Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Предмет и задача молекулярной биологии, её значение для практики. История развития молекулярной биологии.Стр 1 из 12Следующая ⇒
ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ И ОСОБЕННОСТИ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ЖИВЫХ СИСТЕМ. ЖИЗНЬ. ОСНОВНЫЕ ПРИЗНАКИ ЖИВОГО. Жизнь -это способ существов-я открытых саморегулирующихся и самообр-ся систем на основе биохим. взаимод. белков, НК, АК и др. соединений и преобразования поступающих из внешней среды в-в и мол-л. Основн. признаки жив.сист: · Обмен в-в и Е с окруж.сред · Рост · Размножение · Раздражимость · Изменчивость Каждый из признаков в отдельности может быть присущ и нежив. сист. Живые сист. облад. всеми признаками в совокупности. Наименьшая единица – клетка. Общие принципы организации живых систем. 1. Большинство хим. комп-ов жив.сист. представл. собой орг соед-я,(т.е соед. С в которых атомы связываются др.с др., а так же с H,O, N). С, О, Н,N- более 90% массы жив.сист. 2. Орг. соед. Вход-ие в состав жив. сист. Разнообразны. Наибольшим разнообразием отлич белки и НК. (Пр-р: киш палочка насчитыв 5000 различ орг соед-ий, из них 3000-белков, 1000-НК, 1000- др орг соед-я. У ч-ка 50.000 разновидностей белков). 3. Разнообр. органич. соед. построены из большого колич-ва мономеров (Пр-р в сост. белков -20 различ.АК). Их различ. комбинации дают неограниченное число вариаций белков, НК. 4. Идентичность каждого вида и каждой особи сохран. благодаря наличию свойственных только им наборов белков и НК. 5. Все биомол-лы в кл-е выполн спецефич.ф-ции. 6. Живые орг-мы создают и поддерж. присущую им упорядочность за счет Е, поступающей из внеш.сред. при этом степень упорядоченности внеш.сред.уменьш (энтропия растет). 7. Живые орг-мы как преобраз-ли Е подчиняются законам термодинамики.
I закон сохран. и превращ. Е.- Е не куда не исчезает, не возник.заново, она может первращ. из одного вида в другую. II закон теплота не может самопроизвольно передаваться от более холодного к более теплому. Особенности жив.систем как преобразователей Е 1. Построены из сравнительно хрупких мол-л, не способных выдерж. высокую t, p, pH. 2. Не могут использ. тепло как источник Е и функционируют при постоянной t. 3. Для осущ. жизнедеят. использ. хим. Е 4. При образовании Е ключевую роль играют ф-ты, котор. выступают в качестве катализаторов хим.р-ции и сниж. их энергию активации. 5. Энергетические потребности всех жив.орг. прямо или косвенно удовлетв-ся. солнечной Е.
СТРОЕНИЕ ДНК. МОДЕЛЬ УОТСОНА-КРИКА ДНК - гетерополимер, мономерами, кот. явл. нуклеотиды. Полимеры – в-ва молекулы кот. сост. из повторяющихся, одинаковых или сходных струк-х ед. (000000-полимер, 0-стр-я ед. мономер). Биополимеры: гомополимер (из одинак. мономер крахмал, целлюлоза); гетерополимер (из разных мономер). В состав ДНК входит 4 нуклеотида: А,Г (пуриновые нукл.); Ц,Т (пиримидиновые нукл.) Разл. нуклеотиды отлич. друг от друга только различ. строением азотистого основания. Полусхематич. строения нукл. 1) пуриновые АзотОснов - производные пурина 2) Пиримидиновые АО – производные пиримидина Нуклеотиды способны соед. др. с др. при помощи фосфодиэфирных связей и образ-ть полинукл. цепочки. Правило Чаргаффа. 