Лабораторные исследования патологического материала

Оглавление

Введение

1.Организации диагностической лаборатории
1.1 Устройство и противоэпидемический режим
1.2. Взятие и доставка патологического материала

1.3. Работа с патологическим материалом

Лабораторные исследования патологического материала

2.1. Микроскопическое исследование

2.2. Посев патологического материала и количественный учет при микозах, вызванных дрожжевыми грибами

2.3. Микроскопическое исследование и посев патологического материала при микозах, вызванных плесневыми грибами

2.4. Микроскопическое исследование и посев патологического материала при подозрении микозов, вызванных диморфными грибами

2.5. Микроскопическое исследование и посев патологического материала при дерматомикозах (кератомикозах и дерматофитиях)

2.6. Серологические методы диагностики микозов.

3. Возбудители микозов, наиболее часто выявляемых при лабораторном исследовании различных клинических материалов.

4. Критерии диагностики системных микозов: клинические и лабораторные параметры окончательного диагноза.

5. Возбудители грибковых инфекций.

Возбудители поверхностных микозов

5.2. Возбудители дерматомикозов.

5.3. Возбудители подкожных микозов.

Возбудители глубоких микозов (первично патогенные микромицеты).

Условно-патогенные грибы.

Возбудители псевдомикозов.

Приложения:

1. Методы выявления тканевых форм микромицетов.

2. Наиболее часто употребляемые питательные среды для выявления и культивирования грибов-микромицетов.

3. Краткий словать микологических терминов.

Введение

Грибковые инфекции являются важной проблемой клинической медицины. Из потенциальных "болезней будущего" микозы превратились в актуальные "болезни настоящего". Возбудители микозов многочисленны и вызываемые ими заболевания человека и животных весьма разнообразны. Количество видов микроскопических грибов (микромицетов) оценивается ~ 100 000-200 000 видов. Ежегодно описывается ~ 1500 новых видов (Perfect a. Schell, 1996). Реальное значение в клинической практике в настоящее время имеют около 100 видов.

Известно несколько классификаций микромицетов. В основе одной из классификаций грибов положен способ их размножения. Истинные грибы - эумицеты, подразделяют на 4 класса (Kwon-Chung, 1996): Chytridiomycetes (хитридиомицеты), Zygomycetes (зигомицеты), Ascomycetes (филаментирующие и дрожжевые аскомицеты), Basidiomycetes (базидиомицеты). Хитридиомицеты и зигомицеты относятся к низшим грибам – их мицелий не септирован (или редко и неравномерно септирован), в составе клеток присутствует хитин, но отсутствует глюкан-маннановый комплекс полисахаридных веществ, характерных для высших септированных грибов (аскомицетов базидиомицетов). Хитридиомицеты не патогенны для человека и животных. Среди зигомицетов следует выделить возбудителей микозов у человека – виды родов Mucor, Rhizopus, Absidia, Basidiobolus. К классу аскомицетов относят возбудителей большинства важнейших микозов: кандидоза, дерматофитозов, гистоплазмоза, бластомикозов, некоторых мицетом. К классу базидиомицетов относятся такие возбудители, как Cryptococcus neoformans, Malassezia spp., Trichosporon spp., Rhodotorula spp., Schizophyllum commune (к базидиальным грибам относятся также микромицеты – шляпочные грибы).

В медицинской микологии выделен еще класс дейтеромицетов (Fungi imperfecti - грибы несовершенные). Это понятие сборное. К несовершенным грибам относят возбудителей микозов, в цикле развития которых неизвестны стадии полового размножения. По мере накопления знаний многие представители из Fungi imperfecti могут быть включены в классы совершенных грибов.

В связи с этим выделено такое понятие, как грибы, обладающие аффинитетом к тому или иному известному классу эумицетов. Половая стадия у них до сих пор не найдена, но по характеру метаболизма, по химическому составу стенок, по рибосомальной последовательности РНК эти грибы следует отнести к эумицетам определенного класса (к зигомицетам, аскомицетам, базидиомицетам) (см. табл.1.)

Таблица 1.

Микроскопия материала

МИКРОСКОПИЯ мокроты. Для приготовления нативных препаратов мокроту переносят в стерильную чашку Петри и рассматривают на черном фоне для обнаружения мелких частиц (комочков). Комочки могут быть гнойные, гнойно-слизистые, гнойно-кровянистые. Размеры комочков варьируют по величине в пределах 0,3-3 мм в диаметре, цвет их может быть серым, желтоватым, зеленоватым. Для приготовления нативных микропрепаратов отдельные комочки переносят препаравальными иглами или бактериологической петлей в каплю спирта с глицерином, либо в каплю 10% раствора КОН. Накрывают покровным стеклом, слабо надавливают препаровальной иглой и микроскопируют при малом (1:80, окуляр 10 х и объектив 8х) и большом (1:400, окуляр 10х и объектив 40х) увеличениях микроскопа.

