Vii . Определение параметров мочи с помощью диагностических полосок.

В настоящее время наиболее простым способом исследования мочи является определение ее параметров с помощью диагностических полосок. Существует ряд фирм-производителей, выпускающих диагностические полоски для мочи.

Принцип определения параметров в большинстве случаев один и тот же, однако чувствительность, влияние различных факторов, время экспозиции, возможные ошибки и т.д. могут отличаться. Поэтому перед работой с полосками необходимо внимательно ознакомиться с инструкцией, обращая внимание на каждый определяемый параметр, число которых колеблется от одного, например, глюкозы, до одиннадцати. К ним относятся: рН, белок, плотность, глюкоза, кетоновые тела, билирубин, уробилиноген, кровь, лейкоциты, нитриты и аскорбиновая кислота или редуцирующие вещества.

Исследование мочи с помощью диагностических полосок является скриниговым (отборочным) методом для выявления той или иной патологии. Так, появление глюкозы в моче может быть признаком сахарного диабета или снижения почечного порога для глюкозы, повышение уровня кетоновых тел свидетельствует об усилении кетогенеза, патологические значения содержания билирубина и уробилиноидов – о нарушении обмена желчных пигментов. Определение аскорбиновой кислоты связано с влиянием ее избытка на качество исследований ряда других параметров.

Для выявления патологии почек и мочевыводящих путей используют следующие показатели: рН, белок, лейкоциты, эритроциты, нитриты. Если указанные выше показатели в пределах нормы, то микроскопию осадка мочи можно при профосмотрах не проводить. При подозрении на заболевание почек микроскопия осадка мочи обязательна.

Оценка исследований предполагает визуальное и приборное фиксирование результатов исследований. При визуальной оценке могут быть получены полуколичественные данные, основанные на сравнении цвета рабочей полосы с цветовой шкалой, прикрепленной к тубусу, где хранятся полоски. На результаты исследований влияет время экспозиции, поэтому его нужно отмечать с помощью секундомера или лабораторных часов. Анализаторы мочи оценивают те же самые параметры, но с помощью объективного метода – рефлексоотражательной фотометрии. В анализаторах жестко соблюдается время экспозиции, он может делать автоматическую поправку некоторых результатов определения, например, связанных с рН мочи, и упрощает регистрацию результатов. При подключении анализатора к компьютеру результаты исследований могут быть введены в базу данных. Но чувствительность метода и ошибки, связанные с неправильным забором и подготовкой проб, анализатором не корректируются.

Для избежания ошибок при определении химических показателей с помощью диагностических полосок моча тщательно перемешивается, и в нее сразу после перемешивания опускается полоска. Затем полоска кладется на горизонтальную поверхность и оценивается по истечении времени экспозиции, которое указано в методике и обычно составляет 60-120 сек. Тщательное перемешивание мочи особенно важно при оценке содержания клеточных элементов - эритроцитов и лейкоцитов. Плохое перемешивание - частая причина внутрилабораторных ошибок. Для успешного проведения исследования при визуальном методе оценки желательно приобретать полоски с наиболее светлым фоном, не использовать полоски позднее срока годности, хранить полоски в плотно закрытом тубусе при указанной температуре. Моча перед исследованием может храниться не более 2-х часов.

Определяемые параметры.

РН. Реакция мочи определяется с помощью универсального индикатора или смеси индикаторов и затруднений обычно не вызывает. Нормальный рН 5-6. На результаты реакции влияют дезинфицирующие и моющие средства и длительное хранение мочи, так как при хранении рН мочиповышается.

Белок. Определение белка основано на изменении в присутствии белка цвета кислотно-основного индикатора. Методика измерения рассчитана на основной белок мочи - альбумин. Наличие в моче других белков, например, миеломного белка Бенц-Джонса, миоглобина, гемоглобина с помощью диагностических полосок может не определиться. Чувствительность на белок отличается у полосок различных фирм-изготовителей и обычно составляет 0,1-0,3 г/л. Наименьшее видимое изменение окраски может расцениваться как наличие белка не меньшее, чем чувствительность полоски. Это значит, что результаты анализов пациентов, имеющих белок ниже чувствительности полоски или белок, отличный от альбумина, будут оценены как отрицательные. Полоски высокого качества могут иметь чувствительность 0,15 или даже 0,1 г/л, но эти цифры также превышают принятую величину - 0,033 г/л.

Полоски рекомендуется использовать при массовых обследованиях для выявления грубой патологии. Однако при использовании диагностических полосок рекомендуется проводить всем пациентам с отрицательным по результатам анализа на полосках белком качественное определение белка химическим методом - с 20% сульфосалициловой кислотой. Использование анализатора мочи стандартизирует процедуру определения и регистрацию результатов, но не меняет чувствительность полосок. Если в инструкции чувствительность полосок не указана, ее легко определить по цветовой шкале. Значение окошка с первым положительным результатом определяет реальную чувствительность полоски.

На результаты исследования влияют лекарственные препараты, указанные в инструкции, и резко щелочная реакция мочи.

Плотность. Определение плотности основано на методике ионного обмена и хорошо коррелирует с рефрактометрическим методом. Диагностические полоски обычно измеряют плотность с интервалом 5г/л. В щелочной моче, как правило, плотность, измеренную с помощью полосок, необходимо корректировать. Обычно к полученному результату добавляется 0,005. Ряд анализаторов мочи поправку на рН проводит автоматически. Возможное влияние на плотность белка, кетокислот, аскорбиновой кислоты и глюкозы указано в прилагаемой методике, которую необходимо перед работой внимательно изучить.

