Опыт 4. Определение изоэлектрической точки белка (демонстрационный).

1. Возьмите 7 пробирок одинакового диаметра.

2. Насыпьте в каждую пробирку меркой по 0,5 см измельченного в порошок желатина.

3. Прилейте в каждую пробирку по 10 мл буферного раствора с определенной величиной рН (приготовление буферных растворов см. таблицу).

 

рН буферного раствора	2	3	4	5	6	7	8
0,2 М р-р КН2РО4 (мл)	–	2	4	5	7	8	10
0,1 М р-р лимонной к-ты (мл)	10	8	6	5	3	2	–

 

Через 15-20 мин измерьте высоту каждого столбика набухшего желатина. Постройте график зависимости степени набухания от величины рН и определите изоэлектрическую точку желатина (рI). Аргументируйте ответ.

 

 

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

 

Занятие № 3. «Физико-химические свойства углеводов»

Цель занятия: изучить качественные реакции углеводов, лежащих в основе их количественного определения в биологическом материале.

 

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Биологические функции углеводов.

2. Классификация углеводов.

3. Строение углеводов.

4. Физико-химические свойства углеводов.

5. Строение и свойства гетерополисахаридов. Биологическая роль данных соединений.

 

Дата выполнения______ Балл _____Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Качественная реакция Молиша на пентозную группировку.

Это качественная реакция на углеводы. Внимание! Реакция настолько чувствительна, что ее может вызвать даже пылинка и волоконце на стенках пробирки. Поэтому посуду, в которой проводят реакцию, надо очень тщательно мыть.

1. Возьмите три пробирки.

2. В пробирку 1 добавьте 0,5 мл 1%-ного раствора любого углевода (глюкозы, сахарозы, крахмала). В пробирку 2 добавьте 0,5 мл раствора яичного белка. В пробирку 3 добавьте 0,5 мл раствора слюны.

3. Добавьте по 3 капли свежеприготовленного 0,1%-ного спиртового раствора a-нафтола. Смесь слегка мутнеет из-за выпадения a-нафтола в осадок.

4. Осторожно из пипетки по стенке пробирки прилейте около 0,5 мл концентрированной серной кислоты так, чтобы она опустилась на дно, не смешавшись с водным слоем. При наличии в исследуемой пробе углеводов на границе слоев появляется зелено-фиолетовое кольцо.  

 

Объясните результаты опыта.

 

 

Опыт 2. Качественная реакция Троммера на редуцирующие сахара.

1. Возьмите две пробирки.

2. В одну из 2-х пробирок налейте 1 мл 1%-ного раствора глюкозы, во вторую – 1 мл 1%-ного раствора сахарозы.

3. В обе пробирки добавьте по 5 капель или 0,5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и 2 капли 1%-ного раствора сульфата меди (II).

4. Нагрейте пробирки до кипения в кипящей водяной бане (не кипятите!).

 

    Объясните, почему глюкоза дает положительную пробу Троммера (желтый или красно-коричневый осадок), а сахароза нет?

Опыт 3. Гидролиз крахмала в кислой среде.

1. В пробирку налейте примерно 5 мл 1%-ного раствора крахмала и 5 капель концентрированной соляной кислоты.

2. Поставьте пробирку в кипящую водяную баню. Не вынимайте пробирку из бани до конца опыта.

3. Через 2 минуты возьмите из кипящей пробирки примерно 0,5 мл раствора крахмала и перелейте в другую пробирку с 3-мя мл дистиллированной воды. Добавьте 1 каплю раствора Люголя или раствора йода в пробирку с водой. Занесите в таблицу наблюдаемую окраску раствора.

4. Пробирку с раствором крахмала кипятите далее еще 3 минуты, и снова проведите такую же пробу с йодом.

5. Описанную последовательность действий проводите до тех пор, пока реакция с йодом не будет отрицательной (жидкость окрашивается в желтый цвет).

 

 

Время с момента начала кипения	Цвет раствора крахмала с реактивом Люголя

 

6. С гидролизатом крахмала (нейтрализованного по лакмусу) проведите реакцию Троммера (см. опыт 2).

 

Объясните результаты эксперимента.

 

Дата выполнения ______ Балл ______ Подпись преподавателя ____________