Схема выделения чистой культуры аэробов.

1. 1-й этап – 1-й день. Исследуемый материал микроскопируют и производят посев по Дригальскому.

2. 2-й этап – 2-й день. Производят. 1) макро- и микроскопическое изучение колоний (размер, форма, цвет, характер поверхности и краев, микроструктура); 2) изучение морфологии и тинкториальных свойств бактерий (с целью установления однородности, однотипности, однотинкториальности); 3) посев на скошенный МПА для накопления чистой культуры.

3. 3-й этап – 3-й день. Идентификация чистой культуры. Производят: 1) проверку чистой культуры; 2) проверку на подвижность; 3) изучение ферментативных (биохимических) свойств с помощью сред Гиса, МПБ; 4) изучение антигенных свойств (реакция агглютинации); 5) фаготипирование, колициногенотипирование, изучение антибиотикорезистентности.

Задание 1.

Изучить колонии, выросшие на МПА, засеянном на занятии №8

Сделать заключение:

Задание 2.

Приготовить из части колоний мазок, окрасить по Грамму, промикроскопировать и зарисовать.

Задание 3.

Посеять на скошенный агар оставшуюся часть колоний (с целью накопления чистой культуры для изучения других ее свойств, которые будут исследованы на третьем этапе выделения чистой культуры – занятие №7).

Задание 4.

Зарисовать и изучить схему выделения чистой культуры аэробов

 

Выделение чистой культуры анаэробов.

1. Анаэростат (стационарный, портативный). Удаляют воздух, а кислород могут замещать атмосферным азотом или другим инертным газом.

2. Среды под вазелиновым маслом (Кита-Тароцци).

3. Высокий столби гагара и посев уколом.

4. Трубки Бури и Виньяль-Вейона (трубки, заполненные сахарным агаром с парафинированными концами) помещенные в термостат.

5. Химический метод с использованием эксикаторов (на дно укладываетсяхим.вещество, связывающее кислород на подставку помещают засеянные чашки, крышку плотно притирают и ставят в термостат).

6. Метод Фортнера. Агаровую пластинку разделяют на две части, вырезав полоску. На одну половину сеют строгие аэробы, на вторую – анаэробы. Крышку парафинируют и затем ставят в термостат. Сначала вырастают аэробы, а при отсутсвии кислорода кислорода, начинают расти анаэробы (метод используется редко).

Задание 5.

Изучить принцип работы анаэростата.

Задание 6.

Изучить состав сред Кита-Тароции и Вильсона-Блера.

Среда Кита-Тароцци (среда накопления. Состоит из МПА с 0,5% раствором глюкозы и кусочков печени, мясного фарша или ваты. Перед посевом среду кипятят 10-15 мин. Для удаления воздуха и быстро охлаждают. До или после посева для изоляции от атмосферного воздуха среду заливают стерильным вазелиновым маслом слоем в 1 см.

Среда Вильсона-Блера (железосульфитный агар). Состоит из МПА, к которому добавляют глюкозу, Na₂SO₃ FeCl₂. Анаэробы образуют на этой среде колонии черного цвета за счет восстановления, Na₂SO₃ в Na₂S, который при соединении с хлоридом железа дает осадок черного цвета FeS.

Задание 7.

Изучить рост анаэробов на среде Кита-Тароции, создать заключение с его особенностях.

 

Задание 8.

Зарисовать трубки Бури и Виньяль-Вейона.

 

Задание 9.

Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты с анаэробами.

Препарат №

Препарат №

Препарат №

 

Схема выделения чистой культуры анаэробов по Цейслеру

 

 

Оформление и анализ результатов исследований

В отчете студенты кратко конспектируют теоретический материал. Описывают культуральные свойства выросших в чашках Петри колоний. Зарисовывают микроскопические картины выделенных из различных объектов чистых и накопительных культур с учетом морфологических особенностей каждого микроорганизма. Под каждым рисунком подписывают увеличение препарата. Делают соответствующие выводы.

 

Контрольные вопросы

1. Понятие о чистой и накопительной культуре

2. Методы выделения накопительных культур микроорганизмов

3. Методы выделения анаеробных культур (схемы)

4. Методы выделения аеробных культур (схемы)

5. Изучение культуральных особенностей микроорганизмов

 

 

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 9.

Тема: ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ, ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ. СОСТАВ ПЕСТРОГО РЯДА ГИССА И СЕРЕДА РЕССЕЛЯ.

Цель работы: Научиться выявлять ферментативную активность бактерий на дифференциально-диагностических средах, ознакомиться с методикой определения ферментативной активности бактерий с помощью энтеротестов и СИБ.

Оборудование и материалы: Демонстративный материал.