Глюкоза. Глюкоза определяется обычно глюкозоксидазным методом с чувствительностью около 2 ммоль/л (40 мг%). На результаты анализа может оказывать влияние рН, плотность, наличие аскорбиновой кислоты, салициллатов и моющих веществ, что должно быть указано в паспорте методики.

Кетоновые тела. Определение кетоновых тел основано на реакции Легаля, которая определяет ацетоуксусную кислоту и с меньшей чувствительностью ацетон. Чувствительность метода обычно составляет около 0,3-0,5 ммоль/л, что включает содержание кетоновых тел в норме. Известно, что лекарственные вещества и диагностикумы, содержащие сульфгидрильные группы, фталеины, фенилкетоны могут окрашивать зону реакции в оранжевый цвет. Влияние различных агентов должно быть указано в паспорте метода.

Билирубин. Реакция основана на взаимодействии в кислой среде прямого билирубина с солью диазония или триазеном с образованием продукта розового цвета. Чувствительность и влияющие факторы необходимо определить по паспорту методики. Компоненты мочи могут дать желтое окрашивание реакционной зоны.

Уробилиноген. Реакция основана на взаимодейстии в кислой среде уробилиногена со стабильной солью диазония с образованием продукта красного цвета. Ложноположительную реакцию могут вызывать вещества красного цвета, находящиеся в моче. Реально полосками определяются и уробилиноген, и стеркобилиноген, который присутствует в моче в норме в концентрации 5-17 мкмоль/л. Билирубин может дать нестандартное окрашивание (синее или зеленое). Чувствительность и влияющие факторы необходимо определить по методике. Так как определение уробилиноидов химическими методами трудоемко и зависит от многих факторов, определение показателя с помощью диагностических полосок предпочтительно.

Кровь. Реакция основана на окислении гемоглобином и миоглобином посредством образования гидроперекисей окрашенного индикатора. С помощью полоски обнаруживается гемоглобин, миоглобин и эритроциты. Гемоглобин и миоглобин дают равномерное окрашивание поля, эритроциты дают точечную окраску. Различить гемоглобин и миоглобин данным методом невозможно. Чувствительность пробы 5-10 эритроцитов/мкл (5 000 – 10 000 /мл). Влияющие факторы необходимо посмотреть в паспорте методики.

При разрушении эритроцитов в щелочной или гипоосмолярной моче результаты исследования на полосках могут не совпадать с результатами микроскопии, так как полоски могут определять гемоглобин, попавший в мочу из разрушенных эритроцитов, в то время как эритроциты в осадке мочи отсутствуют или содержатся в меньшем количестве, чем показали результаты полоски.

Лейкоциты. Метод основан на расщеплении эфира индоксила эстеразой гранулоцитов и последующим взаимодействием индоксила с солью диазония и образованием фиолетового окрашивания. Присутствие бактерий, трихомонад и эритроцитов не влияет на реакцию. Однако примесь к моче отделяемого влагалища, или большое количество разрушенных лейкоцитов, может дать положительную реакцию за счет эстеразной активности, что не будет соответствовать результатам микроскопии, так как разрушенные клетки в микроскоп не увидишь. Высокая концентрация белка и глюкозы замедляет развитие окраски. Чувствительность метода около 15 лейкоцитов/мкл (15 000 /мл). Другие ограничения метода и влияющие факторы указаны в методике анализа.

Нитриты. Определение основано на реакции Грисса – реакции азосочетания нитритов с сульфанилом и последующее взаимодействие с производным хинолина с появлением розового окрашивания. Определение нитритов - скрининговый тест на скрытую бактериурию, так как большинство бактерий (кишечная палочка, протей, сальмонелла и др.) восстанавливают нитраты в нитриты. Положительная реакция диагностических полосок обнаружена в 90% случаев всех инфекционных заболеваний мочевых путей и соответствует содержанию более 10⁵ микроорганизмов/мл. Стафилококки, стрептококки, энтерококки, псевдомонады и некоторые другие бактерии нитритов не образуют. Это значит, что при выявлении бактериурии с данными возбудителями тест на нитриты будет отрицательным.

Ложноположительные результаты могут быть получены при длительном хранении мочи в теплом месте из-за экзогенного размножения бактерий. Ложноотрицательные результаты могут быть связаны с наличием нитрит-восстанавливающих микроорганизмов, или при малом сроке нахождения мочи в мочевом пузыре. Для получения достоверных результатов используют либо утреннюю порцию мочи, либо мочу, собранную после 4-х часового перерыва. Исследование должно проводиться в течение 4-х часов. За 3 дня до анализа необходимо отменить антибиотики и препараты витамина С. Другие влияющие факторы указаны в методике анализа.

При наличии бактерий полезен посев мочи для идентификации возбудителя.

       Таким образом, использование диагностических полосок с визуальным или приборным способом оценки результатов значительно упрощает и ускоряет анализ мочи и является скрининговым методом исследования, который удобен при массовых обследованиях и срочных анализах. Однако для получения корректных результатов необходимо правильно проводить анализ и ознакомиться в паспорте метода с вероятными погрешностями метода. Результаты некоторых тестов, в первую очередь, белка, необходимо проверять химическими методами при отрицательном значении. Независимо от результатов анализа рекомендуется проводить микроскопию осадка мочи, так как в ряде случаев количество форменных элементов может не совпадать.

       Контроль качества анализа мочи рекомендуется проводить с использованием контрольного материала, который можно приобрести в Федеральном Центре по контролю качества.