Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ:  Археология Биология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия ЭкологияТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву 
Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
С основами общей и частной вирусологииСтр 1 из 21Следующая ⇒
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЛАБОРАТОРНЫМ ЗАНЯТИЯМ ПО ОБЩЕЙ МИРОБИОЛОГИИ С ОСНОВАМИ ОБЩЕЙ И ЧАСТНОЙ ВИРУСОЛОГИИ САРАНСК 2003 УДК
Составители: Л.В. Новикова, И.П. Куторкина, И.С. Романова.
Методические указания к лабораторным занятиям по общей микробиологии с основами общей и частной вирусологии. // Сост.: Л.В.Новикова, И.П.Куторкина, И.С.Романова. – Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2003. – 64 с.
Методические указания написаны в соответствии с программой по микробиологии с вирусологией. Содержат планы занятий, задания для выполнения лабораторной работы, вопросы для самостоятельной подготовки к занятиям, основные методы изучения микроорганизмов и вирусов, дополнительный материал. Предназначены для студентов III курса дневного отделения биологического факультета специальности «Биоэкология».
Печатается по решению научно-методического совета Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева.
ЗАНЯТИЕ 1 Тема: МИКРОБИОЛОГИЯ И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ БИОЭКОЛОГИИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ. Цель занятия: ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, с методами изучения микроорганизмов, освоить технику иммерсионной микроскопии; освоить технику приготовления и простых методов окраски мазков-препаратов. План занятия. 1. Распространение микробов в окружающей среде. Роль микробов в живой и неживой природе. 2. Микробиологическая лаборатория. Оборудование, правила работы, организация рабочего места. 3. Методы изучения микроорганизмов (микроскопический, бактериологический, экспериментальный, серологический, кожно-аллергический). 4. Микроскопический метод исследования. Виды современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия. 5. Тинкториальные свойства бактерий. Этапы приготовления мазков-препаратов. Простые методы окраски. 6. Морфология бактерий. Измерение размеров микробных клеток.
Задания для выполнения лабораторной работы. 1. Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории. Выполняя микробиологические исследования, необходимо соблюдать следующие правила:
- в лаборатории должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску из марли. Работа с особо опасными микробами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях; - с инфицированным материалом работают только с помощью инструментов (бактериологические петли, пинцеты, корцанги и др.); - прикасаться руками к исследуемому материалу запрещается; - при посеве материала делают надпись на пробирках и чашках Петри и пр.; - материал высевают в пробирки и чашки Петри вблизи от пламени горелки с обжиганием бактериологической петли и краев пробирки; - растворы, содержащие патогенные микроорганизмы, забирают пипеткой с помощью резинового баллона; - в лаборатории запрещается курить и принимать пищу; - рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи следует хранить в специально отведенном месте; В ходе работы и по ее окончании применяются следующие способы дезинфекции: - при случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором; - руки обрабатывают дезинфицирующим раствором, а затем моют с мылом; - помещение дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп и путем обработки поверхности лабораторной мебели дезинфицирующим раствором. 2. Ознакомиться с оборудованием микробиологической лаборатории. Лаборатории снабжены рядом обязательных приборов и аппаратов:
Каждое рабочее место снабжается спиртовкой и сосудом с дезинфицирующим раствором.
3. Приготовить мазок с агаровой культуры стафилококка, окрасить метиленовой синей, изучить под микроскопом. Методы окраски препаратов. Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель – водный фуксин (окрашивание производят 1-2 мин) и метиленовый синий (окрашивание производят 3-5 мин). После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе, при комнатной температуре, или осторожно промокая фильтровальной бумагой. 4. Приготовить мазок бульонной культуры кишечной палочки, окрасить водным раствором фуксина, изучить под микроскопом. Ведущим методом исследования в микробиологической лаборатории является микроскопический метод. Для микроскопического исследования применяют биологические микроскопы отечественных моделей: «Биолам – р 11», «Биолам – р 15», «Биолам – 17» и др. Также используют еще несколько типов микроскопов: люминесцентный, электронный (просвечивающий электронный микроскоп, сканирующий электронный микроскоп) и специальные методы микроскопии: иммерсионная световая, фазово-контрастная, аноптральная (амплитудноконтрастная, фазовотемнопольная), интерференционная, поляризационная, темнопольная люминисцентная, метод сколов (замораживание – скалывание), иммунофлуоресцентные методы. 5. Освоить технику иммерсионной микроскопии. - на приготовленный и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить препарат на предметный столик; - установить иммерсионный объектив х 90 в рабочее положение, осторожно опустить тубус микроскопа вниз до погружения фронтальной линзы иммерсионного объектива в каплю масла. - установить ориентировочный фокус при помощи макровинта. Окончательную фокусировку произвести микровинтом. 6. Изучить под микроскопом демонстрационные препараты.