1.Суммарное кол-во пуриновых нукл. ДНК суммарному кол-ву пиримидиновых SА+Г=SТ+Ц 2.Количество А=Т, а кол-во Г=Ц. Формы ДНК В –форма хар-на для живых систем ин виво. правозакручена А – форма образ-ся при транскрипции, один виток 11 п.н. С – форма, один виток – 9 п.н. правозакручена Z – левозакручена. Получена искусственно при высокой концентрации солей. По А образ. набор фрагментов 32Р – 1 нуклеотид 32Р АГЦТ – 5 нуклеотидов 32Р АГЦТАГТЦТ– 10 нуклеотидов По Г образ. набор фрагментов 32Р А – 2 нуклеотида 32Р АГЦТА – 6 нуклеотидов 32Р АГЦТАГТЦТА–11 нуклеотидов
По Т образ. набор фрагментов 32Р АГЦ – 4 нуклеотида 32Р АГЦТАГ – 7 нуклеотидов 32Р АГЦТАГТЦ–9 нуклеотидов
По Ц образ. набор фрагментов 32Р АГ – 3 нуклеотида 32Р АГЦТАГТ – 8 нуклеотидов 32Р АГЦТАГТЦТАГ –12 нуклеотидов калибровочная дорожка, отраж. число нуклеотидов Чтение электрофолаграмы осущ. от + к - (снизу вверх). + соответствует 5’-концу фрагмента ДНК. 5’ АГЦТАГТЦТАГЦ 3’
Метод Сенгера (ферментативный метод) Метод основан на остановке ферментативного синтеза ДНК при помощи дидезоксинуклеотидов (gg)
Ген – ед-ца функции. 2) Ген мутирует как единое целое и представляет собой единицу наследственной изменчивости. Ген – ед. Мутации. 3) Ген занимает опр участок локус на хромосоме и явл предельной единицей рекомбинации и не разделим далее посредствам кроссинговера.
Ген (по Моргану) ‒ мельчайшая, далее неделимая единица наследственности, представляющая собой ед ф-и, мутации, рекомбинации. В 50 годы 20 века начали накапливаться данные о делимости гена. Возник вопрос о том, каковы пределы делимости гена. Ответ на этот вопрос был получен в работах с. Бензера выполненных на бактериофаге Т4. Жизненный цикл бактериофага! У фага Т4 имеется условно-летальная мутация. r2 (от англ rapid-lisis – быстрый лизис). Фаги выращиваются на бактериальном газоне. r2 условно летальная мутация – мутация r2: - не растут на E.Coli, штамм К12; - растут на E.Coli, штамм В. Этапы работы Бензера по изучению тонкой структуры гена: 1) Получение большого кол-ва независимых мутаций по гену r2+ (r2+→ r2). Около 2 тыс независимых мутаций. 2) Проведение для этих мутаций функц-ого теста на аллелизм (цис-транс-тест), путем совместного заражения различ-ми мутантами культурами E.Coli, К12. Имеется рост фага на E.Coli, на К12 произошла комплементация, в результате чего фенотипически проявляется r2+. Если отсутствует рост – комплементация отсутствует. * - мутация. В результ этого этапа было установлено, что ген r2+ имеет 2-е группы комплементации.
Вывод: Ген не явл единицей ф-й, единицей ф-й явл часть гена, котор получ название – цистрон. Цистрон – функциональная часть гена, в пределах котор выполняется цис-транс-тест, явл единицей ф-й. Ген – кодирует белок. Цистрон – кодирует 1 ППЦ. Белок кодируется 4 цистонами.
