Микробилогическая диагностика

 Материалом для иссле­дования служит отделяемое носовой части глотки, спин­номозговая жидкость, кровь, соскоб из элементов гемор­рагической сыпи на коже.

Спинномозговую жидкость собирают в стерильную пробирку и сразу же сеют на питательные среды или немедленно, не допуская охлаждения, отправляют в ла­бораторию, так как менингококки очень чувствительны к колебаниям температуры.

Отделяемое слизистой оболочки носовой части глотки снимают специальным тампоном, изогнутым под углом. Наиболее результативным является немедленный посев носоглоточной слизи на плотные питательные среды, причем для максимального разъединения бактериаль­ных клеток используют 2—3 чашки со средой. Если ма­териал будет исследоваться через 3—5 ч после взятия, его засевают в жидкую питательную среду (казеиновый гидролизат ферментативного расщепления с содержа­нием 1,5 г/л аминного азота и добавлением 250 ЕД/мл ристомицина), а затем помещают в водяную баню при температуре 37 °С. После этого его высевают на сыво­роточный агар и помещают в термостат.

Бактериоскопическое исследование спинномозговой жидкости и крови дает возможность определить наличие возбудителя. Если спинномозговая жидкость имеет вид гноя, то мазки готовят без ее предварительной обработ­ки; при незначительной мутности спинномозговую жид­кость центрифугируют, и из осадка делают мазки. Окрашивают их анилиновыми красителями (водный ра­створ основного фуксина, метиленовый синий ), так какпри окраске по Граму форменные элементы спинномозговой жидкости из­меняются, отмечается большое количество артефактов. Менингококки имеют вид диплококков бобовидной фор­мы, расположенных внутри цитоплазмы лейкоцитов и соприкасающихся вогнутыми краями. Часто обнаружи­вается нежная капсула. При менингококкцемии менин­гококки можно обнаружить в мазках крови. В этом случае готовят препарат толстой капли, окрашивают его 2—3 мин водным раствором метиленовой сини без фиксации, лишнюю окраску смывают водопроводной водой и высушивают препарат на воздухе. На голубом фоне препарата видны окрашенные в темно-синий цвет лейкоциты, а между ними множество мелких, темно-синих кокков, расположенных в виде кучек, парно или по одному.

Экспресс-диагностика осуществляется с помощью реакции преципитации в геле, встречного иммуноэлектрофореза с групповыми преципитирующими антисыво­ротками или радиоиммунологического метода и основана на обнаружении в спинномозговой жидкости или крови больного специфического антигена.

Бактериологическое исследование. Одновременно с бактериоскопией производят посев спинномозговой жид­кости или ее осадка. Менингококк растет на специаль­ных питательных средах, содержащих нативный белок (сывороточный бульон и агар). Можно использовать агар Хоттингера, содержащий 0,15 % нерастворимого крахмала, что значительно удешевляет питательную среду и не изменяет культуральных, ферментативных, агглютинабельных свойств возбудителя. Лучше спинно­мозговую жидкость сеять после центрифугирования при 35000 об/мин в течение 5 мин. Со дна берут 0,3—0,5 мл материала и засевают 2—3 капли на поверхность по­догретой питательной среды. Посев культивируют при температуре 37 °С и повышенном содержании СО₂. Для этого в крышку стерильной чашки Петри кладут лист фильтровальной бумаги, пропитанной 1,5—2,0 мл 10 % пирогаллола, а сверху второй лист, смоченный 1,5— 2,0 мл 20 % раствора натрия гидрокарбоната. Чашку с посевом закрывают крышкой с листами бумаги и переворачивают ее (крышкой вниз). Остаток спинномоз­говой жидкости используют для реакции встречного иммуноэлектрофореза.