Вопросы для обсуждения. 1. Предмет микробиология, основные понятия. 2. Роль микробов в живой и неживой природе. 3. Правила работы в микробиологической лаборатории. 4. Оборудование и организация работы микробиологической лаборатории. 5. Методы изучения микроорганизмов: микроскопический, бактериологический, экспериментальный, серологический, кожно-аллергический. 6. Виды современных микроскопов. 7. Правила работы с микроскопом. 8. Изучение микроорганизмов микроскопическим методом. 9. Изучение микробов методом иммерсионной микроскопии. 10. Тинкториальные свойства микроорганизмов. 11. Техника приготовления мазков-препаратов. 12. Простые методы окраски микроорганизмов. 13. Морфология бактерий. 14. Измерение размеров микробной клетки с помощью окуляр-микрометра и объект-микрометра.
Оформление лабораторной тетради. Записать правила работы в микробиологической лаборатории; зарисовать самостоятельно приготовленные и демонстрационные микропрепараты с различной морфологией микробов.
Дополнительный материал.
Рис. 1. Принципиальная схема светового микроскопа
ЗАНЯТИЕ 2 План занятий. 1. Ультраструктура бактериальной клетки. Постоянные структурные элементы (нуклеоид, цитоплазма, цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка, мезосомы, рибосомы), их строение и функции. 2. Особенности строения клеточной стенки микробов. Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Окраска по Граму, механизм, значение для классификации бактерий. 3. Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Протопласты и сферопласты. 4. Непостоянные структурные элементы бактериальной клетки (капсула, споры, жгутики, включения, ворсинки). Методы их выявления. 5. Исследование микробов в живом состоянии. Характеристика методов «висячей» и «раздавленной» капли.
Задания для выполнения лабораторной работы. 1. Приготовить мазки из смеси культур грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, окрасить по Граму, изучить под микроскопом. Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выяснить определенные структуры бактериальной клетки. Окраска по Граму. Все бактерии по отношению к окраске по Грамму делятся на грамположительные – темно-фиолетового цвета и грамотрицательные – красного. Способность микроорганизмов окрашиваться в тот или иной цвет зависит от их химического состава. У грамположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, у грамотрицательных, напротив, эти вещества содержатся в большом количестве. Кроме того, у грамположительных бактерий имеется магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, которой нет у грамотрицательных. Она и образует прочный химический комплекс с белком, генциан-виолетом и йодом, который не разрушается при кратковременном действии спирта. У грамотрицательных такой комплекс не образуется. Техника окраски по Граму. - окрасить мазок генциан-виолетом (2 мин, через фильтровальную бумагу); - бумагу удалить, оставшуюся краску слить; - окрасить мазок раствором Люголя (1 мин); - раствор Люголя слить и нанести несколько капель чистого 96% спирта (на 30-40 с осторожно покачивая стеклом);
