Тема: Микроорганизмы окружающей среды и санитарно-бактериологические методы их обнаружения.

Цель занятия: изучить экологическую роль микробов в круговороте веществ в природе, оценить значение микрофлоры воздуха, воды и почвы в эпидемиологии инфекционных заболеваний, освоить методы загрязнения воды, воздуха, почвы.

План занятия.

1. Роль микробов в круговороте веществ в природе. Микроорганизмы и биосфера.

2. Микрофлора воздуха, ее значение в эпидемиологии инфекционных заболеваний.

3. Методы определения бактериальной загрязненности воздуха: а) седиментационный метод Коха; б) аспирационный метод с использованием аппарата Кротова.

4. Микрофлора воды и ее медицинское значение.

5. Характеристика показателей загрязненности воды: а) бродильный титр (наименьший объем воды, при засеве которого на питательную среду с глюкозой обнаруживается газообразование; б) коли-титр (количество воды, в котором содержится 1 кишечная палочка, N=300 мл); в) коли-индекс (количество особей кишечной палочки в 1 л воды, N=2-3); г) микробное число (число микробов в 1 мл воды, N=100).

6. Определение загрязненности воды: а) метод мембранных фильтров; б) двухфазный бродильный метод; в) метод определения микробного числа воды.

7. Микрофлора почвы, ее роль в эпидемиологии инфекционных заболеваний.

8. Характеристика методов определения микробного числа почвы.   

Задания для выполнения лабораторной работы.

1. Провести посев воздуха учебной комнаты методом Коха.

Таблица 10

Санитарно-показательные бактерии окружающей среды и пищевых продуктов

Объект	Характер загрязнения	Санитарно-показательные бактерии
1	2	3
Вода	Фекальное	Бактерии группы кишечных палочек Escherichia coli, Citobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis
Почва	То же     Промышленно-бытовые (разлагающиеся отбросы)	Те же бактерии и клостридии (Clostridium perfringens, Cl. sporogenes и др.) Термофильные бактерии, Proteus vulgaris
Пищевые продукты	Фекальное   Орально-капельное	Бактерии группы кишечных палочек Е.f aecalis, P. vulgaris Staphylococcus aureus
Предметы обихода	Фекальное   Орально-капельное	Бактерии группы кишечных палочек Е.f aecalis, P. vulgaris Staphylococcus aureus
Воздух	То же	St. aureus, S.pyogenes
Вода, почва, воздух	Промышленное	Производственные штаммы микробов

 

Седиментационный метод. Две чашки Петри с МПА оставляют открытыми на 60 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С. Результат оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обоих чашках: чистый воздух – менее 250, средней степени загрязненности – 250-500, загрязненный – более 500 колоний.

 

2. Провести санитарно-бактериологическое исследование водопроводной воды:

    а) методом мембранных фильтров;

    б) методом титрования.

Учесть результат по демонстрационным препаратам.

    Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде. Воду из водопроводной сети фильтруют в объеме 333 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо, инкубируют при 37°С одни сутки и подсчитывают число выросших колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки. Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и определяют оксидазную активность.

       Метод титрования. Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл в глюкозопептонную среду (1 % пептонная вода, 0,5 % раствор глюкозы, 0,5 % раствор NaCl, индикатор Андреде и поплавок. Посевы инкубируют в течение 1 суток при 37°С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших проб делают посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Грамму и ставят оксидазный тест позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. С  этой целью стеклянной палочкой снимают 2-3 изолированные колонии с поверхности питательной среды, наносят штрихами на фильтровальную бумагу, смоченную диметил-n-фенилендиамином. При положительном результате фильтровальная бумага окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Грамотрицательные палочки, не образующие оксилдазу, вновь исследуют в бродильном тесте – вносят в полужидкий питательный агар с 0,5 % раствором глюкозы и инкубируют при   37°С в течение 1 суток. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по статистической таблице.

 

Таблица 11

Нормативы для питьевой воды (ГОСТ 2874-82)

Показатель	Норматив
Число микробов в 1 мл воды, не более	100
Число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды (коли-индекс), не более	3

 

Рис. 15. Метод мембранных фильтров.                                                       

 

                                                                             

 

				Колонии E.coli на среде Эндо

3. По демонстрационным препаратам изучить результаты опыта по проведению санитарно-бактериологического исследования воды.

Вопросы для обсуждения.

1. Микроорганизмы и биосфера. 2. Роль микробов в круговороте фосфора, азота, углерода в природе. 3. Значение микрофлоры воздуха для эпидемиологии инфекционных заболеваний. 4. Санитарно-бактериологические показатели загрязненности воздуха. 5. Сравнительная характеристика методов определения загрязненности воздуха (метод Коха, метод с использованием аппарата Кротова). 6. Методы определения загрязненности воды (водопроводной, открытых водоемов).                            7. Характеристика показателей загрязненности воды. 8. Роль микрофлоры почвы в эпидемиологии инфекционных заболеваний. 9. Определение микробного числа почвы. 10. Определение коли-титра, перфрингенс-титра почвы, их сравнительная характеристика. 11. Состав микробного пейзажа в зависимости от вида почвы (подзолистые, песчаные, богатые гумусом).   12. Роль абиотических факторов в формировании микробного пейзажа почвы.

Дополнительный материал.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