На 2-й день после инкубации при температуре 37 ^СС изучают культуральные свойства. Менингококки образуют небольшие, круглые, выпуклые, прозрачные ко­лонии. В мазках, приготовленных из этих колоний, обна­руживают полиморфные диплококки и тетракокки. Микроскопическая картина настолько пестрая, что создает впечатление нечистой культуры. Колонии пересевают на скошенный сывороточный агар. Если в чашках со специальными средами рост отсутствует, культуру вы­деляют из спинномозговой жидкости, залитой полужид­ким агаром.

На 3-й день исследования выделенную культуру аг­глютинируют менингококковыми сыворотками.

До применения сульфаниламидных препаратов и ан­тибиотиков обязательно определяли серовар менинго­кокка, вызвавшего заболевание, так как лечение прово­дилось специфическими менингококковыми сыворотка­ми. В настоящее время определяют серовар менингокок­ков с эпидемиологической целью, используя реакцию агглютинации по Ноблю. По 3 капли густой взвеси микроорганизмов наливают в 3 пробирки, затем туда вносят по 3 капли неразведенной или разведенной 1: 10 менингококковой сыворотки сероваров А, В и С. Смесь взбалтывают в течение 2—4 мин, после чего в каждую пробирку доливают 10—20 капель изотонического рас­твора натрия хлорида и учитывают результаты.

Для определения сахаролитической активности чи­стой культуры делают посев на среды с лактозой, глю­козой, мальтозой, сахарозой, фруктозой. Менингококки ферментируют глюкозу и мальтозу с выделением кисло­ты. Производят также посев на 5 % желточный агар и сывороточный агар, содержащий 5 % сахара. Через 48 ч инкубации на поверхность выросших колоний наносят 1 каплю раствора Люголя. Появление бурого окрашива­ния свидетельствует о расщеплении полисахарида. Нейссерии идентифицируют с помощью оксидазной реакции, которая заключается в следующем. На колонию, сфор­мировавшуюся на сывороточном агаре, наносят каплю свежеприготовленного 1 % раствора солянокислого па-радиэтилфенилендиамина. При этом колонии, облада­ющие оксидазной активностью, розовеют, а затем чер­неют. Такие колонии отсевают на сывороточный агар для дальнейшего исследования.

Для дифференциации менингококка и непатогенных нейссерий (Neisseria catarralis) используют свойство последних расти на простых питательных средах, а так же способность образовывать колонии при комнатной температуре (22^СС).

Для обнаружения менингококка в крови во флаконы с 50 мл бульона, содержащего 0,1 % агар-агара, засе­вают 5—10 мл крови, взятой стерильно из вены. Через сутки делают пересев культуры на сывороточный агар. Выделение и идентификация культур осуществляются таким же образом, как и при исследовании спинномозго­вой жидкости.

Для серологической диагностики применяют РНГА с эритроцитами, сенсибилизированными группоспецифическими полисахаридами.

Для диагностики назофарингитов и выявления бактерионосительства исследуют слизь из носоглотки, менингита - ликвор, при подозрении на менингококкемию и другие формы генерализированной инфекции - кровь. Пробы с материалом оберегают от охлаждения и исследуют немедленно. Из осадка спинномозговой жидкости и крови изготовляют мазки, окрашивают за Граммом и метиленовой синькой. Чистую культуру менингококков выделяют на сывороточных средах и определяют серогрупу. В последнее время в лабораторную практику внедренные иммунологические методы экспресс-диагностики из выявления менингококкового антигена в ликворе с помощью иммунофлюоресценции, реакций энзиммеченых антител и тому подобное.

Лечение.

Неспецифическое - сульфаниламиды, пенициллины, хлорамфеникол, беталактамазы. Специфическое - противоменингококковая сыворотка

Профилактика.

 Специфическая – проводится по эпидемиологическим показаниям или военнослужащим – химической менингококковой вакциной, содержащей полисахаридные антигены серогрупп А и С (активный антимикробный иммунитет), или человеческим нормальным иммуноглобулином (пассивный антимикробный иммунитет).

Неспецическая - санитарно-эпидемиологические мероприятия.

                              

 

Гонококки

Токсономия.