3) Рекомбинационное картирование мутации. Рекомбинация – обмен участками между молекулами ДНК. Также осуществляется путем совместного заражения E.Coli различными мутантами относящихся к одному цистрону r2А или r2В. Частота рекомбинации явл мерой расстояния между точкой мутации. rf (от латинского recombination fregyency); rf= * 100 Минимальная частота рекомбинации – 0,02%; Общая длина рекомб карты (фага) – 1500%; Общее число фагов нуклеотидов (Т4) -1,8 * 105; Единица рекомбинации = *1,8 * 105 = 2,34 нуклеотида;
Вывод: Единица рекомбинации =2 нуклеотида и она получ название 1 рекон. РЕАЛИЗАЦИЯ ГЕН-Й ИНФ-И (ГИ) И ЕЕ ПРОСТРАНСТВЕННЫЕ ОСОБЕННОСТИ У ПРО- И ЭУКАРИОТ. ЦЕНТРАЛЬНАЯ ДОГМА (ЦД) В МБ. Реализация ГИ – перенос информации о первичной стр-ре белка от мол-л ДНК через ряд промежуточных этапов к синтезированным белковым молекулам. Впервые путь такого переноса был установлен в 1958г. Ф Криком. Он выражается в виде схемы: ДНК à РНКà Белок Данная схема получила название ЦД молекулярной биологии. Формулировка «ЦД»: перенос генетической информации в живых системах осуществляется в одном направлении, а именно от ДНК к РНК, а затем к белку. Эволюция представлений о путях переноса генетической информации: 1) Схема Ф. Крика ДНКà РНК à Белок 2) Схема отражающая основные матричные процессы: Схема циклов роботы рибосом
Этапы элонгации: 1. Реак-ия транскриптидирования – перебрасыв-ие п.п.ц с тРНК1 на тРНК2, бораз-ие пептидной связи. 2. Раек-ия транслокации – перемещ-ие рибосомы вдоль мол-лы иРНК на 1 кадон вправо, переход пептидил тРНК из А центра в Р центр, поступл-ие в А центр нового кадона, освобож-ие тРНК1. 3. Присоединение новой аминоацил тРНК к А центру рибосомы – поступ-ие в А центр рибосомы новой аминоацил тРНК(3), в соответ-ии с принципом компл-ти кадон – антикадон.
В элонгации принисают участие белковые факторы элонгации без кот. не происходит ее действие (у прокариот: EF – Tu, EF – Ts. EF – G. у эукариот: EF1, EF2). Процессинг синтезир-ой белковой мол-лы – процесс ее созревания. Он включает след-ие этапы: - модификация N и C концов – отсоединение некот-го колич-ва АК. - обр-ие дисульфидных мостиков, препят-их денатурации
МГЭ прокариот Началу изуч. МГЭ положило открытие в конце 60-х г., необычных мутантов по, общими для этих мутантов были вставки стр-ах, кот приводили к мутациям и были названы Ys – элем-ты. YS – элем-ты обл-ют способ-ю менять свое местоположение на хр-ме, т.е. явл. МГЭ. Им-ся 2 разнов-ти: 1) Ys-элем-ты - их размеры =200-5700 п.н. он хар-ся след особенностями: · На концах несут несовершенные повторы (палиндромы), длиной от нескольких пар до неск. десятков пар нуклеотидов. · Содержат ген кодирующий синтез транспозаза, отвеч. за перемещ. Ys-ов. · При встраивании в др. уч-ки хр-м небольшие дупликации длина 5-11 п.н. (флакирующие Ys-эл-ты). Бакт. Хр. E.Coli несет только Ys-ов в кл перемещ с частотой 10-6-10-8 на клет деление. 2) Tn – элементы (транспозоны) харак. теми же особ., что и Ys кроме гена кодир. транпозазу, они могут переносить гены устойч-ые к антибиотикам. Эти гены могут расп-ся как внутри Tn так и между 2-мя Tn-эле-ми.
