Реакция агглютинации в присутствии высокомолекулярных субстанций с помощью цоликлона анти-Д

А. Реакция агглютинации на плоскости при участии цоликлона анти-Д Эта реакция проводится также как в пункте 1, только ещё проводится контрольная проба с раствором высокомолекулярного вещества (альбумина или полиглюкина). Если эти вещества вызывают сами по себе агглютинацию, то результаты недостоверны.

Б. Реакция конагглютинации в присутствии желатина

Ход работы. В пробирку помещают 0,05 мл исследуемой крови и добавляют 2 капли (0,1мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого на спиртовке до жидкого состояния, затем ещё 2 капли (0,1мл) реагента анти-D. Смешивают, помещают пробирку в водяную баню при температуре 37^оС на 10 минут.

После инкубации доливают в пробирку 5-8 мл физиологического раствора и, осторожно переворачивая 1-2 раза, перемешивают содержимое пробирки. Оценка агглютинации производится на свет невооружённым глазом или с лупой. Эту пробу проводят с параллельным контрольным определением:

1 - со стандартными Rh⁺ эритроцитами,

2 - со стандартными Rh^- эритроцитами,

3 - с исследуемыми эритроцитами и желатином без анти-D антител.

Рекомендации к оформлению работы. Если в пробирке нет агрегатов, а видна равномерно окрашенная взвесью эритроцитов жидкость, кровь является резус-отрицательной, при резус-положительной крови наблюдаются четко различимые агрегаты различной величины. Результаты пробы считаются достоверными, если желатин не вызывает агглютинацию, а результаты других контрольных проб соответствуют ожидаемым. Если же желатин вызывает агглютинацию сам по себе, следует предположить наличие антиэритроцитарных антител анти-Rh или другой специфичности, что может быть при гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной гемолитической анемии и некоторых инфекционных заболеваниях. В этих случаях кровь направляется в серологическую лабораторию. При мелкозернистой (сомнительной) агглютинации требуется дальнейшее дополнительное исследование.

 

 

Занятие 4

СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ

Цель занятия. Проанализировать механизмы свертывания крови и фибринолиза. Познакомиться с основными экспресс-методами их исследования.

Примерные вопросы для самоподготовки

1. Свертывание крови, роль этого процесса в норме и при патологии. Теория гемокоагуляции Шмидта-Моравица. Современные представления о механизмах гемостаза.

2. Плазменные факторы свертывания крови.

3. Тромбоциты, их количество и основные функции, регуляция тромбоцитопоэза. Факторы свертывания крови тромбоцитов.

4. Факторы свертывания крови эритроцитов, лейкоцитов и тканей.

5. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз и динамические превращения тромбоцитов.

6. Гемокоагуляционный гемостаз, его фазы. Первая фаза свертывания крови.

7. Вторая и третья фазы свертывания крови.

8. Фибринолиз, его значение и механизмы. Ретракция кровяного сгустка.

9. Противосвертывающие механизмы.

10. Латентное микросвертывание и внутрисосудистое тромбообразование (триада Вирхова).

11. Регуляция свертывания крови и фибринолиза. Контуры регуляции, ведущие причины гиперкоагуляции. Механизмы стимуляции фибринолиза.

12. Система гемостаза и иммунная система.

13. Понятия о функциональной системе регуляции агрегатного состояния крови и тромбогеморрагическом синдроме.

СИСТЕМА ГЕМОСТАЗА

Одним из жизненно важных показателей гомеостаза является жидкое состояние крови и замкнутость сосудистого русла. Постоянство этих параметров обеспечивается системой гемостаза.

Система гемостаза - это совокупность функционально-морфологиче­ских и биохимических механизмов, поддерживающих кровь в жидком состоянии и вместе с тем обеспечивающих остановку кровотечения. В систему гемокоагуляции входят кровь и ткани, которые продуцируют, используют и выделяют из организма необходимые для данного процесса вещества, а также нейрогуморальный аппарат ее регуляции - это основные компоненты этой системы.

Функции системы гемостаза

1. Содержание крови в жидком состоянии, что обеспечивает процессы нормального кровообращения и тканевого метаболизма.

2. Своевременное восстановление стенок капилляров и сосудов, повреждаемых в результате нормального функционирования органов и тканей.

3. Участие в сохранении нормального объема циркулирующей крови и ее компонентов.

4. Способствование удержанию элементов крови в сосудистом русле.

5. Регуляция транскапиллярного обмена, резистентности и проницаемости сосудистой стенки.

6. Осуществление остановки кровотечения в экстремальных условиях /разрыв сосуда, повреждение органов и тканей/, что не дает излиться крови.

7. Участие в заживлении повреждений органов и тканей.

8. Участие в реакциях иммунологической защиты организма.

Расстройства гемостаза занимают ведущее место в патогенезе и течении большинства видов шока и терминальных состояний. Они сопутствуют травматологическим повреждениям, осложняют хирургические вмешательства, лекарственную и инфузионную терапию. Играют важную роль в развитии сердечно-сосудистых, неопластических, инфекционно-септических и других заболеваний внутренних органов. Нарушения системы гемостаза отличаются клиническим разнообразием, опасностью геморрагических и тромботических осложнений, служат причиной летальных исходов.

Основоположником учения о свертывании крови явился Александр Александрович ШМИДТ (1861-1896 г.), ученый Дерптского /ныне Тартуского/ университета. Он первый в истории медицины в 1872 году выдвинул предположение о том, что свертывание крови - это ферментативный процесс, создав классическую ферментативную теорию свертывания крови.

Австрийский врач Пауль Моравиц (1902 г.) продолжил изучение свертывания крови и дополнил созданную А.А.Шмидтом ферментативную теорию свертывания крови. Согласно ферментативной теории Шмидта-Мора­вица в свертывании крови участвуют 4 компонента: тромбопластин, протромбин, фибриноген и ионы Са. Процесс свертывания крови протекает в 2 этапа:

1 стадия – протромбин ^{тромбопластин+Са} тромбин

2 стадия – фибриноген ^{тромбин} фибрин

В настоящее время установлено, что свертывание крови очень сложный процесс, так, коагуляционный гемостаз протекает в 3 стадии и включает значительно больше компонентов/участников/, чем по схеме Шмидта-Моравица.

1 стадия: образование протромбиназ /тканевой и кровяной/;

2 стадия: образование тромбина;

3 стадия: образование фибрина.

Кроме 3 стадий различают предфазу и послефазу свертывания крови. В предфазу происходит сосудисто-тромбоцитарный, или первичный гемостаз. В предфазе участвуют тромбоциты и стенка сосудов. За счет первичного гемостаза происходит остановка кровотечения в сосудах микроциркуляции, диаметр которых не превышает 100 мкм.

Послефаза включает 2 параллельно идущих процесса: фибринолиз и ретракцию. Ретракция способствует уплотнению тромба и выполнению им гемостатической функции. Гемостатически полноценный тромб прочно удерживает края поврежденных сосудов и является непроницаемым для крови.

Фибринолиз - это процесс растворения фибринового сгустка. Основное назначение фибринолиза – реканализация затромбированного сосуда.

В свертывании крови участвуют 3 основных компонента: плазма, форменные элементы и сосудистая стенка. Все они содержат множество соединений, непосредственно участвующих в свертывании крови.