- тщательно смыть спирт водой; - окрасить водным фуксином 2 мин); - промыть водой и высушить при помощи фильтровальной бумаги. Мазок поместить на предметный столик микроскопа, нанести в центр каплю иммерсионного масла, промикроскопировать. Зарисовать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Некоторые виды бактерий образуют внутриклеточные (эндогенные) споры. В отличие от вегетативной клетки они обладают меньшим количеством свободной воды, а так же высоким содержанием липидов и кальция. Зрелая спора с трудом поддается окрашиванию из за малой проницаемости оболочки. Проницаемость оболочки резко увеличивается после обработки горячей соляной кислотой или при использовании концентрированного раствора краски с подогревом. Вопросы для обсуждения. 1. Постоянные и непостоянные структурные элементы микробной клетки. 2. Внутренние и поверхностные структурные элементы микробной клетки. 3. Строение и функции постоянных структурных элементов (нуклеоид, цитоплазма, цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка, мезосомы, рибосомы). 4. Дифференциация бактерий с помощью окраски по Граму. 5. Особенности строения клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. 6. Техника окраски микробов по Граму. 7. Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. 8. Строение и функции непостоянных структурных элементов бактериальной клетки (капсула, споры, жгутики, включения, ворсинки). 9. Методы выявления непостоянных структурных элементов микробов: Шеффера-Фултона, Ожешко, Циля-Нильсена, Бури-Гинса, Нейссера. 10. Характеристика методов исследования микроорганизмов в живом состоянии. 11. Этапы методов «висячей» и «раздавленной» капли. Оформление лабораторной тетради. Переписать в тетрадь таб. 1; зарисовать микропрепараты из исследуемого материала с окраской по Грамму и Бури-Гинсу; зарисовать демонстрационные препараты.
Дополнительный материал. Таблица 1 Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов
ЗАНЯТИЕ № 3
План занятий. 1. Понятие об эукариотах и прокариотах, их отличительные признаки, представители. 2. Характеристика актиномицетов как переходной группы микроорганизмов от истинных бактерий к грибам. 3. Морфология и ультраструктура спирохет. Классификация спирохет. 4. Особенности морфологии и структуры микоплазм. Полиморфизм микоплазм. Патогенные виды. Стабильные и нестабильные L-формы бактерий. 5. Положение в систематике микроорганизмов риккетсий и хламидий. Их морфология, строение и химический состав. 6. Основные методы окраски прокариотических микроорганизмов.
Задания для выполнения лабораторной работы. 1. Изучить под микроскопом и зарисовать демонстрационные препараты прокариотических микроорганизмов: актиномицетов, спирохет, риккетсий. 2. Приготовить мазок из зубного налета, окрасить по методу Романовского-Гимзе, изучить под микроскопом и зарисовать обнаруженные формы микроорганизмов. Окраска по Романовкому-Гимзе относится к сложным методам и применяется для изучения морфологии простейших. Этот метод окраски позволяет выявить ядерные элементы клеток простейших и включения. Вопросы для обсуждения. 1. Понятие об эукариотах и прокариотах, представители. 2. Отличительные признаки эукариотических и прокариотических клеток. 3. Структурно-морфологические особенности актиномицетов. 4. Актиномицеты как переходная группа от истинных бактерий к грибам. 5. Морфология и структура спирохет. 6. Классификация спирохет. 7. Спирохеты как переходная группа от прокариот к простейшим. 8. Особенности морфологии и структуры микоплазм. 9. Полиморфизм микоплазм. 10. Стабильные и нестабильные L-формы бактерий. 11. Морфология и структура риккетсий и хламидий. 12. Отличительные признаки риккетсий и хламидий от вирусов и истинных бактерий. 13. Основные методы окраски актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий и микоплазм. 14. Техника окраски микроорганизмов по методам Романовкого-Гимзе и Здродовского.
Оформление лабораторной тетради. Записать таб. 2,3; зарисовать микропрепараты из исследуемого материала с окраской по Романовскому-Гимзе; зарисовать демонстрационные препараты.
