Кафедра мікробіології, вірусології та епізоотології

МЕТОДИЧНА РОЗРОБКА

До лабораторних занять

З курсу

“Ветеринарна вірусологія”

для студентів

ОКР «Магістр», «Бакалавр»

Житомир 2011

Методична розробка до лабораторних занять з курсу “Ветеринарна вірусологія” підготована доцентом, к.б.н. Солодкою Л.О.

 

 

Затверджено на засіданні кафедри мікробіології, вірусології та епізоотології «_____________»_____________ 2011 р., протокол №______

 

Зав. кафедрою, професор Галатюк О.Є.

 

 

Затверджено на засіданні методичної комісії факультету ветеринарної медицини “_____” _______________ 2011 р., протокол №______

 

 

Голова методичної комісії

факультету ветеринарної медицини, професор Довгій Ю.Ю.

 

ЗМІСТ

Заняття №1. Правила відбору та транспортування вірусовмісного матеріалу…………………………...........................................………………….4

Заняття №2. Правила роботи з вірусовмісними матеріалами у лабораторії............................................................................................................. 9

Заняття №3. Методи знищення та інактивації вірусів………………………………………………………….............................12

Заняття №4. Методика дослідження патологічного матеріалу у вірусологічній лабораторії………….........................................................……17

Заняття №5. Підготовка вірусовмісного матеріалу до досліджень……………………………………………………........…………….21

Заняття № 6. Живильні середовища для культур клітин...........................26

Заняття № 7. Методика роботи з культурами клітин..................................34

Заняття № 8. Реакція дифузної преципітації................................................ 40

Заняття № 9. Визначення титру вірусів...................45

Заняття № 10. Методики постановки реакцій гемаглютинації

……………..............................…51

Література……………………………………………………………………….56
Заняття №1

 

Правила відбору та транCпортування вірусовмісного матеріалу.

Правила відбору патологічного матеріалу.

Упаковка та транспортування вірусовмістного матеріалу.

Консервація відібраних вірусовмісних матеріалів.

Правила відбору патологічного матеріалу

Патологічний матеріал необхідно відібрати при появі чітких ознак хвороби або не пізніше, ніж через 2 годин після загибелі чи вимушеного забою тварини (рис.1.1).

Зміна терміну відбору зразків призведе до:

 

Контамінації патматеріалу кишечною мікрофлорою

Зменшення кількості або інактивації вірусу в пат матеріалі

 

Причина – зменшення бар’єрної ролі кишечника

Причина- дія захисних механізмів у хворої, посмертна аутостерилізація у мертвої тварини.

Неможливості накопичення вірусу в лабораторних дослідженнях

Неможливості остаточної ідентифікації збудника

Неможливості постановки точного діагнозу

Рис. 1.1. Наслідки зміни термінів відбору вірусвмістних зразків.

Ветеринарному лікарю, який має відбирає патологічний матеріал, необхідно звертати увагу не тільки на час відбору зразка, але й на інші обставини, зв’язані із тропізмом збудника (табл.1.1):

· вхідні ворота інфекції;

· шляхи розповсюдження вірусу в організмі тварини;

· місця найбільш інтенсивного розмноження вірусу в організмі тварини;

· шляхи виділення збудника в навколишнє середовище.

Табл. 1.1. Місця відбору патологічного матеріалу при різних типах вірусних інфекцій.

Тип вірусної інфекції	Патологічний матеріал
Респіраторна	Мазки та змиви з носу та глотки, соскоби трахеї, носоких перегородок, шматки легенів від трупів та вимушено забитих тварин.
Ентеровірусна (вісцеротропна)	Кал, слизова оболонка тонкого кишечнику
Нейротропна	Шматки головного або спинного мозку
Дермотропна	Шматки ураженої шкіри
Антропна	Кров, паренхіматозні органи

 

Упаковка та транспортування вірусовмісного матеріалу

 

Біологічні особливості вірусів є причиною того, що будь-який вірусовмісний матеріал вважається небезпечним. Тому упаковка патологічного матеріалу завжди робиться багатошаровою (рис1. 2).

 

Рис 1.2. Упаковка вірусвмістного матеріалу.

1. Вірусовмісний матеріал відбирають в стерильний, скляний, герметично закритий флакон (№1). Обідок герметизують парафіном, воском, плівкою “Парафілм”. Кожен флакон маркірують за допомогою етикетки, напис на який роблять простим олівцем по лейкопластирю або водостійким маркером.

Зміст напису на етикетці

Господарство____________________________________________

Дата ____________________________________________

Вид тварини ____________________________________________

Вид матеріалу____________________________________________

 

2. Флакони упаковують у матеріал (№2), що поглинає вологу в випадку пошкодження флакону (вата, цигарковий папір).

3. Склянку, обгорнуту ватою пакують у поліетиленовий пакет, який для герметизації заклеюють лейкопластирем (№3).

4. Пакет ставлять у твердий водонепроникний контейнер (метал, пластик – №5), всередині якого знаходиться протиударний матеріал (вата, папір, тирса – №4).

5. Флакони ставлять в металевий, пластиковий або пенопластовий термос, залитий охолоджуючою рідиною (№6). На термосі є бірка з лейкопластиру, картону, фанери (№7). Напис на ній виконуєтьсяпростим олівцем або стійким до води маркером, а зміст – співпадає з текстом етикетки.

Охолодження потрібно тому, що при температурах нижче 0^оС віруси зберігаються (консервуються), а супутні мікроорганізми (бактерії, гриби, актиноміцети та ін. з місця відбору зразка) значно уповільнюють розмноження або гинуть. Охолоджувальними агентами є:

· рідкий азот (Т = -196⁰С),

· рідкий водень (Т = -203⁰С),

· суміш сухого льоду та етанолу в рівних пропорціях (Т = -71⁰С),

· сухий лід (Т= -70⁰ С),

· суміш трьох вагових частин льоду або снігу з однією частиною солі (Т = -20⁰С).

До патматеріалу обов’язково додається супровідний документ. На основі даного документу співробітники лабораторії вибирають напрямок та методи досліджень патматеріалу. Якщо на думку ветеринарного лікаря збудником хвороби може бути як вірус, так і патогенні мікроорганізми (бактерії або гриби), відібраний патологічний матеріал поділяють на декілька частин (для проведення вірусологічних, бактеріологічних та мікологічних досліджень).

Зміст напису на супровідному документі Вид тварини _________________ Вік тварини _________________ Вид матеріалу _________________ Господарство _________________ Інформація про епізотологічні дані господарства Попередній діагноз Прізвище лікаря ______________ Дата відбору ___________________ Особистий підпис ______________