Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Создание технологии получения субстанции инсулина человека.
Создание технологии получения субстанции инсулина человека. Основные этапы исследований, положенных в основу технологии производства инсулина, включали: 1) создание штамма-продуцента инсулина; 2) создание технологии получения субстанции ГИЧ; 3) масштабирование процесса и создание опытно-промышленного производства активной фармацевтической субстанции (АФС) инсулина; 4) разработка методов контроля качества и создание стандарта качества (фармакопейной статьи предприятия). Технологический процесс производства субстанции ГИЧ в ИБХ РАН основан на следующей схеме: 1. Получение посевного материала штамма-продуцента (оживление консервированной культуры; выращивание маточной культуры; выращивание инокулята). 2. Биосинтез рекомбинантного белка (РБ) (выращивание продуцента в ферментере (ферментация); получение биомассы (сепарирование); дезинтеграция клеточной суспензии; выделение и отмывка телец включения (центрифугирование)). 3. Выделение и очистка РБ (солюбилизация телец включения и восстановление РБ белка; ренатурация и последующая хроматографическая очистка РБ). Ферментативное расщепление РБ. Хроматографическая очистка инсулина. Получение кристаллов ГИЧ. Создание штамма-продуцента инсулина человека. Перед началом исследований по разработке технологии получения инсулина в распоряжении исследователей был созданный в ИБХ РАН штамм-продуцент E.coli JM109pPINS07, для создания которого была использована рекомбинантная плазмидная ДНК pPINS07 с молекулярной массой 3,3 МДа (5051 п.о.), кодирующая рекомбинантный белок (РБ), в котором последовательность иммуноглобулин-G-связывающего домена В белка А St. aureus соединена через пептидный линкер His6GlySerArg с аминокислотной последовательностью проинсулина человека. Штамм JM109pPINS07 исходно использовался при разработке процесса получения инсулина. Созданная на его основе технология позволяла получить ГИЧ фармакопейного качества с приемлемым выходом, но продуктивность штамма и эффективность очистки все еще оставалась недостаточно высокой. В ходе многочисленных экспериментов исследователями был создан новый штамм E. coli BL07 – продуцент гибридного полипептида с последовательностью проинсулина человека путем трансформации клеток E. coli BL21 плазмидой pPINS07 с помощью электропорации. Полученный штамм E. coli BL21/pLP-3-1, названный E.coli BL07 обладал значительными преимуществами перед штаммами-продуцентами использованными ранее. Это, в частности, возрастание внутриклеточного содержания рекомбинантного препроинсулина человека как следствие инактивации в плазмиде некоторых генов, кодирующих бактериальные белки. Кроме того, в клетках нового штамма отсутствовали продукты деградации предшественника инсулина, затрудняющие его очистку. Хроматографическая очистка инсулина на гидрофобном сорбенте. Финишная очистка инсулина на анионите и гель-фильтрация. Создание технологии получения субстанции инсулина человека. Основные этапы исследований, положенных в основу технологии производства инсулина, включали: 1) создание штамма-продуцента инсулина; 2) создание технологии получения субстанции ГИЧ; 3) масштабирование процесса и создание опытно-промышленного производства активной фармацевтической субстанции (АФС) инсулина; 4) разработка методов контроля качества и создание стандарта качества (фармакопейной статьи предприятия). Технологический процесс производства субстанции ГИЧ в ИБХ РАН основан на следующей схеме: 1. Получение посевного материала штамма-продуцента (оживление консервированной культуры; выращивание маточной культуры; выращивание инокулята). 2. Биосинтез рекомбинантного белка (РБ) (выращивание продуцента в ферментере (ферментация); получение биомассы (сепарирование); дезинтеграция клеточной суспензии; выделение и отмывка телец включения (центрифугирование)). 3. Выделение и очистка РБ (солюбилизация телец включения и восстановление РБ белка; ренатурация и последующая хроматографическая очистка РБ).
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-05; просмотров: 246; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.119.248.48 (0.007 с.) |