Дослід №1. Осадження білків нагріванням

У пробірку внести 2 мл розчину яєчного білка і нагріти на киплячій водяній бані. Спостерігати утворення _________________осаду внаслідок згортання білка. Назвати вид денатурації білка._______________________________________________________________

Зробити висновок. _________________________________________________________

Дослід №2.Осадження білків мінеральними кислотами

У пробірку внести 3 мл концентрованої азотної кислоти. Потім по стінці пробірки обережно, щоб рідини не перемішувалися, додати 3мл розчину яєчного білка. Спостерігати на межі поділу фаз двох рідин утворення осаду у вигляді білкового ________________. Вміст пробірки перемішати, долити надлишок азотної кислоти. Описати спостереження. Пояснити, чому осад не зникає. __________________________________________________

Зробити висновок _________________________________________________________

Дослід №3. Вивчення процесу осадження білків за різних значеннях рН середовища

Для вивчення залежності процесу осадження білків від концентрації водневих іонів, у п’ять пробірок додати по 5 мл розчину яєчного білка.

Першу пробірку з нейтральним розчином білка нагріти до кипіння, спостерігати помутніння розчину і опалесценцію, що зумовлена руйнуванням гідратної оболонки навколо молекули білка та збільшенням білкових часточок. Але міцели білка заряджені і тому залишаються в розчині, не випадаючи в осад.

Другу пробірку з розчином білка нагріти до кипіння, додати 1 мл розчину оцтової кислоти до появи слабкокислої реакції середовища. Білкові молекули втрачають заряд і випадають в осад тому, що значення рН середовища наближене до рН середовища ізоелектричної точки.

У третю пробірку внести з мл розчину оцтової кислоти для створення кислої реакції середовища. Під час кип’ятіння розчину осад не утворюється, оскільки молекули білка набувають позитивного заряду, що сприяє підвищенню їх стійкості.

У четверту пробірку внести 5 мл розчину оцтової кислоти, 2 мл насиченого розчину хлориду натрію та нагріти. Спостерігати утворення білого осаду, що пояснюється втратою заряду білковою молекулою внаслідок взаємодії з іонами хлориду натрію.

У п’яту пробірку внести 2 мл розчину гідроксиду натрію для створення лужного середовища. Нагріти пробірку. Спостерігати відсутність осаду в лужному середовищі, так як молекула білка набуває негативного заряду.

Зробити висновок і вказати при яких умовах відбувається осадження білка.

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Дослід №4. Осадження білків іонами важких металів

У дві пробірки додати по з мл розчину яєчного білка. У першу пробірку додати 2-3 краплі розчину сульфату купруму(ІІ), спостерігати утворення осаду _________________ кольору. У другу пробірку додати 2-3 краплі розчину ацетату плюмбуму(ІІ). Спостерігати утворення осаду _____________________ кольору. Перевірити розчинність осадів у воді, описати спостереження _________________________________________________________. В обидві пробірки з осадами додати надлишок розчинів солей сульфату купруму (ІІ) та ацетату свинцю. Спостерігати _________________________________________ Пояснити розчинення осадів у надлишку солей ______________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Зробити висновок. _________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Дослід №4. Осадження білків хлоридом натрію

У пробірку внести 3мл розчину яєчного білка та хлорид натрію до повного насичення. Через кілька хвилин в осад випадають глобуліни. Суміш фільтрують через складчастий паперовий фільтр. У фільтраті містяться альбуміни, які не осаджуються за даних умов.

До фільтрату додати 1 мл розчину оцтової кислоти і нагріти суміш до кипіння на водяній бані, спостерігати утворення осаду альбумінів.

Зробити висновок про умови осадження і розділення альбумінів і глобулінів.

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Зробити висновок по роботі. _______________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Інструкційна карта

До лабораторної роботи №8

з дисципліни «Органічна хімія»

спеціальності «Виробництво хліба, кондитерських, макаронних виробів і харчових концентратів»

Тема: Вивчення кольорових реакцій білків

Мета:

þ дослідження якісних реакцій білків.

þ удосконалення умінь і навичок проведення хімічного експерименту;

þ формування умінь інтерпретації результатів хімічного експерименту (спостереження, складання рівнянь відповідних хімічних реакцій, висновки).

Забезпечення:

Посуд, обладнання: штатив з пробірками, нагрівальний прилад, пробіркоутримувач, хімічний стакан, універсальний індикаторний папір.

Реактиви: розчини яєчного білка, хлоридної кислоти, 10%-вий розчин лугу, 1%-вий розчин сульфату купруму(ІІ), дистильована вода, концентрована нітратна кислота, розчин ацетату плюмбуму (ІІ),розчин нінгідрину.

Хід роботи:

Дослід №1. Біуретова реакція

За допомогою кольорових реакцій в розчинах (часто в біологічних рідинах – наприклад, в сечі) встановлюється присутність білків, а в їх молекулах – певних угрупувань

Білки (поліпептиди) в лужному середовищі за наявності сульфату купруму(ІІ) утворюють комплексні сполуки купруму, забарвлені в синьо-фіолетовий колір, інтенсивність забарвлення якого залежить від кількості пептидних зв’язків у молекулі білка.

Ця реакція обумовлена наявністю пептидної групи:

Утворення пептидного зв’язку

Комплекси купруму з білками ‑ забарвлені сполуки, що мають максимум поглинання при 540 – 580 та 615 – 670 нм. За допомогою біуретової реакції можна визначити концентрацію білка у пробі 10^-5 – 10^-4М.

Продукти неповного гідролізу білка (пептиди) в біуретовій реакції утворюють червоне забарвлення.

До 3мл розчину яєчного білка додати 1мл розчину гідроксиду натрію, 1 – 2краплв розчину сульфату купруму(ІІ), перемішати. Спостерігати забарвлення розчину __________

__________________________ колір.

Зробити висновок. _________________________________________________________