Количественное определение холестерина в сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода:

1. Эфиры ХС холестерин + жирные кислоты.

2. Холестерин + О₂ + Н₂О₂ холестенон + Н₂О₂.

3. 2Н₂О₂ + 4-аминоантипирин + фенол окрашенное соединение 4Н₂О.

Реактивы: 1) рабочий реагент включает фосфатный буфер, натрий холевокислый, фенол, 4-аминоантипирин, холестериноксидазу, холестеринэстеразу, пероксидазу; 2) калибровочный раствор холестерина концентрацией 4,65 ммоль/л.

Ход работы осуществить по табл. 5.

Таблица 5

Определение холестерола в сыворотке крови ферментативным методом

Отмерить	Опытная проба, мкл	Калибровочная проба, мкл
Рабочий реагент	1000	1000
Сыворотка крови	100	−
Калибратор	−	100

Пробы перемешать, инкубировать 10 мин при температуре 37 °С. Определить оптическую плотность опытных и калибровочной проб против рабочего реагента при λ=500 (490–520) нм. Окраска стабильна в течение 60 мин.

Результаты:

D₁ =                   D₂ =                   D_к =

Содержание холестерина (ммоль/л) рассчитывают по формуле:

С = D₁/D_к × 4,65.

С₁ =                   С₂ =

Норма в сыворотке крови менее 5,2 ммоль/л.

Выводы: ___________________________________.

Тестовые задания

Выберите правильный ответ

1. ЛИМИТИРУЮЩЕЙ СТАДИЕЙ БИОСИНТЕЗА ХОЛЕСТЕРОЛА ЯВЛЯЕТСЯ РЕАКЦИЯ, В КОТОРОЙ ОБРАЗУЕТСЯ

а) ацетоацетат

б) β-гидроксибутират

в) ацетоацетил-КоА

г) мевалонат

2. ТРАНСПОРТ ЭКЗОГЕННОГО ХОЛЕСТЕРОЛА И ТАГ ИЗ КИШЕЧНИКА В ТКАНИ ОСУЩЕСТВЛЯЮТ

а) хиломикроны (ХМ)

б) ЛПОНП и ЛПНП

в) ЛПВП и ЛПОНП

г) ХМ и ЛПОНП

3. ТРАНСПОРТ ЭНДОГЕННОГО ХОЛЕСТЕРОЛА И ТАГ ИЗ ПЕЧЕНИ В ТКАНИ ОСУЩЕСТВЛЯЮТ

а) ЛПВП и ЛПНП           в) ЛПВП и ЛПОНП

б) ЛПОНП и ЛПНП               г) ХМ и ЛПОНП

4. ОБРАЗОВАНИЕ ЛПНП ПРОИСХОДИТ ИЗ

а) незрелых ЛПОНП

б) ЛППП в крови

в) ЛПВП и ЛПОНП

г) незрелых ЛПВП

5. ГИДРОЛИЗ ТАГ В СОСТАВЕ ХМ И ЛПОНП ОСУЩЕСТВЛЯЕТ ФЕРМЕНТ

а) моноацилглицероллипаза

б) триацилглицероллипаза

в) липопротеинлипаза

г) диацилглицероллипаза

6. ЛИПОПРОТЕИНЫ, КОТОРЫЕ ПРИ ХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ МОГУТ ОБЛАДАТЬ АТЕРОГЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ, – ЭТО

а) ЛПВП и ХМ                   

б) ЛПНП и ЛПОНП

в) ЛПНП и ЛПВП   

г) ЛПОНП и ЛПВП

7. АКТИВАЦИЮ КЛЮЧЕВОГО ФЕРМЕНТА СИНТЕЗА ХОЛЕСТЕРОЛА – ГМГ-КоА-РЕДУКТАЗУ СТИМУЛИРУЕТ ГОРМОН

а) глюкагон

б) адреналин

в) инсулин

г) кортизол

8. ЛПВП В КРОВИ ТРАНСПОРТИРУЮТ

а) ХС из печени в ткани

б) ХС из тканей в печень

в) ТАГ из кишечника в ткани

г) ТАГ из печени в ткани

9. АНТИАТЕРОГЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ ОБЛАДАЮТ

а) ЛПВП

б) ЛПОНП

в) ЛПНП

г) ЛППП

10. УВЕЛИЧЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ РЕЦЕПТОРОВ К ЛПНП В ТКАНЯХ ПРОИСХОДИТ ПОД ВЛИЯНИЕМ ГОРМОНА

