Микробиологическая диагностика.  материалом для бактериологического исследования служат слизь из зева

 Материалом для БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО исследования служат слизь из зева, гной, отделяемое ран, кровь и др. Выделенные чистые культуры идентифицируют, определяют основные их свойства: морфологию, гемолитическую активность, чувствительность к антимикробным препаратам.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат:

1) слизь из зева при ангине и скарлатине;

2) кровь при эндокардите и подозрении на сепсис;

3) гнойное отделяемое из очага поражения;

4) мокрота при заболеваниях органов дыхания;

5) моча при заболеваниях почек и мочевыводящих путей. Чаще всего исследуют слизь из зева и кровь. Слизь из зева, взятую стерильным ватным тампоном, засевают на чашки с кровяным агаром. Посевы выдерживают в термостате при 37°С 18—20 ч (первый день). На второй день просматривают колонии, делают мазки, микроскопируют. Колонии, окруженные зоной гемолиза, отсевают в пробирку с бульоном Мартена или кровяным бульоном.

На третий день учитывают характерный рост стрептококка на бульоне Мартена и проводят определение серологической группы стрептококка с помощью реакции преципитации, определяют серологический тип стрептококка в реакции агглютинации на стекле по методу Гриффитса с типовыми антистрептококковыми сыворотками.

Посев 5—10 мл крови для бактериологического исследования производят в колбы с 10-кратным объемом сахарного бульона или печеночного бульона Китта — Тароцци. Посевы выдерживают в термостате 17,2—2 мес, делая контрольные высевы на чашки с кровяным агаром каждые 2—3 дня. Дальнейший ход исследования аналогичен бактериологическому изучению мазков из зева.

Серологический метод диагностики стрептококковых инфекций используют главным образом для определения антител к стрептолизину О, фибринолизину, гиалуронидазе.

При заболеваниях, вызванных патогенными стрепто­кокками (Streptococcus pyogenes), материалом для ис­следования являются гной, кровь, отделяемое слизистой оболочки, моча, мокрота, спинномозговая жидкость. Берут его так же, как при заболеваниях, вызванных стафилококками.

Бактериоскопическое исследование. В мазках из гноя, отделяемого слизистой оболочки, окрашенных по Граму, стрептококки располагаются короткими цепоч­ками, иногда в виде дипло­кокков или единичных кокков. В последнем случае стрептококки нельзя отличить от стафилококков, поэтому производят бактериологическое исследование для из­учения других свойств обнаруженных кокков.

Бактериологическое исследование. Гной, отделяемое слизистой оболочки, мочу, мокроту, спинномозговую жидкость сеют в чашку Петри с 5 % кровяным агаром (лучше использовать дефибринированную кровь) и в пробирку с сахарным бульоном. На следующий день после инкубации в термостате при температуре 37°С изучают колонии и рост в сахарном бульоне. Streptococ­cus pyogenes  развивается с образованием мелких, пло­ских, суховатых колоний зернистой структуры.

Стрептококки, продуцирующие β-гемотоксин (стрептолизин), образуют вокруг колоний зону гемолиза, а для стрептококков, выделяющих α-гемотоксин, харак­терно появление зон позеленения вокруг колоний вслед­ствие образования метгемоглобина. При отсутствии гемотоксина гемолиза не наблюдается. В сахарном бульоне стрептококки дают придонный или пристеноч­ный рост в виде хлопьев или зерен, вся среда остается прозрачной.

В мазках из колоний стрептококков не отмечается типичного расположения кокков в виде цепочек. Клет­ки располагаются одиночно, попарно или небольшими скоплениями. В мазке из культуры в жидкой среде об­наруживают типичные цепочки стрептококков.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что выделен S. pyogenes. На дальнейших этапах исследования определяют группу и серовар стрепто­кокка.

Группы стрептококка (по Лэнсфильд) классифици­руют по наличию полисахаридного антигена, для вы­явления которого используют реакцию преципитации с групповыми сыворотками (А, В, С и т. д.).

Серовары стрептококков (по Гриффитсу) характери­зуются присутствием специфического протеинового ан­тигена, который определяют с помощью реакции агглю­тинации на стекле с типовыми агглютинирующими сы­воротками. Для этой цели суточную бульонную куль­туру выделенного стрептококка центрифугируют и раз­водят осадок в 0,5—1 мл изотонического раствора натрия хлорида. На предметном стекле смешивают кап­лю сыворотки с каплей испытуемой культуры. Боль­шинство патогенных стрептококков относится к груп­пе А.

Для выявления β-гемолитического стрептококка группы А можно применять реакцию иммунофлюоресценции. В этом случае готовят мазок из выделенной культуры стрептококка, фиксируют его в течение 15 мин 95 % спиртом, после чего окрашивают в тече­ние 15 мин флюоресцирующей сывороткой, промывают проточной водой, высушивают и микроскопируют в лю­минесцентном микроскопе.

