Спеціальні поживні середовища

І. Рідкі молочні поживні середовища (незбиране, збиране, гідролізоване молоко).

а) Гідролізоване молоко. Збиране молоко кип'ятять, охолоджують до температури 45°С, встановлюють рН 7,6-7,8, додають до 1 лмолока 0,5-1 г порошку панкреатину, (попередньо його розводять водою) або 2-3 г підшлункової залози, яку ретельно подрібнюють. Додають до суміші 5 млхлороформу. Колбу закривають, витримують при 40 °С 18-24 год. Потім фільтрують крізь паперовий фільтр, розводять в 2-3 рази водою, встановлюють РН 7,0-7,2 істерилізують 15 хв при 121 °С.

ІІ. Густі молочні середовища (агар з гідролізованим молоком, агар з гідролізованим молоком та крейдою, молочний агар).

а) Молочний агар. Готують внесенням 20-30 % гарячого стерильного збираного молока у стерильний розплавлений 2% водний розчин агару і ретельно перемішують. Застосовують для визначення протеолітичних (гнильних), і пептонізуючих бактерій (мікрококи, маммококи).               

ІІІ. Середовище для визначення дріжджів та плісняви (сусло-агар, Сабуро).

а)   Середовище сусло-агар. До сусла додають 2-3% агару, плавлять агар протягом 10 хв при тиску 0,1 мПа, фільтрують крізь ватний фільтр, розливають по колбах або пробірках стерилізують протягом 15 хв при тиску 0,1мПа.

б) Середовище Сабуро. До складу входить мальтоза або глюкоза (4г), пептон (1г), агар (2г), вода (100 мл). Стерилізують при температурі 115 °С протягом 15 хв.

І V. Середовище для визначення кишкових паличок.

  а) Глюкозо-пептонне середовище – буває нормальне або концентроване.    Концентроване: 100 г пептону, 50 г NаС1, 50 г глюкози, 1л води.

Після розчинення компонентів додають індикатор (20 мл 1,6% спиртового розчин бромтимолового синього або 100 мл індикатора Андреде), встановлюють РН 7,4-7,6, розливають по 10 мл у пробірки з поплавками або шматочками вати, стерилізуют при 112 °С і тиску 0,5 мПа.

Нормальне: усі компоненти беруть в 10 раз менше або концентроване розбавляють 10 раз водою, а потім стерилізують.

б) Рідке середовище Кеслер: до 1 л води додають 10 г пептону, 50 мл жовчі (бичої або інших свійських тварин), кип'ятять суміш протягом 20-30 хв. у водяній бані, фільтрують крізь вату. У отриманому фільтраті розчиняють 2,5 г глюкози, доводять об'єм суміші водою до 1 л, встановлюють рН 7,4-7,6, після чого додають 2 мл  1% водного розчину кристалічного фіолетового, розливають по пробірках по 5 мл або колби з поплавком і стерилізують протягом 10 хв при 121 °С. Готове середовище має фіолетовий колір. Жовч і кристалічний фіолетовий є інгібіторами молочнокислих бактерій, пригнічують їх розвиток, полегшуючі виявлення кишкових паличок.

в) Тверде середовище Кеслер. До рідкого середовища Кеслер додають 0,8% агару, встановлюють по фенолфталеїну рН 7,6, розливають по 7-8 мл у пробірки, стерилізують при температурі 112 °С протягом 15 хв.

V. Диференційовно-діагностичні середовища.

 Середовища для ідентифікації бактерій групи кишкових паличок:

  Ендо: до 100 мл розплавленого 3%МПА (рН 7,6-7,3) дотримуючись асептики додають 1 г лактози (яку попередньо розчиняють у 5 мл стерильної води). У окрему пробірку наливають 0,5мл відфільтрованого10% спиртового розчину основного: фуксину, до якого додають свіжоприготовлений 10% водний розчин серністокислого натрію (Na2SO3·7H2O) до отримання блідо-рожевого забарвлення. Отриману, таким чином, суміш додають у розплавлений лактозний агар і розливають у чашки Петрі. Середовище Ендо випускають у вигляді сухого порошку (спосіб приготування на етикетці) на середовище Ендо БГКП, що зброджує лактозу (непатогенні) утворюють колонії від темно-червоного до рожевого кольору, а патогенні (що не зброджують  лактозу) безбарвні колонії.

 

                  Підготовка посуду до стерилізації

    Перед стерилізацією лабораторний посуд миють і сушать. Пробірки, колби, склянки  закривають ватно-марлевими пробками. Гумові, коркові і скляні пробки стерилізують у окремому пакеті, прив'язаному до горловини посуду (посуд закривають паперовими ковпаками). Чашки Петрі стерилізують загорнутими у папір 1-5 шт. Пастерівські піпетки – по 3-15шт і загортають у щільний папір. У верхню частину піпетки вкладають шматочок  вати, який запобігає попадання мікробів у посівний матеріал з рота.