Определение общего числа и процента почвенных бацилл.

Этот показатель является индикатором глубины минерализации органического субстрата.

Почвенные разведения 1:10-1000000, предварительно прогретые при 80°С в течение 15 минут, засевают на поверхность МПА, Сабуро или почвенного агара. Инкубирование в термостате 37°С – 24 часа. Учет производится по общепринятой методике.

9. Определение количества грибов и актиномицетов в почве.

Actinomycetales – бактерии, по внешнему виду сходны с мицеллярными грибами. От грибов отличаются строением ядра, клеточной стенки. Бывают подвижные и спорогенные виды. Капсул не образуют. Грамположительные или грамотрицательные. Размножаются с помощью спор. Основная среда обитания почва. Разлагают органические субстраты. Играют важную роль в круговороте веществ и энергии, образовании почвы и ее плодородии. Многие актиномицеты растут на обычных питательных средах: МПА, кровяном агаре. Колонии обычно появляются на 3-4 сутки, воздушный мицелий – на 7-14 сутки. Оптимальная температура роста 25-30°С.

Для учета грибов используют разведения почвенной суспензии 1:10-1:100, а при учете актиномицетов - 1:100-1:10000. Посев производят поверхностным способом, нанося на среду МПА 0,1 - 0,05 мл суспензий. Для учета актиномицетов используется МПА, кровяной агар и др., при учете грибов – среда Сабуро.

Определение аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов.

Данная группа микроорганизмов осуществляет самоочищение почвы от остатков растительного происхождения. Для учета этих микроорганизмов используют посев разведений почвенной суспензии в жидкую среду Гетчинсона. Среда разливается в пробирки, куда в качестве источника углерода помещают фильтровальную бумагу. Разведения почвенной суспензии 1:10-1000000 засевают по 1 мл. Учет производится через 15-20 суток (инкубация при 28°С) по разложению полосок фильтровальной бумаги и образованию колоний микроорганизмов на них.

11. Определение аммонификаторов в почве.

Аммонифицирующие микроорганизмы (протей, псевдомонады, клостридии, актиномицеты и др.) осуществляют ферментацию азотсодержащих органических соединений, превращая их в аммиак и его соли – обязательное и важное звено в круговороте азота в природе. Разведения почвенной суспензии 1:10-1000000 засевают по 1 мл на жидкие пептонные среды (мясо-пептонный бульон, пептонная вода) с индикаторными лакмусовыми бумажками, обнаруживающими аммиак. Для определения выделяющегося аммиака над средой в пробирке подвешивают красную лакмусовую бумажку (при выделении аммиака она синеет) или полоски фильтровальной бумаги, пропитанные реактивом Круппа (от аммиака окрашиваются в красный цвет). При определении этого показателя в жидких средах определяют титр аммонифицирующих микроорганизмов по последней пробирке, в которой еще обнаруживается аммиак (на 10-е сутки) после термостатирования при температуре 25-30°С.

Определение токсичности почв к микроорганизмам.

Метод определения степени токсичности почв к микроорганизмам используется в качестве быстрого и достаточно чувствительного теста для получения ориентировочных данных о самоочищающей способности почвы от патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов.

12.1. Методы определения и оценка степени токсичности почвы.

Степень токсичности почв отдельных территорий оценивается по классам:

отсутствие — 0-20% токсичных образцов;

слабо выраженная —21-40% токсичных образцов;

средняя — 41-60% токсичных образцов;

сильно выраженная — 61-80% токсичных образцов;

абсолютная —81-100% токсичных образцов.

Для определения токсичности почв можно использовать два метода – качественный и качественно-количественный.

Качественный метод.

В стерильную чашку Петри вносится 10 г перемешанной и просеянной почвы и ровным слоем распределяется на половину дна чашки. На дне и крышке чашки записывается номер пробы по журналу и тест-микроорганизм (Salmonella enteritidis, Echerichia coli АТСС 11229). Затем чашки переносятся в бокс и устанавливаются на ровной поверхности. Чашки с почвой заливают 1,5% агар-агаром в количестве около 10 мл с таким расчетом, чтобы он покрыл слой почвы. После его застывания в чашки вносится МПА также в количестве 10 мл. С одного почвенного образца готовятся 2 параллельные чашки к каждому микроорганизму. Чашки высушивают под бактерицидными лампами в течение 30 минут. Затем производится посев индикаторных штаммов микроорганизмов.

Посевы производятся петлей, в качестве контроля производят посевы тех же культур на аналогичные среды, но без почвы.

Посевы инкубируют при температуре 37⁰С 24 часа. Учет результатов начинается с просмотра контрольного посева.

Распределение выросших колоний на всей поверхности среды свидетельствует о том, что исследуемая почва не токсична (Н/Т), а в случае роста колоний только на участке под которым нет почвы, показывает, что исследованный почвенный образец токсичен (Т). При исследовании некоторых почвенных проб отмечается частичное ингибирование роста тест-микроба. В этих случаях регистрируется маловыраженная токсичность (М/Т).