Определение уробилиногена (уробилиновых тел)

Уробилин определяют качественными пробами по Богомолову или Шлизингеру. У коров для определения уробилина в моче применяют пробу Флоренса. Кроме того, для экспресс-диагностики можно использовать наборы диагностических полосок фирм Boehringer, Mannheim GmBh, Merek, Bayer Laboratories и др.

У здоровых животных в моче содержится небольшое количество уробилина (не более 0,05 - 0,15 мг/л). Качественные пробы дают результат на один крест (+). Повышенное выделение уробилиновых тел (урохромоген, урохром, уроэритрин, уробилин, стеркобилин) с мочой называется уробилинурией.

Уробилинурия наблюдается вследствие ослабления функции печени, которая не в состоянии утилизировать уробилиноген из притекающей к ней крови, или вследствие избыточного поступления уробилиногена из кишечника в печень, которая хотя функционально полноценна, но не успевает задерживать и трансформировать весь поступающий из кишечника уробилиноген, поэтому последний, минуя печень, попадает в ток крови. У кошек и собак повышенное содержание уробилина в моче отмечается также при снижении моторики кишечника и сдвиге рН мочи в щелочную сторону. Уробилинурия встречается при заболеваниях печени (гепатиты, циррозы), гемолитических состояниях (гемолитические анемии, гемоглобинурии), а также при кишечных заболеваниях (энтероколиты, завалы, кишечная непроходимость).

Проба Богомолова. К 10 мл мочи прибавляют 2-3 мл насыщенного раствора сульфата меди, затем несколько капель соляной кислоты для просветления. Через 5 минут прибавляют 2-3 мл хлороформа и взбалтывают. При наличии большого количества уробилина хлороформ окрашивается от розово-красного до медно-красного цвета.

Проба Флоренса. Мочу в количестве 8-10 мл подкисляют в пробирке 8-10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2-3 мл эфира и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстрагирования уробилина. Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской пипеткой, на 2-3 мл концентрированной НСl, налитой в другую пробирку. При наличии уробилина на границе жидкостей образуется розовое кольцо. Интенсивность окраски пропорциональна количеству уробилина. Проба настолько чувствительна, что даже в норме на границе между двумя жидкостями видно легкое розовое окрашивание. Этой пробой можно установить полное отсутствие уробилиноидов в моче.

Проба Шлезингера. К 4-5 мл мочи приливают равное количество реактива Шлезингера (насыщенный спиртовой раствор ацетата цинка - 10 г на 100 мл 96° спирта), реактив предварительно взбалтывают и добавляют одну каплю раствора Люголя. Оставляют на 10 мин, затем фильтруют. Пробирку просматривают на темном фоне в отраженном свете. При наличии уробилина образуется зеленая флюоресценция. Некоторые медикаменты дают положительную пробу Шлезингера. Для разграничения настоящей положительной пробы и медикаментозной прибавляют разведенную соляную или серную кислоту. Флюоресценция, вызванная уробилином, исчезает, медикаментозная остается.

Проба Нейбауэра. К 3-4 мл свежевыпущенной мочи, охлажденной до комнатной температуры, прибавляют 3-4 капли реактива Эрлиха (2 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл 20%-ного раствора соляной кислоты). Окрашивание жидкости в красный цвет в течение первых 30 секунд говорит об увеличенном содержании уробилиногена в моче. Если окрашивание развивается по прошествии 30 секунд, то концентрация уробилина в моче нормальная, а если через 30 секунд окраска не развивается, то это может быть вариантом нормы или можно говорить о полном отсутствии уробилиногена в моче.

Билирубин мешает определению уробилиноидов, поэтому, если он обнаружен в моче, его следует предварительно удалить, осаждая хлоридом бария с последующим фильтрованием. Для этого к 10-12 мл мочи приливают 5-6 мл 10%-ного раствора ВаСl2 и фильтруют. Затем фильтрат проверяют на полноту осаждения билирубина и процедуру повторяют, если первое осаждение было неполным.