Бактериологическое исследование

Первый день исследования

Испражнения наносят на питательную среду и растирают стерильным шпателем на небольшой площадке среды в чашке Петри, затем шпатель отрывают от агара и не прижимая его, продолжают растирать по остальной поверхности среды. Этим достигается равномерный рост колоний по всей поверхности. Засеянные чашки Петри в перевернутом виде помещаются в термостат при 37 (на 18-24 часа). На дне каждой чашки проставляют номер анализа.

Второй день исследования

Чашки с посевом просматривают невооруженным глазом. Просмотр чашек и отбор подозрительных колоний является одним из ответственных этапов бактериологического исследования. На среде Плоскирева дизентерийные бактерии растут в виде мелких, нежных, прозрачных колоний.

Подозрительные колонии с чашек пересевают на короткий пестрый ряд для

определения основных свойств культур. Короткий пестрый ряд может состоять из сред Гисса с лактозой, глюкозой маннитом и сахарозой (полужидких или жидких сред). В зависимости от характера ферментации ингредиентов среды (лактоза, глюкоза, маннит и др.) различными представителями бактерий кишечной группы наблюдается различное окрашивание среды. При отсутствии на чашке подозрительных колоний дается отрицательный ответ.

Третий день исследования

Изучение выделенных культур начинают с учета их ферментативной активности. Если все культуры от данного обследуемого сбраживают лактозу иглюкозу с газообразованием то, дается отрицательный ответ. Неподвижные

культуры, не разлагающие лактозу и мочевину, и разлагающи ферментирующую глюкозу до кислоты без газа являются подозрительными на дизентерийную группу и подвергаются дальнейшему изучению. Культуры

неподвижных грамотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу без газообразования, испытывают в опыте агглютинации на стекле с набором дизентерийных адсорбированных сывороток. Материалом для агглютинации является рост культуры на среде с мочевиной или на скошенном агаре. Вести испытание культур в реакции агглютинации на стекле рекомендуется сначала со смесью сывороток преобладающих видов (Флекснера, Зонне), а при наличии агглютинации со смесью сывороток – испытывают культуру отдельно с каждой из сывороток, входящих в данную смесь. Положительная реакция на стекле с типоспецифическими сыворотками является только ориентировочной, в связи с чем необходимо поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках до титра сыворотки указанного на этикетке, начиная с разведения 1:100 и физиологическом растворе. Контролем служат две пробирки: одна содержит взвесь микробов в физиологическом растворе (без сыворотки), другая – сыворотку в наименьшем разведении (без микробных тел). Все пробирки помещают в термостат при 37 оС до следующего дня.

Четвертый день исследования

Отмечают изменения во всех углеводных средах, образование индола, сероводорода, учитывается подвижность, каталазная проба. В этот же день учитывают результаты пробирочной реакции агглютинации. Основание для выдачи положительного ответа является обнаружение неподвижной грамотрицательной палочки, не сбраживающей лактозу и не образующей сероводород, ферментирующей глюкозу до кислоты. При этом обязательно указывают вид и тип выделенного штамма

Серодиагностика. Применяется для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых формах, a также для уточнения вида возбудителя. Ставят реакцию агглютинации по типу Видаля и РПГА с эритроцитарными диагностикумами Флекснера и Зоне, диагностическим титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, a шигеллами Зонне 1:100.

 

Реакция агглютинации на стекле (пластинчатая реакция агглютинации) ставится с одним разведением диагностичечкой агглютинирующей сыворотки, которое в зависимости от ее титра составляет 1:10, 1:25,1:50 или 1:100. Предметное стекло делят на квадраты восковым карандашом. В один квадрат наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия, в другой- каплю сыворотки. Затем петлей в каждую каплю вносят небольшое количество бактериальной культуры и перемешивают круговыми движениями в каждой капле до получения равномерной взвеси. Стекло можно слегка подогреть, высоко держа над пламенем горелки в течении 2- 4 минут. Реакция протекает быстро. Наблюдают за появлением зерен и хлопьев агглютината в каплях. Учет производят через 3-5 мин.

Реакция непрямой гемагглютинации При работе с растворимыми, мелкодисперсными антигенами, применяют реакцию непрямой, или пассивной, гемагглютинации (РНГА, РПГА). Антиген сначала адсорбируют на инертных монодисперсных частицах или клетках, например на эритроцитах, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЙ ДИАГНОСТИКУМ. Такие нагруженные антигеном эритроциты склеиваются под действием иммунной сыворотки, содержащей антитела к данному антигену.

 Реакция отличается высокой чувствительностью и позволяет выявлять сравнительно небольшие концентрации антител в исследуемой сыворотке. Реакцию ставят на пластмассовой пластине, в лунках которой готовят последовательные разведения сыворотки больного. В каждую лунку вносят одинаковый объем (0,5 мл) 3% суспензии нагруженных антигенами эритроцитов- соответствующего эритроцитарного диагностикума. Через 2 часа инкубации при 37ºС учитывают результат по характеру осадка эритроцитов.

Лечение.

  Неспецифическое: диета, химиотерапевтические препараты (ХТП)

(сульфаниламиды, нитрофураны, фторхинолоны), антибиотики после определения чувствительности, спецефическое лечение – поливалентный дизентерийный бактериофаг (может применяться и с профилактической целью), для лечения хронических форм вне обострения применяют вакцину Чернохвостова (инактивированные этиловым спиртом шигеллы, вводится подкожно в область лопатки).

Профилактика.

Специфическая: почти не применяют, так как имеющиеся вакцины неэффективны.

Основные профилактические мероприятия – неспецифические:

раннее выявление больных и бактерионосителей;

проведение противоэпидемических мероприятий в очаге инфекции;

соблюдение санитарно-гигиенического режима на пищевых предприятиях;

контроль за качеством питьевой воды;

санитарно-просветительная работа среди населения.

 

 

Эшерихии.

Таксономия.