Фиксация и консервация гельминтов

 

Обычным, наиболее широко употребляемым фиксатором для тотального изучения любых паразитов является 70°-й спирт. Перед фиксацией его можно подогреть до 40—50 градусов; теплый фиксатор быстро убивает паразитов и фиксирует их в расправленном состоянии. Количество фиксатора должно в 8-10 раз превышать объем фиксируемого материала. Можно пользоваться 4%-м формалином, однако для тотального изучения паразитов он непригоден. Для анатомо-гистологического изучения отдельных паразитов и кусочков ткани, пораженной ими, формалин, наоборот, более применим, чем 70°-й спирт.

Гельминты перед фиксацией должны быть умерщвлены. Сосальщиков и круглых червей с толстой кутикулой (аскаридат, спирурат и др.) помещают в воду и фиксируют сразу после их гибели (момент прекращения движений), так как в это время они хорошо расправляются. Мертвых червей долго держать в воде нельзя; они начинают разлагаться и материал оказывается непригодным для систематического изучения. Сосальщиков, извлеченных из печени, почек и кровеносных сосудов, а также круглых червей со сравнительно тонкой кутикулой (Filariata, Capillariidae и др.) в воду помещать нельзя, так как паразиты могут лопнуть от долгого пребывания в воде из-за разности осмотического давления; определение таких поврежденных червей практически невозможно.

У ленточных червей и скребней добиваются фиксации с вытянутыми хоботками, используя подогретые фиксаторы или фиксацию под стеклом. С этой целью червей помещают на предметное стекло и накрывают, в зависимости от величины объекта, покровным или предметным стеклом; затем, слегка надавливая на верхнее стекло, пипеткой подпускают под него 70°-й спирт или другую фиксирующую жидкость. Черви между стеклами должны находиться в фиксаторе не менее 1-2 час, поэтому нужно следить, чтобы фиксатор не испарился, и по мере надобности добавлять его (лучше всего помещать их в закрытые чашки Петри). Однако при таком способе фиксации нередко происходят изменения в форме тела и во взаиморасположении отдельных органов червей. Поэтому одновременно с фиксацией под стеклом часть того же материала для контроля следует фиксировать без стекла. Для этого оставляют цестод в воде (крупные стробилы) или в физиологическом растворе (нежные формы). Однако при этом необходимо часто проверять состояние стробил, так как сколекс может начать мацерировать и терять крючья до гибели всей стробилы, что затрудняет определение.

Мелких сосальщиков перед фиксацией без стекла рекомендуют помещать в пробирку с водой и сильно встряхивать в течение 5—10 мин. (метод Лоосса); при этом мышцы червей расслабляются и сосальщики фиксируются хорошо расправленными.

Скребней, как правило, всегда фиксируют под предметным стеклом, которым осторожно, с возрастающей силой надавливают на червя до полного выворачивания его хоботка. После того как хоботок червя удается вывернуть совсем, на верхнее стекло ставят небольшой груз (специально изготовленный или гирю весом 10—20 г) или стекла, между которыми находится паразит, перевязывают ниткой и под стекло пипеткой вводят фиксатор. В таком виде скребней нужно держать не менее 2-3 часов, поместив их предварительно в закрытую чашку Петри.

Для круглых червей лучшим фиксатором является жидкость Барбагалло (для получения растворяют 9 г поваренной соли в 1 л дистиллированной воды и к раствору прибавляют 30 см³ 40%-го раствора формальдегида). Этот фиксатор, как и спирт, удобен тем, что в нем объект сохраняют до лабораторной обработки.

При сборе материала из определенного органа сразу же под чашку Петри, куда помещают паразитов, подкладывают временную этикетку, написанную простым карандашом на обыкновенной белой бумаге. На временной этикетке должны быть указаны номер вскрытия животного, локализация паразита (орган, ткань, сосуд и т. д.) и дата вскрытия. Эта этикетка остается с паразитами в течение всего времени их промывки и фиксации и заменяется более подробной постоянной этикеткой только при перенесении материала для хранения в пробирки. Постоянную этикетку пишут на кальке или плотной белой бумаге несмываемой в спирте тушью или простым мягким карандашом. Размеры этикетки должны быть немного меньше площади сторон пробирок, в которые помещают паразитов. На этикетке параллельно длинной стороне указывают: в 1-й строке — вид животного и номер; во 2-й строке — место локализации паразита (орган, ткань и т. д.); в 3-й строке — название паразита (которое должно точно соответствовать тому, как оно записано в дневнике) и, в скобках, название фиксатора (если паразит зафиксирован сложным фиксатором для целей гистологического исследования); в 4-й строке — район исследования и место добычи птицы; в 5-й строке — дату вскрытия и фамилию сборщика.

Чтобы перечисленные сведения уместились на сравнительно небольшой площади этикетки, писать их следует мелко и разборчиво, пользуясь тонким чертежным пером иди остро отточенным карандашом. Некоторые слова в этикетке можно писать сокращенно, все сокращения, однако, должны быть понятными для всех. Допускается размещение надписей на обеих сторонах этикетки. Этикетку свертывают в трубочку и вкладывают в пробирку так, чтобы лицевая сторона плотно прилегала к стенкам пробирки и ее можно было бы прочесть не вынимая. Такое положение этикетки при лабораторной обработке облегчает разбор материала по группам паразитов и видам хозяев. Этикетку лучше вкладывать в еще пустую пробирку. Паразитов из каждого органа размещают в отдельной пробирке, заливая ее фиксатором доверху.

Пробирки упаковывают в материальные банки, куда их устанавливают обязательно в вертикальном положении в два или три ряда (в зависимости отих высоты и величины материальной банки). На дно банки и между рядами пробирок прокладывают слои гигроскопической ваты, которой плотно набивают также верхнюю незаполненную часть банки. В такой упаковке пробирки могут перевозиться на большие расстояния без риска быть разбитыми. Дальнейшая обработка материала проводится уже в лабораторных условиях.

Содержание мелких млекопитающих в неволе

 

Для изучения поведения животных, а также для проведения ряда других исследований, например, для экспериментального исследования питания, возникает потребность содержать в неволе живых зверьков на протяжении определенного количества времени (от нескольких часов до нескольких месяцев в зависимости от направления работы). Из мелких млекопитающих грызуны являются более неприхотливыми объектами, чем насекомоядные.

 

Вольеры

 

Для индивидуального содержания мелких млекопитающих лучше всего использовать аквариумы из стекла, пластика или оргстекла, они имеют прозрачные стенки для наблюдений и их легче мыть. Деревянные контейнеры с передней прозрачной стенкой менее пригодны, так как дерево сильнее загрязняется, впитывает запахи, кроме того, из них зверьки часто убегают, прогрызая стенки или взбираясь по шероховатым вертикальным стенкам (в особенности мелкие виды). Если контейнер деревянный или высотой менее 600 мм, то его необходимо накрывать крышкой, чтобы предотвратить побеги зверьков.

На дно вольера необходимо положить подстилку, лучше всего из смеси опилок и стружек. Такая смесь отвечает требованиям гигиены и предотвращает зверьков от переохлаждения. Менять подстилку необходимо по мере загрязнения, не реже 1 раза в неделю. Намокшие опилки (в случае опрокидывания поилки и др.) меняют ежедневно. В жаркую погоду, чтобы не допустить перегрева животных, вольеры необходимо притенять и проветривать, снимая на некоторое время крышки и следя, чтобы зверьки не убежали.

В вольере помимо подстилки должны быть убежища и материал для постройки гнезд. В качестве гнездового материала грызуны и насекомоядные охотно используют волокнистый материал – сено или паклю. Желательно чтобы в вольере находились и естественные элементы – веточки или небольшие коряги. Нельзя размещать коряги возле стенки вольера, так как, взобравшись по ним, животные могут выпрыгнуть наружу.

При длительном содержании (более 2-х недель) недостаток двигательной активности приводит к увеличению массы тела и изменению поведения животных. Компенсировать этот недостаток можно, используя колеса активности. Поместив колесо активности в вольер, необходимо пронаблюдать за поведением животного. Более мелкие виды (мышь-малютка, малая и крошечная бурозубки) обладают слишком малой массой тела для вращения колеса и используют его в качестве трамплина для прыжков на стенки с целью побега. Некоторые животные слишком много времени проводят в колесе активности, бегая до изнеможения, по-видимому, считая дорожку колеса «путем к свободе». Поскольку такие зверьки способны загонять себя до смерти, колесо им нужно ставить только на короткое время (не более 30 минут в день).

