Биологический метод микробиологической диагностики

(заражение экспериментальных животных)

Цели заражения экспериментальных животных:

1) идентификации микроорганизмов по вирулентности;

2) выделение чистой культуры возбудителя из различных материалов и ее идентификация;

3) воспроизведение и изучение инфекционного процесса;

4) испытание лечебного эффекта химиотерапевтических и иммунологических препаратов.

5) получение иммунобиологических лечебно-профилактических и диагностических препаратов и др.

В зависимости от цели исследования заражают различных животных (кроликов, морских свинок, белых мышей, белых крыс и др.) различными способами: накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, перорально, интраназально, внутритрахеально, интрацеребрально и внутрибрюшинно.

Подопытных животных следует подбирать однородными по возрасту, полу, массе и генетическим характеристикам. Отобранных животных необходимо тщательно осмотреть и выбраковать подозрительных или больных. Выбор вида, линии, возраста и пола животных диктуется целями исследований.

Применяют следующие методы заражения животных: накожный, внутрикожный, подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриполостной (брюшная полость, грудная, передняя камера глаза), внутриорганный (мозг, легкие), введение микроорганизмов в пищеварительный или дыхательный тракт.

Внутрибрюшинный метод. Инъекцию производят в задней трети живота. Место введения дезинфицируют до и после инъекции. Животное располагают вниз головой или в наклонном положении. Несколько отступив от средней линии, брюшную стенку прокалывают, вводят иглу под тупым углом к стенке. Игла должна быть с притупленным концом во избежание повреждения внутренних органов.

Вскрытие лабораторного животного. Животные, которые подвергались в эксперименте воздействиям, поведшим за собой понижение жизнеспособности, подлежат выведению из эксперимента гуманным методом (эвтаназии).

Для вскрытия необходимо иметь набор инструментов: ножницы, анатомические пинцеты, скальпель.

Перед вскрытием проводится наружный осмотр белой мыши: состояние волосяного шерстяного покрова (блестящая или тусклая, взъерошенная, влажная, сухая, чистая, грязная шерсть), естественных отверстий (выделение вокруг них и д.р.), конечностей. Указывают общее состояние (истощение, ожирение) животного, наличие язв, облысения др.

После тщательного наружного осмотра пинцетом в левой руке захватывают и приподнимают кожу с подлежащей клетчаткой, снизу живота срезают лоскут шириной 0,5 – 1 см и делают срез ножницами снизу вверх до нижней челюсти по средней линии. Кроме того, к середине паховых областей справа и слева делают по одному разрезу. В грудном отделе отсепаровывают кожу с клетчаткой в направлении к подмышечным областям, а в шейном - в обе стороны от срединного разреза вдоль нижней части.

Таким образом, обнажают брюшную полость и грудную клетку. Для вскрытия последней проводят разрезы (слева и справа) по бокам грудной клетки (от средне-подмышечной линии) косо вверх, перерезая ребра и мягкие ткани, середину ключицы и мышцы шеи, отбрасывают трапециевидный лоскут с ребрами и мягкими тканями.

Если в грудной и брюшной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев на питательную среду. Кровь из сердца забирают проколом пастеровской пипеткой с оттянутым капиллярным концом. Проводят осмотр органов грудной полости и при необходимости забирают из них кусочки ткани.

Взятие материала из паренхиматозных органов проводят следующим образом: поверхность органа прижигают нагретым в пламени спиртовки скальпелем соответствующего размера; прижженный участок органа прокалывают стерильной пастеровской пипеткой с оттянутым концом или стерильной петлей; взятый материал засевают на питательную среду.

В протоколе практической работы отмечают цель заражения. время заражения, материал, примененный для заражения, изменение поведенческих реакций животного после заражения, время гибели (умерщвления) животного, изменения, обнаруженные при вскрытии, материал, взятый для посева, свойства микроорганизма, вид микроорганизма.

 

7.3. Демонстрация преподавателем методики практических приемов по данной теме.

Преподаватель знакомит обучающихся с планом и методикой проведения практической работы.

Задание 1