Приготовление препаратов крови, их маркировка и фиксация

 

Препарат «толстая капля» на предметном стекле

 без мазка:

— на предметное стекло наносят каплю крови диаметром около

5 мм,  кровь рас­пределяют в равномерный диск или прямоугольник

 размером 1 — 1,5 см.

— на краю стекла делается мазок в виде полоски крови для маркировки препарата, при массовых обследованиях делаются две полоски, где наносят маркировку.

Препарат «толстая капля» на мазке:

— на предметном стекле готовят мазок крови более толстый,

чем требуемый для исследования на малярию;

— сразу после приготовления мазка, пока мазок не высох,

его влажной поверхно­стью прикасаются к выступившей капле крови или наносят кровь из капилляра;

— кровь на влажном мазке распределится в равномерный диск при осторожных наклонах предметного стекла под небольшим углом в разные стороны; чем больше взятая капля крови, тем больше площадь, по которой она распределится.

Капля крови, нанесенная на мазок, более прочно прикрепляется, чем нанесенная непосредственно на предметное стекло. Толщина «толстой капли» должна быть такой, чтобы через нее просматривался печатный текст. Слишком толстая капля может от рваться от стекла при высушивании; такой препарат непригоден для исследования.

Независимо от методики приготовления показателем достаточного содержал крови в «толстой капле» является обнаружение в 1 поле зрения микроскопа в среднем: 10—15 лейкоцитов (увеличение: объектив х 90—100, окуляр х 7).

Комбинированные препараты - на предметном стекле одновременно готовят «тонкий мазок» и «толстую каплю» (в целях экономии стекол,

особенно при массовых обследованиях). Этот метод, однако,

требует ряда предосторожностей. Для того чтобы оба препарата

были пригодны для исследования, необходима четкая

последовательность их обработки.

Необходимо начинать с окраски «толстой капли» погружением соответствую­щего участка предметного стекла в раствор краски. Затем фиксируют «тонкий мазок» и окрашивают его. Нельзя начинать с фиксации «тонкого мазка», т. к. даже при очень аккуратном погружении в фиксирующую жидкость участка предметного стекла, на который нанесен «тонкий мазок», в «толстой капле» эритроциты могут подвергнуться фиксации парами фиксатора. При последующей окраске такая капля станет непригодной для исследования, даже если фиксация была неполной. Все препараты высушивают на воздухе. Для ускорения высыхания «толстых капель» можно использовать обычный комнатный вентилятор.

Высушивание на солнце, огне или любом другом источнике тепла исключается, так как препарат становится непригодным для исследования!

  Препарат «тонкий мазок»:

― на край предметного стекла, отступив 0,5—1 см, наносят небольшую крови (объемом меньше в 5—10 раз, чем для препарата «толстая капля»).

― предметное стекло с нанесенной каплей кладут на горизонтальную поверхность стола, при этом край стекла с каплей крови должен быть справа.

― двумя пальцами левой руки предметное стекло за боковые поверхности фик­сируется на столе.

― край шлифованного стекла (фиксированного в правой руке) ставится под уг­лом 45° к предметному стеклу, прикасаясь к левому краю капли крови.

― после того как капля растекается по касательной линии в месте соприкосновения обоих стекол, шлифованное стекло быстрым движением продвигают справа налево к противоположному краю предметного стекла, постепенно ослабляя давление на пред­метное стекло, что позволяет закончить «тонкий мазок» бахромчатой частью, где наибо­лее четко видны специфические особенности морфологии паразитов и изменения пора­женных эритроцитов. Мазок крови должен быть тонким, равномерным, не доходить до конца и краев предметного стекла, заканчиваться бахромчатым краем.

Если угол наклона шлифованного стекла увеличить, то мазок получится короткий и толстый, с расположением эритроцитов в несколько слоев (это маскирует некото­рых паразитов, а также приводит к их деформации); если уменьшить угол наклона, то трудно создать бахромчатую часть мазка. Качество «тонкого мазка» зависит также от правильной подготовки предметного стекла и равномерности края шлифованного стекла.

На плохо вымытом жирном стекле и при дефектах на краю шлифованного стекла «тонкий мазок» получается неравномерным и с просветами.

Затем осуществляют маркировку (карандашом), фиксацию и окраску (по Ро­Мановскому—Гимза) препаратов крови.

 

Микроскопия окрашенных препаратов крови: Препараты крови исследуют под микроскопом с применением масляной иммер­сии: объектив х 90 или х 100, окуляр х 7. Сначала микроскопируют «толстую каплю», затем для уточнения вида возбудителя — «тонкий мазок». При низкой паразитемии исследование только «тонкого мазка может привести к гиподиагностике малярии!

Препарат считается отрицательным, если паразиты не обнаружены после про­смотра 200—300 полей зрения «толстой капли».

После первого обнаружения паразитов исследование продолжают, чтобы:

— определить видовую принадлежность паразитов;

— не пропустить смешанную инфекцию;

— указать, какие стадии паразитов найдены;

— указать наличие или отсутствие гаметоцитов, что имеет важное прогностиче­ское значение в случае тропической малярии;

— указать количество паразитов.

Отрицательный диагноз, поставленный только по «тонкому мазку», считается недостоверным!