МГЭ эукариот Транспозоны Пример: - Ac, Ds у кукурузы, -P- эле-ы у дрозофилы По краям не несут инвентир. повторы, а в центр. част. ген, кодир. синтез фер-та транспозаза. В 1976 г. Гвоздев, Георгиев открыли МГЭ у дрозофилы, кот получили назв Мобильные Дисперсированные Гены (МДГ). МДГ случайно распред. по всему геному и способ. переем-ся с частотой 1*10-5 – 10-8 на поколение. В наст. Время у дрозофилы открыто множество МГЭ кот. Названы терминами обозн. Склонности к переем.: Hobo – бродяга, flea – блоха, магелан бигль Ретротранспозоны Получ. Такое название потому что в их перемещ приним. участие обратная транскрипция (ретро-обратный). Широко распространены у млекоп. сост. более 10% от всей ДНК
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ РЕКОМБИНАЦИЯ Г.Р. - совок. процессов приводящ. к перераспред. нукл. послед-й и в геномах. Явление г.р. было открыто в 1910 г. Т. Морганом на дрозофиле. В частности им был установлен обмен уч-ми между гомолог. хр-ми получ. назв. – кроссинговер ( один из частных случаев рекомбинации). К Г.Р. след. процессы: -обмен уч-ми между молек. ДНК (или РНК) -встраивание уч-в ДНК в опред. места на молек-х ДНК. -комбинирование хр-м при формировании гамет и спор -кроссинговер – обмен уч-ми между гомолог. хр-ми В настоящее время Г.Р. подразд на 2 класса: 1) общая 2) сайт-специфическая(«незаконная») 1. Общая: протекает на основе гомологии рекомбин. уч-в ДНК 2. «незаконная»: для ее осущ. гомологии реком. уч-в Общая рекомбинация Наиболее изученным процессом отн. к общей рекомб. явл. кроссинговер, кот. происх. в профазе мейоза1 у эу-. На этой стадии хр-м сост из 2-х хроматид в обмене уч-т 2 хроматиды из 4, каждая из хроматид содер. 1 мол. ДНК. Молек. мех-м общей рекомбинации на примере кроссинговера В рекомб. уч-т 2 мол-лы ДНК и следующие осн-е белки: -Rec BCD, - Rec A, -SSB
Осн. этапы рекомбинации: 1) Присоед. RecBCD к одной из мол-л ДНК, частич. расплетение 2-ой спирали. 2) Перемещение RecBCD-белка вдоль мол-лы ДНК, поиск сайта рекомбинации (v=300 нукл./сек). Образование разрыва (1-но нитевого) в 1-й из молек-л ДНК эндонуклеаза, т.о. Rec BCD белок действ. одновременно как и геликаза и эндонуклеаза. 3) Удерживание расплетенного уч-ка ДНК в одноцепочечном состоянии (SSB-белки), образ. Т.наз. «уса» перебрасывание «уса» на соседнюю мол-лу, частичное расплет. 2-й спирали, взаимодействие 2-х путей ДНК принад-т разным молек. по принципу комплементарности. Данный этап осущ при участии Rec A-белка 4) Образ. 1-нонитевого разрыва в другой мол-ле (Rec-BCD) формирование гетеродуплекса, уч-ов мол-й гетерозиготности и полухиазм. Полухиазма (стр-ра Холлидея) - место пересеч-я нитей ДНК, принадл-х различ-м мол-м. Уч-ки мол-й гетерозиготности – уч-ки в них одна нить принадл. 1 мол-ле ДНК, а др. др-й. 5) Образ. 2-го однонитевого разрыва в области полухиазм. 6) коррекция уч-в (сайтов) мол-й гетерозиготности: А) 1→2,4 →3; В) 2→3,3→4; С)2→1, 4→3. Коррекция – приведение нукл. состава 1 нити в соотв. с нукл. составом другой. Нереципропный обмен (конверсия генов) – данный мех-м общей рекомбинации был установлен в 1961 г Австралиским ученым Холидеем. Признаки бактерий: 1.Морфологические признаки - форма, окраска, размеры колоний, образуемых бактериальными кл-ми 2. Биохимические признаки – способность (+) или неспос-ть (-) синтезировать определенные в-ва (АК, витамины), а также использ определенные в-ва в кач-ве источника Е (глюкоза, фруктоза, галактоза и др.) Met+ - синтез метионина, met- - неспособность синтезир метионин. Мутанты, не способные синтезировать или усваивать определен в-ва – ауксотрофные мутанты. Признаки устойчивости К температуре t (R – устойчивы, S – чувствительны).
К антибиотикам Основные методы работы с б-ями: Метод разведения 1мл культуры + 9мл среды => в 10 раз => 1мл + 9 мл => в 100 раз и т.д. 4. Метод селективных пит сред Селективные пит среды – минимальн пит среда с добавлением в нее 1го определенного в-ва (АК, витамины). Используется для выявления ауксотрофных мутантов. Селективн пит среды: (-)min + met; (-) min + lus (лизин); (+) min + trp (триптофан). Вывод: мутант не способен синтезировать триптофан. Метод отпечатывания К полной питательной среде прикасаются специальным цилиндром, покрытым бархатной материей, и затем касаются чистой среды. Сохраняется «рисунок» колоний. 29. СПОСОБЫ ПЕРЕНОСА ГЕН.ИНФОРМАЦИИ У БАКТЕРИЙ. ТРАНСФОРМАЦИЯ,МЕХАНИЗМ, ЗНАЧЕНИЕ. 3 осн. способа переноса ген-й инф-ии от одних кл-к к другим: 1. трансформация (при пом.изолир-й ДНК). 2. Коньюгация (путем непосредственного контакта между бакт-ми кл-ми). 3. Трансдукция (при пом бактериофагов. 2 – встраивание ДНК донора в бактер хромосому реципиента путем незаконной рекомбинации. схема опыта Гриффитса. s(гладкий)-вирулентные, R(шероховатый) невирулентные(мутанты) Схема эксп-та Эвери. ВЫВОД:днк является носителем ген-й инф-ии, отвечает за передачу признаков от бактерий шт S к бакт шт.R. МОЛЕК-Й МЕХ-М ТРАНСФ-ИИ. для осущ-я трансф-ии кл-ки рец-ента должны нах-ся в сост-ии компетентности, кот.они приобретают в лаг-фазе роста. ЗНАЧЕНИЕ ТРАНСФ-ИИ: является одним из осн-х способов переноса генов в кл-ки реципиента в генной инженерии.
Схема метода На основе таких опытов строятся генетические карты бактерий. Особенности ген.карты: Имеет кольцевую форму; Меры расстояния между генами является время конъюгации в мин. Общий вид генетической карты бактерий: Общая длинна ген.карты E.Coli 111 мин.
ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧА МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ, ЕЁ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ПРАКТИКИ. ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ. МБ – молодая наука, возникшая на стыке биохимии, биофизики, цитологии, генетики и ряда других биологических наук. ДР – 1938 год. Термин молекулярная биология предложен английским учёным Уивероном. Предмет – структура и функционирование важнейших биологических макромолекул: ДНК, РНК, белков Задачи – изучает: - строение и физико-химическое свойство белков и нуклеиновых кислот - процессы репликации, репарации, рекомбинации молекулы ДНК - принцип и механизмы кодирования информации о синтезе белков на молекулах ДНК и РНК - структура геномов различных организмов от вирусов до млекопитающих - молекулярные механизмы реализации наследственной информации (транскрипция, процессинг, трансляция) - мобильные генетические элементы - строение и функционирование клеточных мембран - молекулярные механизмы старения и гибели клеток Значение МБ для практики: Явл. теоретической основой генной и клеточной инженерии играет важную роль в развитии биотехнологии. Основные направления практического применяются учеными: 1. Биотехнологическое производство различ в-в. 2. Молекулярные подходы в медицине: · Генная терапия (замена дефектных генов на норм) · Диагностика лечения раковых заболеваний · Трансплантология · Культура тканей и органов · Молекулярные механизмы старения. · 3. С/Х-ые: · Получение трансгенных сортов растений и пород животных · Микроклональное размножение разных видов растений. История развития МБ: История изучения ДНК и РНК 1868 – Фридрих Мишер впервые выделил ДНК из ядер погибших лейкоцитов. 1934 – А.Н.Белоозерский впервые выделил ДНК из кл-ок растений. 1934 – Кольцов в своих работах закладывает основы МБ как науки. Основные идеи Кольцова: 1. Матричный принцип репродукции биол-х макромол-л 2. Гипотеза молекулярного строения хромосом 3. Двух нитчатая стр-ра мол-л наследственности 4. Тезис «omnis molecula ex molecula» - каждая молекула из молекул. Предшественники зарождения молекулярной биологии: Н.