Приготовление препаратов фиксированных клеток

Фиксированными считают клетки микроорганизмов, в которых прерваны жизненные процессы, но полностью сохранена тонкая структура. Для получения фиксированных препаратов важно правильно подготовить предметные стекла. Они должны быть чистыми и тщательно обезжиренными. Для этого стекла, бывшие в употреблении, выдерживают 1-2 часа в хромовой смеси (в 1 л воды вносят 50 г бихромата калия и 100 г технической серной кислоты), после чего ополаскивают теплой водой и спиртом. Можно также кипятить стекла в течение 15 мин. в растворе соды или мыльной воды. Для проверки чистоты стекла на его поверхность наносят каплю воды. При достаточном обезжиривании капля растекается равномерно и не собирается в выпуклые, медленно высыхающие пузырьки. Берут стекла пинцетом или аккуратно за грани, так как пальцы оставляют на поверхности жирные пятна.

Приготовление фиксированных препаратов ведут в следующей последовательности:

1. На середину чистого обезжиренного предметного стекла стерильной петлей наносят небольшую каплю воды. В нее вносят исследуемый материал, отобранный по методике, описанной в разделе 1. Полученную суспензию равномерно распределяют по поверхности стекла тонким слоем таким образом, чтобы препарат распределился на площади примерно 2-3 см².

2. Полученный мазок высушивают при комнатной температуре на воздухе.

3. Производят фиксацию мазка. Для этого стекло с высохшим мазком проводят 3-4 раза над пламенем горелки той стороной, где мазок отсутствует.

Цель фиксации:

· умертвить клетки микроорганизмов и сделать их безопасными (что особенно важно при работе с патогенными микроорганизмами);

· зафиксировать (закрепить) мазок на стекле (чтобы они не смывались при окрашивании);

· улучшить окрашивание, поскольку мертвые клетки лучше адсорбируют на своей поверхности различные красители.

Приготовление фиксированных препаратов из естественных мест обитания микроорганизмов проводится так же, как и из чистых культур. Помимо термической обработки, применяют также фиксацию химическими веществами: погружают предметное стекло с мазком в мензурку с 96 %-ным этанолом на 15-20 мин, с ацетоном на 5 мин, со смесью 96 % -ного этанола и 40%-ного формалина (соотношение 95:5) на 2 мин. и др.

Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов простым методом

Фиксированные препараты нельзя рассмотреть под микроскопом, так как они являются бесцветными и пропускают световые лучи. Поэтому их окрашивают, используя простые или сложные методы. При окрашивании фиксированных мазков простыми методами используют один краситель (фуксин, краска Муромцева, генцианвиолет, метиленовая синь и др.). Последовательность окрашивания мазка простыми методами следующая:

1. На фиксированный препарат наносят несколько капель красителя таким образом, чтобы он покрывал всю поверхность мазка и выдерживают в течение определенного времени. Так, при окраске фуксином на мазок наносят несколько капель красителя и выдерживают его на мазке 2-3 мин.

2. Краску смывают с мазка слабой струей до бесцветной смывной воды. При этом стекло держат в наклонном положении над лотком.

3. Мазок подсушивают фильтровальной бумагой, которую осторожно прикладывают к стеклу, и досушивают на воздухе.

4. На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и рассматривают препарат с объективом х90 или х100.

Задание 3. Схематически изобразить морфологическую структуру бактериальной клетки:

Задание 4. По памяти зарисовать и подписать основные шаровидные формы бактерий (микрококки, диплококки, тетракокки, сарцины, стрептококки, стафилококки).

Задание 5. По памяти зарисовать и подписать основные палочковидные формы бактерий.

Приложение к лабораторной работе №1

Задание 6. Зарисовать и подписать расположение жгутиков у бактерий (монотрихи, лофотрихи, амфитрихи, перитрихи).

	Монотрихи – бактерии с 1 полярно расположенным жгути­ком
	Лофотрихи – бактерии, на одном конце которых имеется пучок жгутиков
	Амфитрихи – бактерии, имеющие пучки жгутиков на обоих полюсах бактериальной клетки
	Перитрихи – бактерии, жгутики которых расположены по всей поверхности бактериальной клетки, то есть перитрихеально

Приложение к лабораторной работе №1

Задание 7. Зарисовать и подписать виды расположения спор в теле микроорганизма.

 

	Терминальное расположение спор. Спора располоагается на полюсе бактерии, и тогда она приобретает форму барабанной палочки.
	Центральное расположение спор. Если споры крупные и располагаются в центре клетки, то палочка может приобретать веретенообразную форму
	Субтерминальное расположение спор. Спора располагается на конце палочки, и тогда она приобретает форму булавы.

 

 

Лабораторная работа №3-4

Тема: Морфологические признаки дрожЖей и микроскопических грибов. влияние окружающей среды на микроорганизмы. Стерилизация и дезинфекция.

Цель: Изучить основные признаки дрожжей и микроскопических грибов. Приготовление живых препаратов дрожжей и грибов. Ознакомиться с влиянием окружающей среды на микроорганизмы, изучить методы и способы стерилизации и дезинфекции.

Оборудование, материалы: Микроскоп; термостат; сухожаровый шкаф; препаровальные иглы и бактериологические петли; предметные и покровные стекла; фильтровальная бумага; спиртовка; лоток с рельсами для предметных стекол; разделочные доски, лопатки, обработанные с применением растворов хлорсодержащих препаратов; раствор йодисто-калиевого крахмала; метиленовая синь, пипетки; культуры грибов родов Mucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; чистая культура дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

 

ХОД ЗАНЯТИЯ: