципитат.

Кольцепреципитация для диагности сиб. язвы. АГ от павших жив, биофабричный АГ, станд сибиреязвенная сыв-ка. Метод наслаивания -в проб. добавляют сибиреязв. сыв-ку и осторож. наслаив-т исслед. АГ (или метод подслаивания)

Контроли: 1)с полож. сыв+станд. АГ 2) с полож. сыв+физ.р-р 3) с полож. сыв+экстракт тканей здоров. жив.

Полож: серо-белый диск на границе. Отриц: прозрачная граница.

Метод флуорохромирования и метод флуоресцирующих антител (МФА) при диагностике бактериальных инфекционных болезней. Сущность и техника.

Основан на способности объекта светиться при пропускании через него пучка УФЛ. Для окрашивания используют флюорохромные красители (ауромин, родамин G, ФИТЦ). Повышается контрастность и облегчаетя обнаружение возбудителей. Метод окраски по Бойю для обнар. туберк. палочки. Добавляют смесь аурамина с родамином, нагрев 3-4 мин, слив, обесцвеч. 10-15 мин 3% р-ом хлористоводородного спирта, промыв, КMnO4 20-30сек, слив, докраш. 1% р-ом метилен. синего, промыв, суш. На темном фоне оранж. свеч. туберк.

МФА – микроскопическое исследование иммун. комплекса, с использ-ем АТ к которому присоединяют флюорохром = светятся в УФЛ. Микробный АГ фиксир. на пред. стекле, обрабатывают люминисцентными АТ, промывают, микроскопируют в люмин. микроскоп. Если АТ соответствуют, то прочно прикрепляется к АГ.