Техника приготовления препарата — мазка.

Процесс приготовления мазка состоит из трех этапов:а) собственно приготовление мазка: на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды. Затем на пламени горелки прокаливают петлю до красного каления, мизинцем правой руки открывают у огня пробирку с культурой, после остывания петли, берут ею небольшое количество культуры. После этого закрывают пробирку пробкой и эмульгируют бактерии в капле воды так, чтобы она помутнела. Затем прожигают петлю с избытком культуры, охлаждают ее и быстрыми круговыми движениями равномерно распределяют каплю на площади диаметром 15 —25 мм и снова прожигают петлю.Для приготовления мазка методом отпечатка вырезают блок агара с выросшей колонией и помещают на покровное стекло бактериями вниз, резко прижимают блок к стеклу, после этого препарат сразу же фиксируют.б) высушивание препарата, препарат после высыхания должен быть равномерно тонким. Высушивание можно ускорить, держа препарат высоко над пламенем спиртовки.в фиксация мазка: чаще всего осуществляется термически, т. е. над пламенем горелки. Хотя данный метод фиксации и является достаточно грубым, но сохраняет морфологию и отношение бактерий к красителям.Фиксация мазка преследует следующие цели: а) инактивировать микроорганизмы; б) закрепить их на поверхности стекла и предотвратить их смывание при последующем окрашивании; в) повысить восприимчивость клеток к красителям.Для более детального изучения структуры клеток используют фиксирующие растворы, предотвращающие ферментативный аутолиз бактерий и стабилизирующие макромолекулы путем их химического сшивания. Наиболее часто в качестве таковых применяют формалин, спирты, жидкость Карнуа, ацетон и др. Мазки фиксируют, помещая в раствор фиксатора или нанося на мазок.

Классификация питательных сред. Требования, предъявляемые к питательным средам.

1.По составу питательные среды делятся на простые и сложные. Различают группу сред общего назначения - простых. К этой группе относят мясо-пептонный бульон (простой питательный бульон), мясо-пептонный агар {простой питательный агар), питательный желатин. Эти среды применяются для выращивания многих патогенных микробов. Среды общего назначения, или простые питательные среды, готовятся обычно из гидролизатов с добавлением пептона и хлористого натрия. Их используют также как основу для приготовления сложных сред.Также по составу выделяют белковые, безбелковые и минеральные среды.2. По происхождению среды разделяют на искусственные и естественные (природные). Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения.3.По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды для выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные). Требования, предъявляемые к питательным средам.1. Питательные среды должны содержать необходимые для питания микробов питательные вещества.2. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба. -3. Питательные среды должны иметь достаточную влажность и вязкость, т.к. микробы питаются по законам диффузии и осмоса.4. Обладать изотоничностью и иметь определенный окислительно-восстановительный потенциал 5. Питательные среды должны быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур.

3)Коньюгация. Механизм. Значение.

Коньюгация - это перенос генетического материала путем прямого контакта между двумя клетками. Необходимым условием конъюгации является наличие в клетке-доноре трансмиссивной плазмиды. Трансмиссивные плазмиды кодируют половые пили, образующие конъюгационную трубочку между клеткой-донором и клеткой-реципиентом, по которой плазмидная ДНК передается из клетки-донора в клетку-реципиент. В результате такого переноса клетка-реципиент получает донорские свойства. Интегративной трансмиссивной плазмидой является F -фактор.Одна нить донорской ДНК передается через конъюгационный мостик в клетку-реципиент. Процесс сопровождается достраиванием комплементарной нити до образования двунитевой структуры. Переданная в реципиентную клетку и достроенная до двунитевой структуры, нить ДНК рекомбинирует с гомологичным участком реципиентной ДНК с образованием стабильной генетической структуры.Биологическая значимость конъюгации хорошо видна на примере распространения резистентности бактерий к антибиотикам. Устойчивость к антибиотикам бактерия может получить в результате мутации, что происходит 1 раз на каждые 10 6 клеточных делений. Однако, однажды изменившись, генетическая информация может быстро распространяться среди сходных бактерий посредством конъюгации, поскольку каждая третья из близкородственных бактерий способна именно к этому типу генетического переноса.