Оценка пригодности хроматографической системы

Определяемый компонент	Время выхода (Т), мин	Симмет- рия пика	Число теорети- ческих тарелок	Разде- ление	RSD% Т пика	RSD% S пика
Мелоксикам	13,768	0,984	101930	8,196	0,076	1,477
Метилпарабен	6,789	1,074	24910	-	0,039	1,564
Пропилпарабен	12,348	0,975	82880	32,256	0,079	2,314
Критерий приемлимости	-	0,8-2,0	2000	Не менее 1,5	Не более 2	Не более 2

В процессе разработки методики количественного определения мелоксикама в субстанции и его лекарственных формах – в гелях и мазях также снимали спектры поглощения самого мелоксикама и консервантов - метилпарабен и пропилпарабен (нипагин и нипазол) и определяли максимумы поглощения этих веществ.    

 

Определение идентифицируемых примесей в ЛФ мелоксикама

Методика определения идентифицируемых примесей соответ-

ствовала методике определения количественного содержания мелоксикама. Условия хроматографирования представлены и описаны выше. Для определения времён удерживания примесей хроматографировали смесь стандартов действующего вещества - мелоксикама, консервантов (метилпарабена и пропилпарабена) и примесей А и Б.

Испытуемый раствор: около 0,5 г геля или мази (точная навеска) отвешивали в мерную колбу на 50 мл, добавляли 5 мл диметилформамида и 5 мл воды для хроматографии, перемешивали до однородного состояния (при необходимости колбу помещали в ультразвуковую ванну на 2-3 минуты). Доводили содержимое колбы до метки водой для хроматографии, перемешивали.

Полученный раствор отфильтровали через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения: около 0,0100 г стандартного образца мелоксикама (точная навеска) отвешивали в мерную колбу на 100 мл, добавляли 5 мл диметилформамида, перемешивали до растворения. Доводили содержимое колбы до метки водой для хроматографии, перемешивали (раствор А). 0,1 мл раствора А отмеривали в мерную колбу на 100 мл и доводили водой до метки (0,1 мкг/мл). Полученный раствор отфильтровывали через мембранный фильтр 0,45 мкм.

Приготовленные растворы сравнения и для испытаний вводили с помощью шприца в хроматографическую систему хроматографа при условиях, описанных выше. Определяли времена удерживания и рассчитывали площади пиков примесей. Площадь примеси А на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм (не более 0,1% примеси А), площадь пика примеси В на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%). Расчёт производили по формуле:

Х,%_А,В = S_{A или В} ∙ 0,1 / S_st                  (21),  

где S_{A или В} - средняя площадь пика примеси А и В на хроматограмме испытуемого раствора при 350 и 260 нм соответственно;

S_st – средняя площадь пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм.

При определении неидентифицируемых примесей площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора мелоксикама при длине волны наибольшего отклика (260 или 350 нм) должна быть не более площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм (не более 0,1%). Суммарное содержание примесей не должно превышать 0,3%.

При использовании метода ВЭЖХ чувствительность метода при определении мелоксикама составила 0,1 мкг/мл.

С помощью хроматографирования раствора стандартного образца ЛВ мелоксикама, раствора геля мелоксикама, а также консервантов известной концентрации получали хроматограммы (рис. 11).

Рис. 11. Хроматограмма стандартного раствора мелоксикама.

 

На хроматограмме оценивали время удерживания и площадь пика мелоксикама, а также метилпарабена и пропилпарабена.

Данные результаты представлены в таблице 5.        

Таблица 5

Количественные характеристики

Мелоксикама и консервантов

№	Наименование определяемого вещества	Время удерживания, мин	Площадь пика
1	Meloxicam	13,761	8880752
2	Метилпарабен	6,792	1988440
3	Пропилпарабен	12,345	707730

 

Как видно из хроматограммы (рис.11) и таблицы 5 время удерживания мелоксикама - 13 мин., для метилпарабена - 6 мин., а для пропилпарабена - 12 мин., что по значению приближается ко времени удерживания мелоксикама. 

Идентификация мелоксикама в геле основана на том, что при определённых условиях постоянного хроматографирования - время удерживания мелоксикама в стандартном растворе не изменяется и соответствует времени удерживания лекарственного вещества - мелоксикама в испытуемом растворе геля мелоксикама, что наглядно можно увидеть на хроматограмме, представленной на рис. 12 и 13.

 

 

Рис. 12. Хроматограмма 1% геля с мелоксикамом.

 

Рис. 13. Хроматограмма раствора стандартов мелоксикама, метилпарабена, пропилпарабена, примеси А и примеси Б.

 

Анализируя данные хроматограммы геля с мелоксикамом оценивали время удерживания и площадь пика мелоксикама, метилпарабена, пропилпарабена и других примесей, значения которых приведены в таблице 6.

Таблица 6