К. Кольцов и Н.В. Тимофеев-Ресовский. 1935 год – Н.В. Тимофеев-Ресовский опубликовал статью «о природе генных мутаций и молекулярной структуре гена». 1944 год – Э. Шредингер опубликовал работу «Что такое жизнь с точки зрения физики». 1889 год – Альтман предложил термин «нуклеиновые кислоты». 1881 год – Кёссель показал, что в состав НК входит азотистые основания, сахар рибоза/дезоксирибоза и остаток фосфорной кислоты. 1944 год – О. Эвери с сотрудниками впервые доказал, что именно ДНК является носителем генетической информации клетки. 1948 год – Р. Вендерли установил постоянство содержания ДНК в гаплоидном наборе хромосомного вида 1949-51 гг. – Э. Чаргафф устанавливает количественную закономерность – правило Чаргаффа 1952 год – М. Уилкинс и Р. Фронклин впервые провели рентгеноструктурный анализ кристаллов ДНК и показали её спиральную структуру. 1953 год – Дж. Уотсон, Ф. Крик разработали модель строения ДНК – двойная спираль, которая основывалась на правилах Чаргаффа и данных рентгенных анализов. 1962 год – Уотсон, Крик, Уилкинс удостоены Нобелевской премии за открытие структуры ДНК. 1954 год – Г. Гамов – впервые выделил концепцию генетического кода. 1954 год – Г. Стент – предложил 3 модели репликации ДНК – консервативная, полуконсервативная и дисперсную. 1956 год – А. Конберг – впервые открыл и выделил фермент ДНК-полимераза. 1956 год – Ф. Крик предсказал необходимость адаптерной/транспортной РНК. 1961 год – Ф. Крик формулирует центральную догму молекулярной биологии (ДНК -> РНК -> белок). 1961 год – Гро и Шпингельман открыли и-РНК, которая выступает в качестве посредника. 1961 год – Ф. Жакоб и Ж. Моно предложили модель Оперона. 1965 год – Р. Холли впервые поясняет структуру т-РНК. 1969 год – Арвер открывает явление рестрикции – модификации бактерий молекулами рестриктазами. 1970 год – Г. Корана впервые осуществляет искусственный химический синтез гена. 1972 год – Темин и Балтимор открывают явление обратной транскрипции у РНК-содержащих вирусов. 1972 год – П. Берг с сотрудниками конструируют первую рекомбинантную молекулу ДНК – дата рождения генной инженерии. 1973 год – А. Максан и У. Гилберт разрабатывают химический метод определение последовательности ДНК – сиквенирование 1977 год – Ф. Сенвер разрабатывает ферментативный метод сиквенирования. 50-70 -е годы – «Золотой век» МБ 1984 год – Мюллис разрабатывает метод ПЦР. 1999 год – стартует проект «Геном человека». 2001 год – полностью расшифрована структура ДНК 3 человеческих индивидуумов. 2006 – Ямахаба, Топохачи откр явление РНК-интерференции и генный нокаут. · История изучения белков 1728 год – Я. Беккери выделяет первый препарат белкового вещества белкового происхождения 1753 год – К. Нейман выделяет из куриного яйца белок альбумин и открывает явление денатурации 1806 год – Ваклен выделяет первую АК – аспарагин (из спаржи) 1846 год – Мульдер разрабатывает протеиновую теорию белков. 1858 год – Мошне получает первые кристаллы белков Конец 19 века – Фишер разрабатывает пептидную теорию белков., согл кот белки сост из АК, соед пептид связями. 1915 год – У. Брэгг впервые проводит рентгеноструктурный анализ белков и использует его для изучения пространственной стр-ры белков. 30-40 гг. 20 века – Астбери изучает простр-ую структуру фибриллярных белков. 1951 год – Польминг открывает вторич структуру белков 1960 год – Дж. Кендрю изучает 3-мерную структуру меоглобина 1968 год – Перуту изучает 3-мерную структуру гемоглобина.
|
|||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-05; просмотров: 617; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.217.144.32 (0.189 с.) |