Дополнительный материал. Таблица 2 Основные различия клеток прокариотов (эубактерий) и эукариотов
Генетический материал | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Расположение | Нет мембраны, отграничи-вающей его от цитоплазмы | Отграничен от цитоплазмы ядерной мембраной | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Форма Внехромосомная ДНК Гистоны Тип деления | Кольцевая молекула ДНК Располагается в плазмидах Отсутствуют Бинарный | Хромосома Располагается в митохондриях Имеются Митотический | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Синтез белка | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Рибосомы Место синтеза | 70S (50Sи 30S субъединицы) Рибосомы, свободно распо-ложенные в цитоплазме | 80S (60S и 40S субъединицы) Рибосомы в составе шероховатой эндоплазма-тической цепи | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Клеточная стенка* | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Структурные элементы Стеролы | Образована пептидоглика-нами Отсутствуют | Содержит хитин и целлюлозу Имеются | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
- У эукариотов ЦПМ.
Рис. 2.Основные различия между прокариотической и эукариотической клетками. 
А Б
Бактериальная (прокариотическая) клетка (А) окружена клеточной стенкой (КС). Цитоплазма обильно насыщена рибосомами. Молекула ДНК обычно расположена в центре клетки. Цитоплазма эукариотической клетки (Б) окружена цитоплазматической мембраной (ЦМП), включает митохондрии (М), вакуоли (В), шероховатую эндоплазматическую сеть с рибосомами (ШЭС), гладкую эндоплазматическую сеть (ГЭС), запасные гранулы (ЗГ) и ядро (Я).
Таблица 3
Морфологические особенности риккетсий, хламидий и микоплазм
| Признак | Риккетсии | Хламидии | Микоплазмы |
| Размеры, форма | 0,5-4 мкм, полиморфны: встречаются кокковид-ные, палочковидные, реже нитевидные клетки | 0,25-1,0 мкм, шаро-видные, овоидные или палочковидные клетки* | 0,2-0,3 мкм, круглые, овальные или нитевид-ные клетки |
| Особенности строения | КС по типу грацили-кутных. Не имеют макро-капсулы, жгутиков. Не-подвижны. Не образуют споры. | КС по типу грацили-кутных; лишены пептидогликана. Не имеют макрокапсулу, жгутиков. Не подвиж-ны. Не образуют споры. | Лишены КС. Имеют выраженный S-слой. Не имеют макрокапсу-лы, жгутиков. Не образуют споры. Подвижны за счет внешнего цитоскелета |
| Окраска | По методу Здродовского | По методу Романовс-кого-Гимзы (микроколонии внутри клеток) | - |
| Методы выявления | Световая, фазово-контрастная, люмине-сцентная, электронная микроскопия | Световая, фазово-контрастная, люмине-сцентная (для выявления микро-колонии внутри кле-ток); электронная микроскопия | Электронная микро-скопия |
ЗАНЯТИЕ № 4
План занятия.
1. Систематика и общие биологические свойства простейших.
2. Морфологические особенности и структура жгутиковых простейших – возбудителей лямблиоза, трихомониаза и лейшманиоза.
3. Морфологические особенности и структура простейших класса Саркодовые (возбудители амебиаза).
4. Морфология и структура споровиков – возбудителей малярии и токсоплазмоза.
5. Морфология и структура ресничных простейших.
6. Методы изучения морфологии простейших.
7. Систематика грибов. Биологические свойства грибов: морфология, ультраструктура и химический состав.
8. Методы изучения морфологии грибов.
Задания для выполнения лабораторной работы.
1. Приготовить препарат «раздавленная капля» из культуры плесневых грибов, изучить под микроскопом, определить на основании строения мицелия, плодоносящих гиф и спор родовую принадлежность, зарисовать.
Морфологию грибов изучают в нативных и фиксированных препаратах. Для приготовления нативного препарата «раздавленная капля», для изучения морфологии плесневых грибов, отделяют препаровальными иглами небольшой участок мицелия с плодоносящими гифами. Материал помещают в каплю воды на предметном стекле, иглой расправляют мицелий, придавливают покровным стеклом и микроскопируют.
2. Изучить под микроскопом и зарисовать демонстрационные препараты простейших: трихомонад, лямблий, лейшманий, малярийного плазмодия.
3. Приготовить препарат из культуры дрожжеподобных грибов, окрасить метиленовым синим. Изучить под микроскопом и зарисовать.
Вопросы для обсуждения.
1. Систематика простейших. 2. Общие биологические свойства простейших. 3. Общая характеристика жгутиковых простейших. 4. Морфология и структура лямблий. 5. Морфологические и структурные особенности трихомонад. 6. Морфологические особенности и структура простейших класса Саркодовые. 7. Морфология и структура дизентерийной амебы. 8. Общая характеристика споровиков. 9. Морфология и структура возбудителя малярии. 10. Морфологические и структурные особенности возбудителя токсоплазмоза. 11. Морфология и структура ресничных простейших. 12. Методы изучения морфологии простейших. 13. Биологические свойства грибов. 14. Методы изучения морфологии грибов.
Оформление лабораторных тетрадей.
Записать таб. 4; зарисовать демонстрационные препараты простейших, микропрепараты из культуры дрожжеподобных и плесневых грибов.
Дополнительный материал.
Таблица 4
Морфологические признаки плесневых грибов
| Род | Мицелий | Вегетативные споры | ||
| вегетативный | репродуктивный | тип | расположение | |
| Mucor | Несептированный | Несептированный спорангиеносец | Эндоспоры | В спорангии |
| Aspergillus | Септированный | Несептированный конидиеносец | Экзоспоры (конидии) | Свободное на концах ответ-вление репро-дуктивных гиф. В виде «лейки» |
| Penicillinum | То же | Септированный конидиеносец | То же | В виде «кисточек» |
Рис. 3. Формы спорообразования у грибов.
А Б В
А – Mucor, Б - Aspergillus, B – Penicillinium.
Рис. 4. Простейшие – возбудители болезней человека.
А Б В Г Д
А - лейшмания; Б – трихомонада; В – дизентерийная амеба; Г – токсоплазма; Д – плазмодий малярии в эритроците.
ЗАНЯТИЕ № 5
План занятия.
1. Химический состав микробной клетки.
2. Катаболизм и анаболизм как составные части процесса метаболизма.
3. Источники питания для микроорганизмов. Типы питания микроорганизмов.
4. Транспорт питательных веществ в клетку микроорганизмов: пассивный (пассивная и облегченная диффузия), активный, транслокация химических групп.
5. Питательные среды, их классификация, характеристика, этапы приготовления, контроль готовых сред. Требования, предъявляемые к питательным средам.
6. Бактериологический метод изучения микроорганизмов. Понятие о чистой культуре микроорганизмов. Схема ее выделения.
Задания для выполнения лабораторной работы.
1. Познакомиться с питательными средами. Записать схему их классификации по происхождению, консистенции, назначению.
Этапы приготовления питательных сред
Согласно прописи питательной среды в дистиллированную воду вносят необходимые компоненты и растворяют при нагревании; рН среды определяют с помощью индикаторных бумажек или электропотенциометров (с учетом того, что после стерилизации рН среды снизится на 0,2). Фильтруют жидкие и желатиновые среды через фильтровальную бумагу; среды с агаром (в горячем состоянии) – через ватно-марлевый фильтр. При необходимости осветляют питательную среду белком куриного яйца, сывороткой или осаждением. Разливают среду в колбы, флаконы, пробирки. Закрывают посуду со средой пробками с бумажными колпачками. В зависимости от состава среды стерилизуют различными способами. Готовые стерильные питательные среды подвергают контролю на стерильность.
Контроль режима стерилизации осуществляется с помощью химических термотестов и искусственных биотестов. Химические термотесты представляют собой вещества, изменяющие свой цвет или физическое состояние при стерилизации, в частности, имеющие различную температуру плавления. Запаянные ампулы с порошком, смешанным с красителем, помещают в стерилизационную камеру. При достижении в камере определенной температуры порошок плавится, образуя сплав, окрашенный в цвет добавленного красителя.
Таблица 5
Показатели температуры плавления порошков-индикаторов
| Название химического вещества-индикатора | Температура плавления, С° | Название химического вещества-индикатора | Температура плавления, С° |
| Бензонафтол | 110 | Резорцин чистый | 118 |
| Антипирин | 115 | Бензойная кислота | 121 |
| Серный цвет | 115 |
Примечание: на 100 г порошка-индикатора добавляют 0,01 г сафранина, 0,005 г фуксина или метиленовой сини.
