Этапы приготовления мазков-препаратов.

Приготовление состоит из нескольких последовательных операций: подготовка мазка, высушивание, фиксация и окраска. Исследуемый материал наносят на чистое обезжиренное предметное стекло. Для взятия бактериальной культуры:

- нагревают до покраснения бактериальную петлю в пламени горелки;

- берут пробирку с исследуемой культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцами правой руки к ладони;

- обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю и берут исследуемый материал;

- вынимают петлю, обжигают край пробирки и закрывают пробкой.

- взятый материал осторожно распределяют по предметному стеклу тонким слоем, после чего бактериальную петлю стерилизуют в пламени спиртовки;

- если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора

- мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в токе теплого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки. Нельзя допускать закипания материала, т.к. при этом может нарушиться структура микроорганизмов.

- фиксация препарата: высушенные мазки подвергают термической (предметное стекло (мазком вверх) проводят несколько раз через пламя горелки) или химической (фиксирующие растворы: формалин, спирты, глутаральдегид, жидкость Карнау, ацетон, пары осмиевой кислоты) обработке, в результате которой бактерии погибают и плотно прикрепляются к поверхности стекла.

Методы окраски препаратов.

    Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель – водный фуксин (окрашивание производят 1-2 мин)

и метиленовый синий (окрашивание производят 3-5 мин). После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе, при комнатной температуре, или осторожно промокая фильтровальной бумагой. 

4. Приготовить мазок бульонной культуры кишечной палочки, окрасить водным раствором фуксина, изучить под микроскопом.

       Ведущим методом исследования в микробиологической лаборатории является микроскопический метод. Для микроскопического исследования применяют биологические микроскопы отечественных моделей: «Биолам – р 11», «Биолам – р 15», «Биолам – 17» и др. Также используют еще несколько типов микроскопов: люминесцентный, электронный (просвечивающий электронный микроскоп, сканирующий электронный микроскоп) и специальные методы микроскопии: иммерсионная световая, фазово-контрастная, аноптральная (амплитудноконтрастная, фазовотемнопольная), интерференционная, поляризационная, темнопольная люминисцентная, метод сколов (замораживание – скалывание), иммунофлуоресцентные методы.

5. Освоить технику иммерсионной микроскопии.

- на приготовленный и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить препарат на предметный столик;

- установить иммерсионный объектив х 90 в рабочее положение, осторожно опустить тубус микроскопа вниз до погружения фронтальной линзы иммерсионного объектива в каплю масла.

- установить ориентировочный фокус при помощи макровинта. Окончательную фокусировку произвести микровинтом.

6. Изучить под микроскопом демонстрационные препараты.

   

Вопросы для обсуждения.

1. Предмет микробиология, основные понятия. 2. Роль микробов в живой и неживой природе. 3. Правила работы в микробиологической лаборатории. 4. Оборудование и организация работы микробиологической лаборатории. 5. Методы изучения микроорганизмов: микроскопический, бактериологический, экспериментальный, серологический, кожно-аллергический. 6. Виды современных микроскопов. 7. Правила работы с микроскопом. 8. Изучение микроорганизмов микроскопическим методом. 9. Изучение микробов методом иммерсионной микроскопии. 10. Тинкториальные свойства микроорганизмов. 11. Техника приготовления мазков-препаратов. 12. Простые методы окраски микроорганизмов. 13. Морфология бактерий. 14. Измерение размеров микробной клетки с помощью окуляр-микрометра и объект-микрометра.

 

Оформление лабораторной тетради.

    Записать правила работы в микробиологической лаборатории; зарисовать самостоятельно приготовленные и демонстрационные микропрепараты с различной морфологией микробов.

 

Дополнительный материал.

 

Рис. 1. Принципиальная схема светового микроскопа

ЗАНЯТИЕ 2