а) кортизола

б) инсулина

в) адреналина

г) глюкагона

11. РОЛЬ АПОБЕЛКА А-I В ОБМЕНЕ ЛПВП

а) активатор ЛП-липазы

б) лиганд рецепторов ХМ

в) активатор ЛХАТ на ЛП

г) переносчик эфиров ХС

12. РОЛЬ АПОБЕЛКА C-II В ОБМЕНЕ ЛП

а) активатор ЛП-липазы

б) лиганд рецепторов ХМ

в) активатор ЛХАТ на ЛП

г) переносчик эфиров ХС

13. РОЛЬ АПОБЕЛКА Е В ОБМЕНЕ ЛП

а) активатор ЛП-липазы

б) лиганд рецепторов ХМ

в) активатор ЛХАТ на ЛП

г) переносчик эфиров ХС

14. РОЛЬ АПОБЕЛКА D В ОБМЕНЕ ЛП

а) активатор ЛП-липазы

б) лиганд рецепторов ХМ

в) активатор ЛХАТ на ЛП

г) переносчик ЭХС от ЛПВП

15. РОЛЬ АПОБЕЛКА В-100 В ЛПНП

а) активатор ЛП-липазы

б) лиганд рецепторов ЛП

в) активатор ЛХАТ на ЛП

г) переносчик эфиров ХС

16. ОЦЕНКА РИСКА РАЗВИТИЯ АТЕРОСКЛЕРОЗА ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ ПО КОЭФФИЦИЕНТУ АТЕРОГЕННОСТИ (К_а), КОТОРЫЙ РАВЕН

а) сумме (ХС) ЛПОНП и (ХС) ЛПНП

б) уровню холестерола (ХС) в ЛПНП

в) уровню холестерола (ХС) в ЛПВП

г) общий ХС – (ХС) ЛПВП/(ХС) ЛПВП

17. КОЭФФИЦИЕНТ АТЕРОГЕННОСТИ (К_а) В НОРМЕ НЕ ДОЛЖЕН ПРЕВЫШАТЬ

а) 2,5                            в) 5,0

б) 3,0                            г) 6,0

18. СТАТИНЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГИПЕРХОЛЕСТЕРОЛЕМИИ, ДЕЙСТВУЮТ КАК

а) мембранопротекторы и антиоксиданты

б) активаторы катаболизма ЛПНП

в) ингибиторы ГМ-КоА-редуктазы

г) адсорбенты желчных кислот

19. ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИПОПРОТЕИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ НАЗЫВАЕТСЯ

а) дислипопротеинемия

б) гипопротеинемия

в) диспротеинемия

г) гипохолестеролемия

20. МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ВЕЩЕСТВ ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ПО ГРАДИЕНТУ КОНЦЕНТРАЦИИ С ПОМОЩЬЮ БЕЛКОВЫХ КАНАЛОВ НАЗЫВАЕТСЯ

а) простая диффузия

б) пассивный унипорт

в) пассивный симпорт

г) активный антипорт

21. Nа⁺/K⁺-АТФазы ОБЕСПЕЧИВАЮТ СОПРЯЖЕНИЕ ГИДРОЛИЗА АТФ С

а) одновременным транспортом ионов Nа⁺ и K⁺ в клетку

б) транспортом 2K⁺ в клетку и выведением 3Nа⁺ из клетки

в) одновременным выведением ионов Nа⁺ и K⁺ из клетки

г) транспортом 3K⁺ в клетку и выведением 3Nа⁺ из клетки

22. МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ОДНОГО ВЕЩЕСТВА ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ПО ГРАДИЕНТУ КОНЦЕНТРАЦИИ С УЧАСТИЕМ ТРАНСЛОКАЗ НАЗЫВАЕТСЯ

а) пассивный симпорт

б) активный антипорт

в) пассивный антипорт

г) пассивный унипорт

23. МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ДВУХ РАЗНЫХ ВЕЩЕСТВ ПО ГРАДИЕНТУ КОНЦЕНТРАЦИИ В ОДНОМ НАПРАВЛЕНИИ С УЧАСТИЕМ ТРАНСЛОКАЗ НАЗЫВАЕТСЯ

а) пассивный антипорт

б) активный антипорт

в) пассивный симпорт

г) пассивный унипорт

24. МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ДВУХ РАЗНЫХ ВЕЩЕСТВ ПО ГРАДИЕНТУ КОНЦЕНТРАЦИИ В ПРОТИВОПОЛОЖНЫХ НАПРАВЛЕНИЯХ С УЧАСТИЕМ ТРАНСЛОКАЗ НАЗЫВАЕТСЯ

а) пассивный симпорт

б) пассивный антипорт

в) активный антипорт

г) пассивный унипорт

25. МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ИОНОВ ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ПРОТИВ ГРАДИЕНТА КОНЦЕНТРАЦИИ С ЗАТРАТОЙ АТФ И УЧАСТИЕМ ТРАНСПОРТНЫХ АТФаз (ИОННЫХ НАСОСОВ) НАЗЫВАЕТСЯ

а) вторично-активный

б) пассивный антипорт

в) первично-активный

г) пассивный унипорт

26. ПЕРЕНОС ВЕЩЕСТВ (ЧАСТИЦ) ИЗ СРЕДЫ В КЛЕТКУ ВМЕСТЕ С ЧАСТЬЮ ПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ НАЗЫВАЕТСЯ

а) эндоцитоз

б) экзоцитоз

в) пиноцитоз

г) фагоцитоз

27. ПЕРЕНОС ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ МОЛЕКУЛ В СОСТАВЕ СЕКРЕТОРНЫХ ГРАНУЛ ИЛИ ТРАНСПОРТНЫХ ВИЗИКУЛ ИЗ КЛЕТКИ ВО ВНЕКЛЕТОЧНОЕ ПРОСТРАНСТВО НАЗЫВАЕТСЯ

а) эндоцитоз

б) фагоцитоз

в) пиноцитоз

г) экзоцитоз

28. АКТИВНЫМИ ФОРМАМИ КИСЛОРОДА ЯВЛЯЮТСЯ

а) Н₂О, СО, Н₂S

б) НCО₃^–, О₂, СО

в) О₂^•–, ОН^•, Н₂О₂

г) СО₂, Н₂О, НСN

29. ЗАЩИТУ КЛЕТОК ОТ О₂^•– ОСУЩЕСТВЛЯЕТ Zn-, Cu-, Mn-ЗАВИСИ­МЫЙ ФЕРМЕНТ АОС

а) глутатионтрансфераза

б) глутатионпероксидаза

в) глутатионредуктаза

г) супероксиддисмутаза

30. ЗАЩИТУ КЛЕТОК ОТ Н₂О₂ И ГИДРОПЕРЕКИСЕЙ ЛИПИДОВ ОСУЩЕСТВЛЯЕТ Sе-ЗАВИСИМЫЙ ФЕРМЕНТ АОС

а) глутатионредуктаза

б) глутатионпероксидаза

в) глутатионтрансфераза

г) супероксиддисмутаза

31. ЗАЩИТУ КЛЕТОК ОТ Н₂О₂ ОСУЩЕСТВЛЯЕТ ГЕМСОДЕРЖАЩИЙ ФЕРМЕНТ АОС

а) каталаза

б) глутатионпероксидаза

в) глутатионредуктаза

г) супероксиддисмутаза

32. ГЕМСОДЕРЖАЩИЙ ФЕРМЕНТ КАТАЛАЗА ЗАЩИЩАЕТ КЛЕТКИ ОТ

а) гидроксильных радикалов

б) гидропероксидов липидов

в) супероксидных радикалов

г) пероксида водорода

33. ЗАЩИТУ КЛЕТОК ОТ ГИДРОПЕРЕКИСЕЙ ЛИПИДОВ (ROOH) ОСУЩЕСТВЛЯЕТ Sе-НЕЗАВИСИМЫЙ ФЕРМЕНТ АОС

а) глутатионредуктаза

б) глутатионпероксидаза

в) глутатионтрансфераза

г) супероксиддисмутаза

34. ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗА, ФЕРМЕНТ РЕПАРАЦИИ АОС, СОДЕРЖИТ КОФЕРМЕНТ

а) НАДФН + Н⁺

б) ФАД∙2Н

в) ФМН∙2Н

г) НАДН+Н⁺

Ответы на тестовые задания

1: г	8: б	15: б	22: г	29: г
2: а	9: а	16: г	23: в	30: б
3: б	10: б	17: б	24: б	31: а
4: б	11: в	18: в	25: в	32: г
5: в	12: а	19: а	26: а	33: в
6: б	13: б	20: а	27: г	34: а
7: в	14: г	21: б	28: в

 

Приложение

Требования к написанию и защите рефератов*

1. Содержание работы должно соответствовать заявленной теме. Степень раскрытия темы учитывается при оценивании реферата.

