Брюшнотифозная сыворотка кроличья меченая ФИТЦ

РИФ основана на использовании флюоресцеинизотиоцианата – ФИТЦ или других флюорохромов, химически связанных, конъюгированных с АТ. При этом меченые АТ сохраняют иммунологическую специфичность и вступают

во взаимодействие со строго определенными корпускулярными АГ. Комплексы АГ с мечеными АТ можно легко определить по интенсивному желто-зеленому свечению при изучении препарата в люминесцентном микроскопе.

Разновидности РИФ:

* прямой метод Кунса;

* непрямой метод Кунса;

* антикомплементарный метод.

В прямом методе Кунса используются флюоресцирующие антисыворотки против определённых видов бактерий, вирусов, риккетсий и хламидий. В этом методе на предметном стекле с антигеном (мазок из исследуемой культуры, фиксированный чаще ацетоном) соединяется меченая антимикробная сыворотка, выдерживается во влажной камере 30 минут при 25 градусах

по Цельсию, после чего препарат 10 минут при 25 гр С промывают солевым буферным раствором. Образовавшийся комплекс антиген+антитело выявляется в люминесцентном микроскопе по яркому свечению.

В непрямом методе Кунса с начала на предметном стекле с антигеном соединяется немеченая диагностическая сыворотка во влажной камере 30 минут, а затем с ней соединяется антиглобулиновая против гамма-глобулинов того вида животного, на котором была получена немеченая сыворотка (АГС), меченая флюорохромом в таких же условиях. Результат наблюдается как и при прямом методе в люминесцентном микроскопе.

Непрямой вариант РИФ можно использовать не только для изучения АГ, но и для определения количества АТ в иммунной сыворотке.

Антикомплементарная РИФ предполагает применение меченых антител против комплемента морской свинки. Используется в тех случаях, когда комплекс АГ-АТ способен фиксировать комплемент. Добавление к такой системе антикомплементарной меченой сыворотки позволяет выявлять АГ по специфическому свечению в люминесцентном микроскопе. Приготовленные препараты высушивают с помощью фильтровальной бумаги

и изучают в люминесцентном микроскопе сначала при помощи сухого объектива х40, а затем, поместив на препарат каплю нефлюоресцирующего масла, с помощью иммерсионного объектива х90. Достоинством непрямой и антикомплементарной РИФ является использование лишь одной светящейся сыворотки (антивидовой или антикомплементар-ной) при изучении различных АГ, что значительно упрощает и удешевляет

реакцию.

 

 

Люминесцирующая сыворотка против глобулинов (лошади, кролика и пр.)

см. выше

 

?