Исследование крови. Посев крови в сахарный буль­он производят так же, как при стафилококковых забо­леваниях. При наличии стрептококка на дне флакона появляются хлопьевидный придонный осадок и гемолиз. В мазках обнаруживаются длинные цепочки стрепто­кокков. Микроскопия позволяет дать предварительный ответ о наличии или отсутствии стрептококка. Для вы­явления гемотоксина делают пересев в чашку с кровя­ным агаром. Через сутки (3-й день исследования) по­являются типичные мелкие колонии, окруженные зоной гемолиза или ореолом зеленоватого цвета. Полученные данные позволяют сделать вывод о присутствии S. руоgenes.

Для выделения анаэробных стрептококков (Рерtostreptococcus anaerobius), которые обитают на слизи­стой оболочке половых органов и могут вызвать после­родовой сепсис, кровь засевают в среду Китта — Тароц-ци. В жидких средах некоторые штаммы анаэробных стрептококков образуют газ.

Патогенные стрептококки хорошо растут на среде Гарро. Она представляет собой МПА (рН 7,4), к кото­рому добавляют 5 % крови и 0,1 % водный раствор генциана фиолетового (0,2 мл на каждые 100 мл МПА). Рост сапрофитической воздушной микрофлоры и энте­рококков на среде Гарро подавляется.

Для определения патогенных свойств стрептококка изучают токсинообразование, в частности наличие фибринолизина (стрептокиназы). В опыте используют пла­зму крови человека, для получения которой к 10 мл крови добавляют 1 мл 2 % раствора натрия цитрата. После отстаивания отделяют неокрашенную плазму, разводят ее 1:3, а затем добавляют 0,5 мл 18—20-часо­вой культуры испытуемого стрептококка и 0,5 мл 0,25 % раствора кальция хлорида. Пробирки осторож­но встряхивают и помещают в водяную баню при тем­пературе 42 °С на 20—30 мин. В это время происходит образование сгустка фибрина. Пробирки оставляют на 20 мин в водяной бане. Если культура стрептококка вы­деляет фибринолизин, сгусток растворяется в течение 20 мин.

В связи с тем, что некоторые штаммы стрептокок­ков медленно растворяют фибрин, через 2 ч пробирки переносят из водяной бани в термостат и результаты учитывают на следующий день.

Методом оценки вирулентности культур стрептокок­ка можно считать определение количества поверхно­стного М-белка, присущего только патогенным штам­мам. Из молодых культур получают солянокислые экстракты и в них определяют содержание М-белка.

Для диагностики скарлатины, как правило, лабора­торные исследования не применяют. В отдельных слу­чаях высевают отделяемое слизистой оболочки зева и выделяют стрептококки различных серогрупп.

Гемолитические стрептококки, выделяющие β- и α-токсины, могут находиться в воздухе различных боль­ничных помещений. Для их выявления делают посевы воздуха на среду Гарро с последующим выделением и идентификацией чистой культуры.

При лабораторной диагностике стрептококки необ­ходимо дифференцировать с энтерококками (Streptococ­cus faecalis), для которых характерны следующие отли­чительные признаки: способность расти при температу­ре от 10 до 45 °С, устойчивость к высоким концентра­циям натрия хлорида, к пенициллину, щелочной среде (рН 9,6). Энтерококки обнаруживаются при заболева­ниях двенадцатиперстной кишки, желчного пузыря, мо­чевых путей. Наличие их во внешней среде служит критерием фекального загрязнения питьевой воды, сточ­ных вод и пищевых продуктов.

Серологическую диагностику стрептококковых ин­фекций проводят у больных хронически текущими за­болеваниями, леченных большими дозами антибиотиков и сульфаниламидных препаратов, т. е. когда выделение возбудителя бактериологическими методами представ­ляет большие трудности. Она предусматривает опреде­ление в крови стрептококкового антигена и специфиче­ских стрептококковых антител к токсинам, в частности к стрептолизину О.

Стрептококковый антиген в сыворотке крови боль­ных определяют при помощи РСК на холоде. Для реак­ции используют антистрептококковую иммунную сыво­ротку, полученную путем гипериммунизации кроликов культурой стрептококка серологической группы А. За титр антигена принимают наибольшее разведение ис­следуемой сыворотки, вызывающее задержку гемолиза не менее чем на + +.

Определение антистрептолизина О, содержащегося в сыворотках больных, основано на способности его нейтрализовать гемолитическую активность стрептолизина О. Для этого делают кратные разведения сыворотки больного и к ним прибавляют стрептолизин О (произ­водственный препарат). Смесь выдерживают в термо­стате при температуре 37°С в течение 15 мин и добав­ляют во все пробирки по 0,2 мл взвеси эритроцитов кролика. Пробирки вновь помещают в термостат на 1 ч, а затем учитывают результаты реакции.

Для серологической диагностики применяются так­же методы определения антител к другим токсинам, вы­деляемым стрептококками, например, к антистрептогиалуронидазе.

Лечение.

Неспецифическое - антибиотики (беталактамазы, макролиды, цефалоспорины и т.д.).

Специфическое - бактериофаги, противострептококковую сыворотку.

Профилактика.

 Специфическая - IG человеческий, вакцина Irs 19, бактериофаг.

Неспецифическая – санитарно-эпидемиологические мероприятия.

Менингококки

Токсономия.