Каждый из содержащихся зверьков должен иметь свой номер, регистрируемый в журнале учета отловов. Этот номер следует нанести стеклографом на клетку или поместить в клетку спичечный коробок с нанесенным номером. При переселении животных из вольера в вольер коробок переносят вместе с ним. Этот же номер фиксируется во всех лабораторных журналах, независимо от характера исследования. Даже если в исследованиях зверьку присваивается новый номер, он в обязательном порядке дублируется номером из журнала отловов.

 

Перемещения животных

 

Перемещения животного из вольера вольер или экспериментальную установку должно осуществляться в наиболее щадящем режиме. У неопытных экспериментаторов животные чаще всего убегают при пересадках, особенно если их пытаются брать руками. Следует помнить, что грызуны легко прокусывают перчатки, их укусы не только болезненны, но могут привести и к заражению инфекционными заболеваниями. Кроме того, контакт с рукой экспериментатора стрессирует животное и оставляет на нем чужую запаховую метку, что может привести к искажению результатов эксперимента.

Наиболее щадящим для зверька и безопасным для новичка-экспериментатора является отлов и перемещение при помощи пластиковой бутылки со срезанной верхушкой. Бутылка медленно подводится по дну клетки к голове зверька, затем производится «зачерпывающее» движение (в ряде случаев зверек сам вбегает в бутылку). Переносят зверька, держа бутылку строго вертикально и накрыв рукой сверху. Единственный недостаток этого способа заключается в том, что вместе со зверьком часто захватывается и подстилка, которая может загрязнять экспериментальную установку (например, водный лабиринт Морриса). В этом случае можно отловить зверька за хвост пинцетом и перенести его, тщательно регулируя силу сжатия, чтобы не повредить хвост и не выпустить животное.

 

Поение и кормление

 

В качестве поилки можно использовать половинки чашки Петри или донышки от пластиковых бутылок. Хотя зверьки при наличии сочных кормов пьют мало, воду в поилках необходимо менять ежедневно, так она загрязняется частичками подстилки и фекалиями. В питании грызунов должны присутствовать сочные и сухие корма. В качестве сухих можно использовать готовые корма для грызунов («Лакомка», «Хомка» и др.) или смеси различных круп. Сочные корма представляют собой вегетативные части растений, овощи, фрукты. Такие виды грызунов, как мышовка и мышь-малютка, помимо растительной пищи, охотно едят и насекомых.

Землеройки более сложны в содержании, чем грызуны, в особенности это касается кормления. В идеальном варианте землероек кормят только беспозвоночными животными: насекомыми, пауками, дождевыми червями, моллюсками. Однако землеройки крайне прожорливы и обеспечить им полноценный рацион только из беспозвоночных животных практически невозможно, особенно в холодную погоду. Без пищи землеройки погибают очень быстро, примерно за 3-4 часа, поэтому в ночное время их кормят мясом и рыбой. Источником мяса в полевых условиях являются тушки грызунов, оставшиеся после обработки отловов. Землеройки более охотно поедают мясо молодых полевок, мышовок и мышей-малюток. Следует помнить, что землеройки с трудом прогрызают шкурку, поэтому на тушке необходимо сделать надрезы. То же самое относится и к кормлению рыбой. Не съеденные зверьками за ночь остатки корма убирают и заменяют свежим. На исключительно мясной диете крупные землеройки (обыкновенная кутора, обыкновенная бурозубка) могут прожить до 2-х недель.

Кроме мяса, для нормального пищеварения землеройкам необходим хитин беспозвоночных животных, и чем мельче зверек, тем больше должна быть доля беспозвоночных в его питании. Так, например, крошечная бурозубка мясо не ест вообще, а в рационе малой бурозубки доля беспозвоночных должна составлять около 50%. Проще всего для кормления зверьков использовать слепней, мух, бабочек, кузнечиков, мелких жужелиц, а для малой и крошечной бурозубок – комаров. Все землеройки хорошо едят дождевых червей, которых нужно давать понемногу или передерживать, т.е. дождаться того момента, когда кишечник червя освободится от земли. Кутора охотно поедает водных моллюсков.

В целом необходимо отметить, что землеройки плохо переносят неволю, и даже при соблюдении всех условий часть зверьков погибает в первые дни содержания.