Учет и интерпретация результатов чашечных агаровых методов

Посевы просматривают ежедневно. Подсчет ко- лоний производят через 48-72 ч (предварительный ре- зультат) и через 5 сут. (окончательный результат).

Для получения достоверных результатов отбира- ют чашки, где число колоний бактерий не превышает 250, а колоний грибов — 50. Если при учете резуль- татов двух последующих разведений число колоний на чашках находится в указанных выше пределах, рас- считывают результаты из меньшего разведения.

Если в среднем на чашках выросло более 250 ко- лоний бактерий или более 50 колоний грибов, делают ряд дальнейших последовательных разведений образ- ца, выбирая приемлемое для посева.

Если в среднем на чашках выросло менее 15 и бо- лее 250 колоний бактерий или менее 15 и более 50 коло- ний грибов, делают ряд дальнейших последовательных разведений образца, выбирая приемлемое для посева.

Если на соево-казеиновом агаре (или на среде №1) дополнительно обнаружены колонии грибов, то их суммируют с числом бактерий и определяют общее число аэробных микроорганизмов, которое лимитиро- вано для каждой категории ЛС.

Если на питательной среде отсутствует рост ми- кроорганизмов, результаты отмечают следующим об- разом: при посеве лекарственного средства в разведе- нии 1:10 — «В 1 г (или в 1 мл) лекарственного средства содержится менее 10 бактерий (или грибов)»; при по- севе лекарственного средства в разведении 1:100 —

«В 1 г (или в 1 мл) лекарственного средства содержит- ся менее 100 бактерий (или грибов)» и т. д.

Количество микроорганизмов в 1 г или в 1 мл рас- считывают по формуле:

 

Где N — количество микроорганизмов в 1,0 г или в 1,0 мл, с — сумма колоний на всех чашках Петри, n — число чашек Петри, d — коэффициент разведения образца, 10 — коэффициент пересчета при проведении высева на чашку в объеме 0,1 мл.

Пример. При посеве из разведения 10–2 на двух чашках выросло 168 и 215 колоний

Полученный результат записывают как 1,9·104 ко- лониеобразующих единиц (КОЕ).

При необходимости подсчета общего количества микроорганизмов (бактерий и грибов суммарно) в 1 г или в 1 мл лекарственного средства следует сложить число аэробных бактерий с числом грибов.

В связи с тем, что ЛРС, представляющие собой лекарственные растения или их части (листья, цветки, трава, плоды, семена, кора, корни, корневища и др.), являются неоднородными в отношении количества аэробных бактерий и грибов, нормы допустимой ми- кробной загрязненности ЛРС интерпретируют следу- ющим образом:

• Если количество микроорганизмов в 1 г не бо- лее 10 5 КОЕ — максимально допускается 5 ´ 10 5  КОЕ

• Если количество микроорганизмов в 1 г не бо- лее 10 7 КОЕ — максимально допускается 5 ´ 10 7 КОЕ и т. д.

Для остальных категорий лекарственных препа- ратов (за исключением ЛРС) нормы допустимой ми- кробной загрязненности интерпретируют следующим образом:

• Если количество микроорганизмов в 1 г или в 1 мл не более 10 2 КОЕ — максимально допускается 2 ´ 10 2  КОЕ

• Если количество микроорганизмов в 1 г или в 1 мл не более 10 3 КОЕ — максимально допускается 2 ´ 10 3 КОЕ и т. д.

Варианты чашечного агарового метода (глубин- ный, двухслойный и модифицированный) можно ис- пользовать при испытании различных лекарственных форм, независимо от уровня микробной загрязнен- ности. Поверхностный агаровый метод предпочти- тельнее использовать при испытании ЛС с высоким уровнем микробной контаминации. Для сокращения сроков получения результатов количественного опре- деления бактерий и грибов, колонии которых склон- ны к сливному росту, используют модифицированный агаровый метод посева.

 

Метод мембранной фильтрации

используют для количественного и качественно- го определения микроорганизмов в лекарственных средствах, обладающих или не обладающих антими- кробным действием, в частности для растворов и во- дорастворимых лекарственных средств, а также для жиросодержащих препаратов, растворимых в изопро- пилмиристате.