Определение микробной загрязненности

Наряду с общеизвестными способами оценки спермы: определением густоты, активности, концентрации сперматозоидов, определением соотношения живых и мертвых форм спермиев, обязательным является и ветеринарно-санитарная оценка спермы. Несоблюдение этого условия может привести к распространению (через сперму) многих инфекционных болезней (бруцеллез, туберкулез, лептоспироз, трихомоноз, кампилобактериоз, ящур и др.), а также инфицированию половых органов самок условно-патогенной микрофлорой (стафилококки, стрептококки, синегнойная и кишечная палочки и др.).

Методика определения коли-титра (на среде Булиржа).

Сперму разводят многократно последовательно стерильным физ-раствором – 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000, 1:1000000 – и из каждого разведения делают высев на среду Булиржа.

Посевы выдерживают в термостате при температуре 37-37,5°С и через сутки проверяют рост. При наличии в сперме бактерий из группы коли изменяется цвет среды, а в газовых трубочках появляется газ. О показателе коли-титра судят (до 1:1000000) по степени разведения исследуемого материала и роста микробов в среде.

При хорошем ветеринарно-санитарном состоянии и соблюдении санитарно-гигиенических правил при получении спермы от производителей коли-титр не превышает 1:1 - 1:10.

Определение микробной и грибковой загрязненности спермы.

Для определения количества микробов в сперме делают посев на МПБ и МПА, а затем подсчитывают количество микробов и определяют их вид. В зависимости от содержания микробов различают сперму:

· незначительно загрязненную при содержании в 1 мл спермы до 0,1 тыс. микробов;

· слабозагрязненную – до 2 тыс. микробов в 1 мл;

· среднезагрязненную – до 5 тыс. микробов в 1 мл;

· сильнозагрязненную – более 5 тыс. микробов в 1 мл.

Допускают сперму с содержанием микробов не более 5 тыс. микробов в 1 мл.

Исследование на наличие синегнойной палочки и анаэробной микрофлоры.

Для выделения синегнойной палочки сперму высевают на МПБ с добавлением 1-2% сахара (глюкозы или лактозы) и помещают в термостата при температуре 37°С на 6-7 сут. Посев проверяют каждые 1-2 дня. При росте синегнойной палочки выделяемый ею пигмент пиоцианин постепенно окрашивает среду в зеленовато-голубоватый цвет

Для обнаружения анаэробов проводят посев спермы в две пробирки со средой Китта-Тароцци. Одну из пробирок прогревают на водяной бане при 80°С в течение 20 мин для уничтожения сопутствующей микрофлоры. Затем обе пробирки помещают в термостат при 37°С на 10 сут. Учитывают интенсивность роста микробов, характер осадка, а так же степень газообразования. Через каждые 3-4 дня независимо от наличия или отсутствия признаков роста микробов делают мазки, окрашивают по грамму и микроскопируют.

Исследование спермы на наличие грибов.

Посев спермы проводят на среду Литмана, ЛенНИВИ, Сабура и Чапека. Среды культивируют при температуре 22-37°С. Выделенные грибы проверяют на патогенность. Быка нельзя использовать, если в сперме и смыве из препуция постоянно выделяют патогенные грибы из родов аспергиллюс, кандида, лихтгеймия.

Температурный шок. Температурные зоны. Причины гибели спермиев при замораживании

При более высокой температуре обменные процессы ускоряются, увеличивается число токсических веществ. При снижении температуры обменные процессы замедляются, количество токсинов снижается.

Положительная температура

Оптимальный уровень +40 ̊С, но при этом быстро расходуются питательные вещества и быстро накапливаются токсины, спермии погибают.

3 зоны:

+48-+50 ̊С

Спермии погибают, происходит потеря способности к прямолинейно-поступательному движению, происходит разрушение белков.

+47-+45 ̊С

Сохраняют способность к движению, но происходит разрушение акросомы. Ферменты выходят за пределы половых клеток, оплодотворения не происходит.

+25-+40 ̊С

Нет вредного влияния. Но быстро накапливается молочная кислота, оксид углерода, аммиак.

Температурный шок /температурный удар: при попадании спермиев после получения спермы в температуры ниже +18 ̊С. В момент выделения спермы происходит активация гликолитического центра, интенсивно проявляются обменные процессы. При температуре ниже 18 ̊С входящий в состав спермы плазмологен переходит в твердое состояние, развивается несоответствие. Большая часть половых клеток погибает. Поэтому в состав искусственных сред, если планируется хранение спермы при низких положительных или отрицательных температурах вводят лецитин – фосфолипид с температурой затвердевания ниже, чем у плазмологена.

Отрицательные температуры:

5 зон:

· Зона высокой метаболической активности (+40 - +25 ̊С);

· Зона неполного анабиоза (+25 - 0 ̊С). Снижение обменных процессов примерно в 10 раз;

· Зона кристаллизации охлажденной и переохлажденной воды внутри клеток и вне (0 - -80̊С). Метаболизм протекает на более низком уровне, по отношению к оптимальному ниже на 10¹³ раз;

· Зона кристаллизации связанной и адсорбированной воды (-80 - -150 ̊С). Все клетки погибают;

· Отсутствие кристаллизационных и рекристаллизационных процессов, зона квантовых реакций (-150 - -273 ̊С).