2. В реферате отражается обзор современных и достоверных источников по исследуемому вопросу. В перечне использованной литературы должно содержаться не менее 10 источников, 70% которых – научные и учебно-методические издания; из них более 50% – литература, опубликованная за последние 5 лет.

3. В реферате используются литературные данные и информация интернет-ресурсов, выходящих за рамки учебников, рекомендованных к прочтению по программе (желательно).

4. Материал, излагаемый в реферате, должен опираться на ссылки как отечественных, так и зарубежных авторов (желательно).

5. Структура реферата должна включать: титульный лист, оглавление, содержание реферата (введение, основная часть, заключение), список использованной литературы и интернет-источников.

6. Объем реферата должен составлять 20–30 страниц текста, выравненного по ширине (шрифт 12, интервал 1,5).

7. Стиль изложения должен соответствовать требованиям научного жанра. При оценивании реферата учитывается грамотность письменной речи (орфография, синтаксис, пунктуация).

8. Изложение теоретического вопроса должно отражать его практическое значение.

9. Защита рефератов предполагает использование наглядных материалов (рисунков, таблиц, мультимедийной презентации, раздаточных материалов, видеоматериалов) и проводится на занятиях в соответствии с учебным планом.

10. На защиту реферата отводится строго 10–15 мин. При оценивании выступления учитывается соблюдение временного регламента.

11. Печатный экземпляр реферата студент сдает преподавателю.

Примечание: репродуктивный реферат – это сообщение, в котором проводится изложение информации по данному вопросу из нескольких источников; продуктивный реферат – это научное сообщение, в котором материалы, используемые в реферате, подвергаются анализу.

Темы рефератов

1. Гормоны гипофиза, механизмы действия, биологическая роль.

2. Гормоны щитовидной и паращитовидной желез, механизм действия, биологическая роль.

3. Полиненасыщенные жирные кислоты (ω3 и ω6), биологическая роль. Эйкозаноиды. Терапевтическое действие и область применения ω3 жирных кислот.

4. Биологические мембраны, строение, биологическая роль.

5. Свободнорадикальное окисление. Перекисное окисление липидов мембран в норме и при патологии. Роль ПОЛ в развитии пародонтита.

6. Жирорастворимые витамины. Строение и механизм действия витаминов А, D, Е, K. Биологическая роль, использование в стоматологической практике.

7. Особенности биохимических процессов в печени.

8. Особенности биохимических процессов в почках. Механизм образования мочи. Нормальные и патологические компоненты мочи.

9. Особенности биохимических процессов в нервной ткани.

10. Биохимические механизмы развития кариеса.

11. Состав и структура тканей пародонта. Биохимические механизмы развития пародонтита. Роль ферментов лизосомального происхождения в прогрессировании пародонтита.

12. Особенности химического состава и метаболических процессов пульпы. Биохимические механизмы развития пульпита.

13. Особенности химического состава десневой жидкости и ее роль в развитии пародонтита.

14. Биохимические аспекты минерализации твердых тканей зуба и кости. Эндокринная регуляция этого процесса.

 

Содержание

Список сокращений. 10

Введение. 11

Раздел IX. Обмен липидов. Биологические мембраны.. 12

Тема 1. Классификация, свойства и роль липидов. Переваривание и ресинтез липидов в ЖКТ. Нарушения липидного обмена 12

Тестовые задания. 21

Ответы на тестовые задания. 23

Тема 2. Определение ТАГ в сыворотке крови. Клинико‑диагностическое значение 23

Тестовые задания. 30

Ответы на тестовые задания. 32

Тема 3. Коллоквиум по разделу IX «Классификация, свойства, роль липидов. Переваривание липидов в ЖКТ», «Обмен липидов в тканях и его гормональная регуляция». 32

Тестовые задания. 40

Ответы на тестовые задания. 42

Тема 4. Обмен липопротеинов и холестерола. Клинико-диагностическое значение определения ХС в крови. Биологические мембраны: строение, биологическая роль. Нарушения липидного обмена            43

Тестовые задания. 64

Ответы на тестовые задания. 70

Приложение. 71

 

Для заметок

 

 

Для заметок