Бактериологический контроль режима стерилизации заключается в том, что в стерилизационную камеру помещают искусственные биотипы-пробирки с полосками марли, фильтровальной бумаги, зараженными микроорганизмами с известной устойчивостью к температурным воздействиям.
Требования, предъявляемые к питательным средам.
Для обеспечения разнообразных типов метаболизма микроорганизмов питательные среды должны соответствовать следующим требованиям:
- содержать все элементы. Из которых строится микробная клетка: макроэлементы (углерод, азот, кислород, сера, фосфор и др.) и микроэлементы (марганец, молибден, цинк, медь и др.);
- иметь достаточную влажность (не менее 20% Н2О);
- концентрация солей в среде должна обеспечивать изотонию, то есть соответствовать концентрации солей в микробной клетке (для большинства микроорганизмов – 0,5%; для галофильных – 3%);
- концентрация водородных ионов (рН) среды должна быть относительной для данного микроорганизма (рН 4,5 – 8,5);
- окислительно – восстановительный потенциал (Еh) среды должен соответствовать потребностям микроорганизма: для анаэробов-0,120-0,060 В;
- питательная среда должна быть стерильна.
2. Ознакомиться с методами и техникой посева на жидкие и твердые питательные среды.
3. Изучить этапы выделения чистой культуры микробов.
Схема выделения и идентификации чистой культуры бактерий
Исследуемый материал
1-й день Микроскопия мазков или нативных Посев на чашки Петри с питательной
препаратов средой
Изучение выросших колоний
2-й день Мазок, окраска по Граму или по другому Отбор колоний и пересев на скошен-
методу (для изучения морфологии клеток ный МПА или другие среды для на-
и их тинкториальных свойств) копления чистой культуры
3-й день Мазок, окраска по Граму Характеристика роста Идентификация выделенной
для проверки чистоты вы- культуры чистой культуры
деленной культуры
Идентификацию чистой культуры проводят по морфологическим, биохимическим
свойствам, антигенной структуре, факторам патогенности, чувствительности к
бактериофагам (фаготипирование) и антибиотикам.
4-й день Учет результатов и выдача заключения по данным исследования
Примечание: При наличии небольшого числа микробов в исследуемом материале предварительно производят посев на среды обогащения. Некоторые микробы (пневмококки, возбудители туляремии) сначала вводят в организм восприимчивых животных (биологическая проба), затем выделяют чистую культуру.
4. Приступить к выделению чистой культуры (1-й день), зарисовать мазок, записать ход исследования.
5. Зарисовать схему бактериальных транспортных систем рис.5.
Рис. 5. Бактериальные транспортные системы.
Вопросы для обсуждения.
1. Химический состав микробной клетки. 2. Функции соединений входящих в состав микробной клетки. 3. Метаболизм бактериальной клетки. 4. Катаболизм и анаболизм как составные части процесса метаболизма. 5. Источники питания для микроорганизмов. 6. Типы питания микроорганизмов. 7. Классификация микробов по способам питания. 8. Транспорт питательных веществ в клетку микроорганизмов, транспортные системы. 9. Пассивный транспорт (пассивная и облегченная диффузия). 10. Активный транспорт питательных веществ, транслокация химических групп. 11. Классификация питательных сред по происхождению, консистенции, назначению. 12. Этапы приготовления питательных сред. 13. Контроль готовых сред, требования, предъявляемые к питательным средам. 14. Бактериологический метод исследования в микробиологии. 15. Этапы выделения чистой культуры микробов.
Оформление лабораторной тетради.
Записать классификацию питательных сред; зарисовать таб. 5; зарисовать рис. 5; зарисовать схему выделения чистой культуры микроорганизмов по этапам; записать ход исследования по выделению чистой культуры (1-й день), зарисовать мазок.
ЗАНЯТИЕ № 6
План занятий.
1. Основные группы ферментов бактерий. Значение ферментов для жизнедеятельности бактерий и идентификации видов.
