Дробная стерилизация (тиндализация) и пастеризация.

Тиндализация, или дробная стерилизация, была предложена в 1877 г. Дж. Тиндалем. Она применяется для сред, портящихся при действии температур выше 100 °С. Тиндализацию осуществляют текучим паром в автоклаве с незавинченной крышкой или в кипятильнике Коха. Среды прогревают несколько раз по 10-15 мин. Между прогреванием среды ставят в термостат при температуре 30°С на 8-12 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100°С, прогревают более осторожно: при 60-80°С через каждые 8-12 ч 4-5 сут подряд.

Однократный прогрев материала при температуре ниже 100 °С известен под названием пастеризация. Этот ме­тод, предложенный Пастером, пред­назначен для уничтожения только бес­споровых форм микроорганизмов. Сле­довательно, в подавляющем большин­стве случаев он не обеспечивает сте­рильности. Пастеризацию проводят при 60 — 80 °С в течение 10 — 30 мин. Пасте­ризацию используют в пищевой про­мышленности для обработки молока, фруктовых соков, вина, пива и др.

 

шкафов имеется также отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены тер­морегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой тем­пературы. Подготовка посуды к стерилизации. Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением. В верх­ние концы пипеток вставляют ватные тампоны. Торчащие из пипеток волокна ваты сжигают в пламени горелки. Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4 — 5 см. Обмотку начинают с оттянутого конца и постепен­ным движением бумаги по спирали заканчивают у конца с ватным тампоном. Завернутые пипетки для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов перед стерилизацией упаковывают по несколько штук вместе или помещают в спе­циальные металлические или картонные пеналы. Чашки Петри обычно завора­чивают в пакеты по 2 —4 штуки, шпатели — по отдельности, но затем, как и пипетки, их объединяют в общий сверток. Колбы, пробирки и трубки Бурри закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли. Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в сте­рилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого ма­териала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за темпера­турой, так как при ее понижении не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 180 °С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилиза­ции шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 °С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материа­ла, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего выгружать по­суду, когда температура в стерилизаторе сравняется с комнатной. Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла (см. табл. 4.2). Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виду, что в автоклаве посуда увлажняется. 4.3. СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели — стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрас­на) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно об­жигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

Таблица 4.4

Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов

 

Стерилизуемый материал	Метод стерилизации	Режим стерилизации	Примечание
Питательные среды с почвен­ной вытяжкой; картофельные и некоторые другие натураль­ные среды	Автоклавирование	1,5—2,0 ати; 30 мин	В колбах, пробир­ках, бутылях и т.д., закрытых ватными пробками
Жидкие и агаризованные сре­ды, не содержащие Сахаров и других веществ, разлагающих­ся при 120 °С	То же	1,0 ати; 20 мин	То же
Жидкие и агаризованные сре­ды с сахарами и другими сое­динениями, не выдержи­вающими нагревания при 120 °С	»	0,5 ати; 15 — 30 мин	»
Среды или компоненты сред, не выдерживающие нагре­вания выше 100 °С	Дробная стерилизация	Текучий пар; Зраза по 30 — 40 мин через сутки	»
Среды или компоненты сред, не выдерживающие нагрева­ния (белки, некоторые вита­мины и аминокислоты)	Фильтрование через бакте­риальные филь­тры
Вазелиновое масло, глицерин, тальк	Горячий воздух	160 °С; 2ч или 170°С; 1 ч	Слой вещества в сосуде не должен превышать 1,5 см
Чашки Петри, пипетки, шпатели	То же	160-170 °С; 2ч	Завернуты в бумагу (отверстия пипеток закрыты ватными тампонами)
Колбы, пробирки, химиче­ские стаканы, флаконы, стеклянные центрифужные пробирки, трубки Бурри	»	160-170 °С; 2ч	Закрыты ватными пробками
Шприцы	Горячий воздух	160 °С; 1 ч	Разобраны и завер­нуты в бумагу или ткань
Автоклавирование	1 ати; 15 — 20 мин	Разобраны и завер­нуты
Мембранные фильтры	Автоклавирование	1 ати; 15 — 20 мин	В сосуде с дистиллированной водой
Кипячение	30 мин	То же

 

Стерилизуемый материал	Метод стерилизации	Режим стерилизации	Примечание
фильтры Зейтца	Автоклавирование	1 — 1,5 ати; 20 — 30 мин	Цилиндр держателя закрыт ватной проб­кой, в отводной трубке ватный там­пон
Горячий воздух	160 °С; 1 ч	Верхняя часть завер­нута в бумагу
Свечи Шамберлана и Беркефельда	Автоклавирование	0,5—1 ати; 20—30 мин	Можно вместе с дер­жателем
Горячий воздух	160-170 °С; 2ч	Закрыты ватными пробками, завернуты в бумагу
Стеклянные фильтры с держателем или отдельно	Автоклавирование	1 ати; 30 мин	Закрыты ватными пробками, завернуты в пергамент и алю­миниевую фольгу
Стеклянные фильтры без резиновых пробок	Горячий воздух	1 ати; 30 мин	Завернуты в бумагу
Центрифужные пробирки, изготовленные из термо­лабильных пластмасс	Газовая стерилизация	Зависит от применяемого биоцида	—
Ультрафиолетовые лучи	Время экспо­зиции устанав­ливают экспе­риментально	Пробирки после облучения хранят в стерильной посуде