Экспериментальные исследования

Выполнено большое число экспериментальных работ, в которых в условиях in vitro и в опытах на животных показано, что полифенолы зеленого чая, в первую очередь ЭГКГ, обладают терапевтической противоопухолевой активностью при широком спектре опухолей.

R.Thangapazham с соавт. методом проточной цитофлюометрии показали, что обработка клеток рака молочной железы человека линии MDA-MB-231 (эстроген-отрицательная высокоинвазивная опухоль) экстрактом зеленого чая и ЭГКГ подавляет клеточную пролиферацию, вызывая блок клеточного цикла в фазе G1. Этот эффект связывают с подавлением в этих клетках экспрессии циклинов D,E циклинзависимых киназ 1, 4. Под действием экстракта зеленого чая и ЭГКГ в этих клетках зарегистрированы также такие показатели усиления апоптоза, как увеличение Bax, уменьшение Bcl-2 и PARP (поли-АТФ-рибоза полимераза). Введение в культуру клеток экстракта зеленого чая или ЭГКГ приводило к дозо-зависимому снижению инвазивности опухолевых клеток на 15-28% при выраженном подавлении экспрессии матриксной металлпротеазы-9 [153]. Аналогичные результаты получены в экспериментах с другой ЭР-независимой линией клеток рака молочной железы MDA-MB-468. ЭГКГ ингибировал пролиферацию этих клеток на 15-100% и на 3-78% снижал их жизнеспособность (в зависимости от дозы) [118].

Следует отметить, что ЭГКГ ингибирует рост в мягком агаре клеток рака молочной железы с гиперэкспрессией Her-2/neu, что связывают с изменением под его влиянием экспрессии ряда генов, регулирующих фенотип клетки, приводящим, в частности, к снижению инвазивности опухолевых клеток [15].

Способность ЭГКГ подавлять клеточную пролиферацию показана также на культуре клеток рака легкого человека РС-9. Введение в культуру этого катехина приводила к блоку клеточного цикла в фазе G₂/M [42].

Антитпролиферативное действие ЭГКГ обнаружено на 2 линиях клеток меланомы человека (амелонотическая злокачественная меланома А-375 и метастазирующая меланома Hs-294T). Воздействие ЭГКГ дозо-зависимым образом ингибировало жизнеспособность и рост этих клеток. Важно отметить, что на нормальные меланоциты эти же дозы ЭГКГ никакого эффекта не оказывали. Подавление пролиферации клеток меланомы, также как и клеток рака молочной железы, происходило на фоне усиления проапоптотических факторов и ингибирования антиапоптотических [106]. На 8 клеточных линиях меланомы человека, полученных из метастазов в лимфоузлах и в различных органах, показано, что эти линии различаются по чувствительности к действию разных катехинов зеленого чая. Наиболее эффективно подавлял пролиферацию и вызывал гибель клеток ЭГКГ, однако в ряде случаев больший эффект регистрировался при действии других катехинов. Исходя из этого, авторы считают, что наиболее эффективным для терапии опухолей (по крайней мере, меланомы) является применение комбинации разных катехинов, нежели одного ЭГКГ [114,115].

На ряде клеточных линий опухолей человека (андроген-чувствительный (LNCaP) и андроген-нечувствительный (DU145) рак предстательной железы, эпидермоидная карцинома А431, рак яичников) показано, что подавление клеточной пролиферации под действием ЭГКГ сопровождается блоком клеточного цикла в фазе G₀/G₁. Этот эффект обусловлен ингибированием каскада циклин-зависимых киназ. В зависимости от дозы подобный процесс может иметь необратимый характер, что в свою очередь ведет к индукции апоптоза [7, 47, 114].

Имеющиеся к настоящему времени данные указывают, что наиболее чувствительными к действию катехинов зеленого чая фазами жизненного цикла опухолевых клеток, вероятно, являются фаза G₁ и переходы G₀/G₁ и G₂/М. Клетки в фазе синтеза ДНК (S) к действию этих соединений, очевидно, не чувствительны.

Обнаружено, что ЭГКГ оказывает дозозависимое ингибирующее действие на жизнеспособность и пролиферацию клеток рака мочевого пузыря человека линии Т24 также в результате индукции апоптоза [113].

Имеются экспериментальные подтверждения противоопухолевой активности зеленого чая, полученные в экспериментах in vivo. В опытах с перевиваемым метастазирующим раком молочной железы 4Т1 обнаружено, что под влиянием экстракта зеленого чая, добавляемого в питьевую воду, подавляется рост первичной опухоли, метастазов в легкие и увеличивается время жизни животных [13]. В опытах на мышах nude с трансплантированными клетками рака молочной железы человека MDA-MB-231 обнаружено, что введение животным экстракта зеленого чая и ЭГКГ, ведет к задержке появления пальпируемых опухолей, торможению их роста, в ряде случаев к регрессии опухоли. При иммуногистохимическом исследовании этих опухолей выявлена индукция апоптоза и подавление пролиферации [152].

Противоопухолевый эффект ЭГКГ продемонстрирован на ксенографтах рака толстой кишки человека НТ29, трансплантированных мышам BALB/c nude. В этих экспериментах ЭГКГ вводился внутрибрюшинно в дозе 1,5 мг/день/мышь, начиная с 3-го дня после перевивки опухолевых клеток. Применение ЭГКГ уменьшало пролиферацию опухолевых клеток на 27%, ингибировало рост опухолей на 58%, и в 1,9 раза усиливало апоптоз опухолевых клеток [168].

Пероральное введение ЭГКГ мышам с ксенографтами гепатоцеллюлярного рака человека HuH7 приводило к существенному ингибированию роста опухолей на фоне подавления неоангиогенеза, усиление которого характерно для этой опухоли [143]. Показано также селективное, по сравнению с нормальными гепатоцитами, подавление пролиферации клеток гепатоцеллюлярного рака НерG2, которое связывают с ингибированием экспрессии рецептора инсулин-подобного фактора роста-1, повышенная активация которого характерна для этих клеток [131].

В опытах in vivo на модели рака предстательной железы человека у трансгенных мышей (TRAMP) показано, что при введении мышам экстракта зеленого чая, начиная с 28-недельного возраста при развившейся умеренно-дифференцированной аденокарциноме, время жизни животных увеличилось с 42 недель в контроле до 51 недели [6].

I.Siddiqui с соавт. считают, что в отношении рака предстательной железы зеленый чай обладает как протективным, так и терапевтическим эффектом. Они обнаружили, что полифенолы зеленого чая ингибируют рост у мышей nude ксенографтов андроген-чувствительного рака предстательной железы человека линии CWR22nu1, снижают уровень ПСА и вызывают регрессию развившихся опухолей. Ими показано, что помимо индукции апоптоза, эти эффекты могут быть связаны также с вызываемым полифенолами снижением уровня фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) [137].

Пероральное введение экстракта зеленого чая ингибировало рост ксенографтов рака яичников человека линии HEY, для которой характерна гиперэкспрессия эндотелина-1 и его рецептора. Зеленый чай и ЭГКГ ингибируют экспрессию этих протеинов, что ведет к подавлению обусловленной ими клеточной пролиферации, неоангиогенеза и инвазии [140].