2. Идентификация бактериальной культуры: а) по культуральным признакам; б) по биохимическим свойствам.
3. Методы определения ферментов микроорганизмов.
4. Стерилизация. Методы стерилизации.
5. Определение эффективности стерилизации.
6. Выделение чистой культуры микроорганизмов (продолжение).
Задания для выполнения лабораторной работы.
1. Учесть результаты первого дня выделения чистой культуры микроорганизмов и продолжить ее выделение (2-й день): а) описать морфологию колоний на чашках с МПА (таб. 6); б) отобрать изолированные колонии; в) из части колоний сделать мазки, окрасить по Граму; г) пересеять исследуемую колонию на скошенный агар.
Таблица 6
Схема изучения колоний
| № | Признак | Возможные характеристики колоний |
| 1. | Форма | Плоская, выпуклая, куполообразная, вдавленная, круглая, розеткообразная, звездчатая |
| 2. | Величина, мм | Крупные (4-5 мм), средние (2-4 мм), мелкие (1-2 мм), карликовые (< 1 мм) |
| 3. | Характер поверхности | Гладкая (S-форма), шероховатая (R-форма), исчерченная, бугристая, матовая, блестящая |
| 4. | Цвет | Бесцветные, окрашенные |
| 5. | Прозрачность | Прозрачные, непрозрачные, полупрозрачные |
| 6. | Характер краев | Ровные, зазубренные, бахромчатые, волокнистые, фестончатые |
| 7. | Внутренняя структура | Гомогенная, зернистая, неоднородная |
| 8. | Консистенция | Вязкая, слизистая, крошковидная |
| 9. | Эмульгирование в капле воды | Хорошо, плохо |
Примечание: 5-7 пункты изучаются при малом увеличении микроскопа.
2. Изучить сахаролитические и протеолитические ферменты кишечной группы при посеве на «пестрый» ряд и мясо-пептонный бульон.
Определение сахаролитических свойств микробов проводят путем посева на питательные среды, содержащие сахара, многоатомные спирты и индикатор. Под действием образующейся при разложении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды, появляются пузырьки газа. Сахаролитические свойства изучают и на таких средах, как среды Эндо, Левина, Плоскирева. В состав этих сред входит молочный сахар – лактоза, и если микроорганизм разлагает его, то цвет колоний изменяется соответственно индикатору, входящему в состав среды.
Определение протеолитических свойств микробов проводят на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном. При посеве уколом в столбик желатиновой среды микробы, разлагающие желатин, разжижают среду. Действие микроорганизмов, разлагающих казеин, проявляется в пептонизации молока, которое приобретает вид молочной сыворотки.
В процессе ферментации пептонов микроорганизмы образуют индол (С8Н7N), сероводород (Н2S), аммиак (NH3) и другие соединения. Для их обнаружения используют лакмусовую бумагу. При наличии сероводорода, фильтровальная бумага, пропитанная раствором уксуснокислого свинца, чернеет. Для выявления индола используют индикаторную бумагу, пропитанную раствором щавелевой кислоты. В присутствии индола бумага краснеет. Аммиак определяют при помощи увлажненной красной лакмусовой бумаги. В присутствии аммиака бумага синеет.
В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением сахаролитических и протеолитических свойств исследуемых бактерий, если этого достаточно для их идентификации. При необходимости исследуют другие признаки, например способность восстанавливать нитраты, карбоксилировать аминокилоты, образовывать оксидазу, плазмокоагулазу, фибринолизин и другие ферменты.
3. Результаты работы по идентификации выделенной культуры записать в таб. 7.
Таблица 7
Характеристика культуры по морфологическим и физиологическим признакам
(форма протокола)
| Морфология | Окраска по методу Грама | Характер роста | Биохимические свойства | Наименование рода и вида | ||||||||
| к о л о н и й | н а
б у л ь о н е | н а
а г а р е | ферментация | Обра-зова-ние
|
||||||||
|
|
Последнее изменение этой страницы: 2021-11-27; просмотров: 83; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.118.30.253 (0.233 с.) |
|||||||||||
