Бактериологическое исследование

Достоверным методом верификации туберкулезной этиологии процесса является культуральное исследование или посев исследуемого материала на твердую питательную среду Левенштейна–Йенсена, что позволяет идентифицировать МБТ на основании характерного внешнего вида колоний, темпа их роста и условий выращивания. Культуральное исследование выполняется только в противотуберкулезных учреждениях, так как для его проведения необходимы специально оснащенные и аттестованные бактериологические лаборатории. Культуральное исследование позволяет обнаружить МБТ даже в том случае, если в 1 мл исследуемого материала содержится всего 100 микробных тел. Недостатком культурального исследования на твердой среде Левенштейна–Йенсена является его длительность – рост колоний МБТ происходит в течение 4-8 недель.

BACTEC

Для более быстрого бактериологического исследования мокроты и другого биологического материала в лабораториях противотуберкулезных диспансеров применяется аппарат ВАСТЕС, который позволяет получить рост туберкулезных микобактерий уже через 1-2 недели. Исследуемый материал помещают в специальные пробирки с жидкой питательной средой (Миддлбрука), на дне пробирок содержится кислородзависимый флюорохромный краситель. Микобактерии размножаются и поглощают кислород, в результате чего его концентрация в пробирке снижается, и свечение красителя усиливается. Таким образом, рост МБТ вызывает усиление флюоресценции, которая становится видимой при облучении пробирки ультрафиолетовым светом. Для регистрации роста измеряют интенсивность свечения специальными фотодатчиками, встроенными в прибор. Интенсивность свечения регистрируют в единицах роста.

Ускоренные методы диагностики МБТ BACTEC MGIT 960 позволяет:

выявлять в клинических образцах МБТ в течение 4–20 дней

определять лекарственную чувствительность МБТ в течение 4-13 дней

 

BACTEC 960

• Автоматизированный комплекс обеспечивает культивирование МБТ в индикаторной пробирке, содержащей: модифицированную питательную среду

• Флюоресцирующий индикатор

• Контроль за внесенным в пробирки материалом осуществляет компьютер

• Специальные индикаторы дают информацию о наличии положительных и отрицательных посевов

Материал для исследования

Ø Мокрота

Ø Любые биологические жидкости, кроме крови и мочи

Ø Отделяемое ран

Ø Промывные воды желудка

ØТкани при хирургических вмешательствах

 

С помощью системы ВАСТЕС можно определить лекарственную чувствительность МБТ к препаратам первого и второго ряда:

H R S E; Z; ПТП 2 ряда

Et /Pt Cs PAS

Методы Экспресс-молекулярной диагностики

Ø ПЦР

Ø Система GeneXpert

Ø Тест GenoType® MTBDRplus

Ø HAIN-тест

 

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

· Полимеразная цепная реакция - исследование нуклеиновых кислот

· Обладает высокой чувствительностью и специфичностью

· Позволяет проводить прямое определение микроорганизмов непосредственно в клиническом материале без получения чистой культуры возбудителя

· Является информативным методом при диагностике внутриклеточных медленнорастущих микроорганизмов

· Показан для диагностики внелегочной локализации туберкулеза

 

Система GeneXpert

· Полностью интегрирует и автоматизирует три процесса, требуемые для проведения молекулярного тестирования на основе ПЦР

· Система GeneXpert позволяет получить результаты молекулярной диагностики для обнаружения любого генетического элемента в геноме МБТ (ДНК, РНК, транслокации хромосом, амплификацию и угнетение гена)

Основой процесса являются одноразовые картриджи, где выполняются три процесса, требуемые для проведения молекулярного тестирования на основе ПЦР

Тест GЕNE - XPERT MTB/RIF

· Используется для быстрого определения M.tuberculosis у пациентов с подозрением на туберкулёз

· Определение устойчивости МБТ к рифампицину в мокроте

· Тест проводится в системе GeneXpert^®*

· Не предназначен для мониторинга лечения

· Результат – менее, чем за 2 часа

· Высокая чувствительность (≥95%) и специфичность (≥95%) для образцов мокроты КУБ- и КУБ+

· Полная автоматизация

· Закрытый картридж

 

 

Тест GenoType® MTBDRplus
HAIN-тест

Метод позволяет проведение молекулярно-генетической идентификации комплекса M.Tuberculosis

Определение устойчивости МБТ к H и/или R в культуре или в образцах мокроты

Тест GenoType® MTBDRplus HAIN-тест

 

Преимущества:

ü Простота

ü Надежность методики

ü Рентабельность

ü Достоверность результатов

ü Быстрое получение результатов:через 4-5 часов

ü Высокая чувствительность (≥97%) и специфичность (≥99%)

ü Доказана независимыми специалистами во всем мире

ü Автоматизация проведения исследований

Резистентность

Химиорезистентный туберкулёз (ХРТБ) - форма туберкулёза, при которой пациент выделяет МБТ, резистентные к одному или более нескольких противотуберкулёзных препаратов(ПТП),что подтверждается лабораторным методом определения теста лекарственной чувствительности(ТЛЧ)

Различают виды медикаментозной резистентности МБТ: