Определение абсолютного показателя переживаемости и биоконтроль искусственных сред

Абсолютный показатель переживаемости – показатель качества спермы, который указывает на срок сохранения активности половых клеток в более или менее благоприятных условиях. Это бывает обусловлено рядом факторов:

1. Запасом энергетического материала.

2. Скоростью обезвреживания продуктов метаболизма.

3. Качеством липопротеиновой оболочки.

Существует прямая зависимость между величиной показателя переживаемости и оплодотворяющей способностью.

Обозначается буквой S, выражается в условных единицах.

Методика определения показателя переживаемости (Соколовская)

1. Берут 11 сухих стерильных пробирок ёмкостью 2 мл.

2. Готовят искусственную среду.

3. В 1 пробирку набирают 0,5 мл оцениваемой спермы – контроль.

4. Во 2-11 пробирки вносят 0,5 мл разбавителя.

5. Во 2 пробирку вносят 0,5 мл испытуемой спермы, тщательно перемешивают, набирают 0,5 мл и переносят в пробирку №3, из 3 в 4… из 11 0,5 мл выливают.

6. Получают разбавления от 0 до 1024 раз.

S = ∑at, где а – средняя активность за промежуток времени, t – промежуток времени между исследованиями.

t = (T_n+1 – T_n-1)/2.

Полученные показатели заносятся в таблицу:

А – активность сперматозоидов в момент исследования

Нормативы: для жвачных 1400, для хряка 900, для жеребца 400.

Стандартом для искусственных сред, которые применяются в биотехнике разбавления, являются оптимум разбавления – 8-16 раз, максимум разбавления 256 раз.

Резистентность спермиев. Оценка качества спермы по микробной загрязнённости

R

Устойчивость половых клеток к воздействию 1% раствора хлорида натрия. Выражается количеством (мл) раствора хлорида натрия, которое требуется добавить к 1 мл свежей спермы, чтобы наступила некроспермия. Обеспечивается резистентность качеством липопротеидной оболочки. Приобретается в канале придатка (оболочка).

- устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды;

- предупреждение агглютинации;

- обусловливает отрицательный электрический заряд.

Выражается в условных единицах (например, 500).

Методы определения:

1) По Милованову;

2) По Короткову (ускоренный метод).

По Милованову

В течение первых 15-20 минут при температуре +20-25 ºС. С использованием теплого 1% раствора хлорида натрия (38-42 ̊С).

В теплую стеклянную колбу отмеривают 0,02 мл свежеполученной спермы, предварительно оцененной по активности. Из бюретки осторожно по стенке сосуда добавляют 5 мл 1% раствора натрия хлорида. Содержимое перемешиваю путем вращения в горизонтальной плоскости. С помощью стеклянной палочки наносят каплю разбавленной спермы на теплое предметное стекло, при малом увеличении определяют активность. Если хотя бы 1 клетка движется, то каждый последующий раз добавляют по 10 мл 1% раствора хлорида натрия по стенке сосуда. С каждым последующим исследованием объем капли должен быть больше. Суммируют количество мл.

R= V₁/V₂

V₁ – количество раствора хлорида натрия, V₂ – объем исследуемой спермы.

По Короткову

4 пронумерованных пенициллиновых флакона, чистых, теплых. Флакон № 1: 0,02 мл свежеполученной спермы, добавляют10 мл 1% теплого раствора хлорида натрия. Содержимое перемешивают, через 2 минуты определяют активность. Если активности нет, то резистентность = 500.

Если активность есть, то из 1го флакона переносят 0,5 мл смеси, добавляют 0,5 мл хлорида натрия. перемешивают, определяют активность через 2 минуты. Если наступает гибель половых клеток, резистентность= 1000. Если активность сохраняется, то из флакона №2 во флакон № 3 переносят четверть мл смеси, добавляют такое же количество хлорида натрия. Оценивают активность. Если активности нет, то R =2000. Если есть. То из флакона №4, где налито 10 мл хлорида натрия, в третий переносят по 0,5 мл. В конечном итоге R = 2*n + 2000 (какая-то дебильная формула).

N – количество внесений из 4 флакона в 3, при этом каждое внесение = 2000, +2000 – уже имеющаяся резистентность.

В норме у качественной спермы, полученной от жвачных, резистентность = 10000-40000, у хряка 2-5тыс, у жеребца 500-1500.