Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Визначення концентрації Іg А, М, G.
Для кількісного визначення імуноглобулінів в сироватці крові та інших біологічних рідинах людини використовують твердофазний метод імуноферментного аналізу (ІФА). Прямий твердофазний метод ІФА заснований на принципі „сендвіча". Аналіз проводиться в дві стадії. На першій стадії контрольні зразки з відомою концентрацією імуноглобулінів (А, М, G) і досліджувані проби інкубуються в лунках полістіролового планшета з іммобілізованими моноклональними антитілами (МКАТ) до імуноглобулінів (A, M, G). Потім планшет “відмивається” (для видалення із системи інших, неспецифічно зв`язаних з моноклональними антитілами компонентів). На другій стадії імуноглобулін (А, М, G), що зв'язався в лунках, обробляють кон'югатом МКАТ до Іg (А, М, G) людини з пероксидазою (МКАТ у складі кон'югату та іммобілізовані в лунках планшета МКАТ специфічні до різних ділянок молекули Іg (А, М, G). Після „відмивання" надлишку кон'югата імунні комплекси „іммобілізовані МКАТ -1g (А, М, G) - кон'югат" виявляють ферментативною реакцією пероксидази з перекисом водню в присутності хромогену. Інтенсивність забарвлення хромогену пропорційна концентрації Іg (А, М, G) в досліджуваному зразку. Після зупинки пероксидазної реакції стоп-реагентом результати реєструють фотометрією зразків (вимірюють оптичну густину в лунках планшета при 492 нм).
1- МКАТ до Іg (А,М,G), іммобілізовані в лунках планшета; 2- Іg (А,М,G) досліджуваних зразків; 3 -кон’югат (МКАТ до Іg (А,М,G) з ферментною міткою. Конкурентний твердофазний метод ІФА. В лунки полістиролового планшета з іммобілізованими імуноглобулінами людини (ІgA – 1-4 ряди, IgM – 5-8 ряди, ІgG – 9 –12 ряди) вносять контрольні сироватки (“кс”) з відомою концентрацією Іg (А, М, G), досліджувані зразки (14) та фосфатно-сольовий буфер (“б”, використовується для розведення зразків, контролів, кон`югатів, промивання планшета). Безпосередньо після цього в лунки вносять відповідні розчини кон`югатів (кон`югат А). (МКАТ до ІgА з ферментною міткою – пероксидазою) – в 1-4 ряди, кон`югат М – в 5-8 ряди, кон`югат G в 9-12 ряди). Імуноглобуліни, що містяться в досліджуваних зразках, конкурують з іммобілізованими на твердій фазі імуглобулінами за зв`язок з кон`югатом. Ступінь зв`язування введених МКАТ з імуноглобулінами твердої фази знижується (їх “перехвачують” імуноглобуліни досліджуваних зразків). Після інкубації планшет промивають. Зв`язок МКАТ у складі кон`югату з іммобілізованими імуноглобулінами оцінюють за допомогою ферментативної реакції пероксидази з перекисом водню в присутності хромогену. Для цього в лунки вносять субстратну суміш (субстрат – Н2О2 та хромоген) і знову інкубують. Після зупинки стоп-реагентом ферментативної реакції результати реєструють фотометрією зразків.
1 -іммобілізовані в лунках планшета імуноглобуліни (А,М,G); 2 - МКАТ до Ig (А,М,G) з ферментною міткою; 3 - імуноглобуліни (А,М,G) досліджуваних зразків.
Концентрацію імуноглобулінів (А, М, G) в досліджуваних зразках визначають за калібровочним графіком, або використовують обернено пропорційний розрахунок:
Рк - оптична густина контрольного зразка, Рх - оптична густина досліджуваного зразка, Ск - концентрація імуноглобуліну в контрольному зразку, Сх - концентрація імуноглобуліну в досліджуваному зразку. Виходячи з цього:
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-21; просмотров: 207; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.223.196.211 (0.004 с.) |