Препараты из промывных вод, экссудата, а также желчи, мочи, желудочного сока, ликвора готовят из нативного осадка или из осадка, полученного в результате центрифугирования (при 1500 об/мин в течение 5 мин). Осадок петлей или пастеровской пипеткой переносят в каплю 10% раствора КОН на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают при малом и большом увеличениях микроскопа.

Для приготовления окрашенных препаратов исследуемые комочки или каплю осадка равномерно распределяют препаравальными иглами или предметным стеклом меньшего размера по поверхности стерильного предметного стекла до получения тонкого мазка. Полученный мазок подсушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова (равные части 96% этилового спирта и эфира) в течение 3-5 мин, либо троекратным фламбированием над пламенем горелки. Фиксированный мазок окрашивают по Граму, РАS-методом, калькофлюором белым. Окрашенный препарат микроскопируют с использованием иммерсионной системы микроскопа (1:900, окуляр 10х, объектив 90х).

Посев материала

При исследовании любого патологического материала на мицелиальные грибы его засевают на плотную среду Сабуро или сусло с добавлением пенициллина и стрептомицина (100-200 ед./мл среды). Посев производят в двух повторениях, учитывая различные температурные режимы выращивания мицелиальных грибов (+37 ^оС и +28 ^оС), всегда в 3 точки в центре чашки. Время инкубации 4-5 суток.

Мокроту (отобранные комочки) переносят бактериологической петлей или пастеровской пипеткой на поверхность среды Сабуро или сусла. Место посева отмечают карандашом с обратной стороны дна чашки Петри. Засеянные чашки Петри помещают в термостат крышкой вверх.

После определенного срока инкубации засеянные чашки просматривают и при обнаружении спороношения определяют культуру гриба. В случае отсутствия спороношения гриб пересевают на дифференциальную среду Чапека для дальнейшей идентификации.

Осадок промывных вод бронхов, гайморовых полостей, экссудата, мочи, желудочного сока (нативный или после центрифугирования) забирают пипеткой и засевают в объеме 0,1 мл. Фекалии разводят 1:10 (1г фекалий и 9 мл жидкости) в жидкой среде Сабуро или жидком стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, эмульгируют, отстаивают 10 мин для осаждения крупных частиц, засевают надосадочную жидкость в объеме 0,1 мл. Отделяемое наружного слухового прохода и зева, взятое тампоном, сеют, тщательно проводя каждой стороной тампона по поверхности питательной среды. Можно засевать смывы с тампонов. Для этого тампоны помещают в 10 мл жидкой среды Сабуро или жидкого сусла со стеклянными бусами и эмульгируют 10 мин, засевают 0,1 мл смыва с тампона газоном (по Лещенко В.М., 1973), либо в три точки.

Кожные и ногтевые чешуйки помещают на поверхность питательной среды, тщательно прижимая их.

Осадок цереброспинальной жидкости (центрифугат при 1500 об/мин в течение 5 мин) сеют на две чашки среды по 0,1 мл, а его остаток засевают в среду обогащения (жидкая среда Сабуро или жидкое сусло), разлитую по пробиркам в объеме 5 мл. Засеянные чашки инкубируют как обычно, а пробирки с посевом на среде обогащения - при + 28 С в течение 10 дней.

В случае наличия роста мицелиального гриба на плотных средах культуру его определяют из этого посева, при отсутствии роста на Сабуро-агаре или сусло-агаре гриб изучают со среды обогащения. Для этого культуру гриба пересевают еще раз на дифференциальную плотную среду Чапека и в дальнейшем идентифицируют.

Из кусочка ткани органа (биопсия, аутопсия) делают отпечаток на поверхность плотной среды надрезанной стороной исследуемого кусочка в трех точках. Одновременно кусочки тканей помещают в 50 мл жидкой питательной среды (Сабуро, сусло).

Кровь исследуют при подозрении на фунгемию в двух - трех повторах. Засевают 5 или 10 мл крови, соответственно в 50 или 100 мл жидкой среды Сабуро с 2 % глюкозы. Посевы выращивают при +37 С и +28 С в течение 10 дней. Первый просмотр посевов проводят через 5 дней, второй - через 10 дней. На пятые сутки можно наблюдать рост мицелиального гриба в виде войлочного комочка на дне и поверхностной пленки. Грибницу пересевают на дифференциальную среду Чапека для определения рода и вида гриба. Если на 5 день рост гриба не отмечается, посевы выдерживают до 10 дней и при отсутствии роста результаты исследования регистрируют как отрицательные.

При посеве на три точки рост гриба в двух и трех точках определяется как диагностически значимый, в одной точке - случайный. При необходимости, возможен повторный посев.

Кровь

• Candida
• Cryptococcus
• Мицелиальные возбудители редко выявляются при исследовании крови за исключением Fusarium

Спинномозговая жидкость

• Candida
• Cryptococcus

Прочие биосубстраты

Моча

• Candida
• Cryptococcus

Материал из грудной,брюшной полости; синовиальная жидкость

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Стекловидное тело

• Candida
• Aspergillus

Эзофагит

• наличие характерных изменений при эзофагоскопии
• выявление гриба при культивировании биопсийного материала
• наличие псевдомицелия в окрашенных мазках или признаков инвазивного роста грибов в биопсийном материале

Пневмония

Пневмония, обусловленная Candida spp.

• остро возникшие инфильтративные изменения на рентгенограмме легких, совпадающих с клиническими проявлениями грибковой пневмонии
• выявление Candida spp. При культивировании материала из нижних отделов респираторного трата, полученного при трансторакальной биопсии, трансбронхиальной биопсии, открытий биопсии легкого или торокоскопически направленной биопсии
• выявление псевдомицелия в адекватно окрашенном биопсийном материале

Пневмония, обусловленная Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• выявление элементов грибов в тканях и положительная культура
• персестирующие или прогрессирующие инфильтраты в легких, резистентные к антибактериальной терапии
• выявление одного из указанных возбудителей при культивировании мокроты или БАЛ
• клинические признаки пневмонии (кашель, одышка, “плевральные” боли, хрипы, шум трения плевры)
• характерные изменения при рентгенографии или КТ легких:

- субплевральные инфильтративные, узелковые, остроугольные или кавернозные изменения

- симптом “ореола” при КТ легких

- прогрессирование инфильтративных изменений с образованием полостей и появлением симптома “серпа”

• отсутствие других возбудителей при культивировании БАЛ, которые могли бы вызвать представленные изменения легких

Синусит

• клинические и рентгенологические признаки острого синусита
• микроскопические и культуралъные признаки микоза при исследовании аспирата или биопсийного материала

Фунгемия

• Однократное выявление грибов при посеве крови в период подъема температуры тела > 38 ^оС

Эндофтальмит

• офтальмологические признаки эндофтальмита
• выявление возбудителя из глаза, крови или других очагов диссеминации

Абсцесс или остеомиелит

• рентгенографические/КТ/МРТ признаки остеомиелита
• выявление возбудителя в аспирате или биопсийном материале

Менингит

• определение изменений СМЖ, подтверждающих наличие воспаления, и выявление грибов при микроскопии СМЖ
• выявление грибов при посеве СМЖ или определение антигенов Cr.neoformans, Candida и Aspergillus в СМЖ

ВОЗБУДИТЕЛИ ДЕРМАТОМИКОЗОВ.

Microsporum canis Bodin

Синонимы: Sabouraudites canis, Microsporum lanosum, Microsporum felineum, Microsporum equineum. Совершенная форма: Arthroderma otac Mc Ginnis et al.

Характеристика: колонии пушистые серые, иногда желтовато-розовые, с концентрическими кругами. Зрелые культуры бывают мучнистыми, бугристыми в центре. Обратная сторона темно-коричневая, оранжевая. Выражена изменчивость культуры - описаны штаммы кожистые, складчатые, мозговидные, голые или покрытые редким воздушным мицелием. Мицелий септированный, бамбуковидный, 2-3 мкм в диаметре. Встречаются гребешки, короткие спирали. Характерные макроконидии длиной 40-90 мкм, веретенообразные с шиповатой двухконтурной стенкой состоят из 4-12 клеток. По ходу мицелия интеркалярные хламидоспоры. Микроконидии грушевидные, встречаются непостоянно. Культура часто подвержена плеоморфным изменениям.

Распространен повсеместно. Зооантропофильный гриб. Человек заражается от больных кошек, собак и от больного человека. Чаще болеют дети.

Заболевания: микроспория гладкой кожи, волосистой части головы, бороды. Волосы поражаются по типу мелко споровый эктотрикс, флуоресцируют в лучах Вуда.

Методы диагностики:

• Осмотр с помощью УФЛ (лампы Вуда)- яркая флуоресценция зеленовато-желтого цвета.
• Микроскопия волос и кожных чешуек из очагов поражения.
• Посев материала из очагов поражения.
• Определение чувствительности к антимикотическим препаратам при рецидивирующем течении и/или резистентности к стандартной антимикотической терапии.

Microsporum audouinii Gruby

Синонимы: Sabouraudites audouini. Trichophyton decalvans.

Характеристика: медленно растущие колонии беловато-серого, иногда рыжеватого оттенка. Колонии бархатистые, плоские, иногда радиально-складчатые с небольшим возвышением в центре. Обратная сторона розовато-коричневая. Мицелий септированный, изогнутый, часто ракетовидный. Хламидоспоры 5-7 мкм обычно интеркалярные. Макроконидии 2-10 клеточные, размеры 40-70 х 15-22 мкм, с гладкой или бородавчатой поверхностью, концевой фрагмент их заострен. Микроконидии удлиненные или грушевидные. Волосы поражаются по типу эктотрикс. В лучах Вуда не флюоресцируют.

Распространение: повсеместное. Одиночные заболевания наблюдаются и в России. Антропофильный гриб. Чаще поражает детей. Передается через общую одежду, расчески и т.п.

Заболевания: микроспория волосистой части головы, реже гладкой кожи туловища.

Методы диагностики: те же, что и при исследовании Microsporum canis.

Microsporum ferrugineum Ota

Синоним: Trichophyton ferrugineum.

Характеристика: колонии полиморфные, кожистые, слегка куполообразные с радиальными складками. Обратная сторона колонии оранжевая, коричнево-оранжевая ("ржавая"). Мицелий ветвистый, редко септированный, иногда с гребешковыми органами. В зрелых культурах мицелий широкий с крупными интеркалярными и концевыми хламидоспорами (до 30 мкм в диаметре). Макроконидии и микроконидии наблюдаются редко.

Распространение: антропофильный гриб - страны Африки, Азии, Восточной Европы..

Заболевания: микроспория волосистой части головы. Волосы поражаются по типу мелко споровой эктотрикс. Флюоресцирует в лучах Вуда/

Методы диагностики: те же, что и при исследовании Microsporum canis.

Scedosporium apiospermum

Синонимы: Рeudallescheria boydii, Allescheria boydii, Glenospora boydii, Indiella americana, Monosporium apiospermum, Acremoniella lutzii

Характеристика: при температуре от 30 до 37 С растет в виде белых колоний, позже серых или дымчато-зеленых, в зрелых колониях полосы цветов чередуются. Мицелий широкий, септированный, ветвящийся. Большое количество эллипсоидных грушевидных конидий, расположенных на коротких прямых конидиефорах. Иногда видны узелковые образования на конидиеносцах. Совершенная форма образует перитеции с асками и аскоспорами. В очагах поражения у человека видны белые или желтоватые гранулы (до 2 мм) в форме "ежевики", состоящие из ветвящихся гифов мицелия и крупных хламидоспор, располагающихся в виде мозаики. При окраске гранул гематоксилином и эозином центральные гифы не окрашены, диаметром до 5 мкм, по периферии крупные (20 мкм) раздутые клетки, цемент отсутствует. Периферия гранул окрашена эозином в красный цвет. Гриб утилизирует крахмал, желатину, глюкозу; не утилизирует галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу.

Распространение: обычно сапрофитирует на корнеплодах, кустах бирючины, в сточных водах. Человек инфицируется через поврежденную кожу, особенно при хождении босиком. Встречается в тропическом и субтропическом климате (часто в Индии). Однако имеются многочисленные случаи и в странах с умеренным климатом, в т.ч. и в странах СНГ.

Заболевания: является возбудителем мицетомы (белая форма). Описаны также поражения легких, роговицы глаз, мочевого пузыря, головного мозга. При ВИЧ-инфекции развиваются генерализованные формы с поражением многих внутренних органов.

Методы диагностики:

• Получение материала из очагов поражения.
• Микроскопия и посев мокроты, бронхоальвеолярного лаважа, спинномозговой жидкости.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения.

Acremonium kiliense Gruetz

Cинонимы: Cephalosporium falciforme, Cephalosporium recifei

Характеристика: Оптимальная температура роста 30 ^оС. Колонии белые, позже пушистые с фиолетовым диффузным пигментом. Мицелий имеет искривленные септы. Конидии в виде головки на простом конидиеносце. Гриб обладает слабым протеолизом /разлагает желатину/. Не утилизирует крахмал, глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу.

В очагах поражения у человека формируются гранулы (микро колонии гриба). Гранулы белые, мягкие, диаметром 1,5 мм. Центральные части гранул гематоксилином и эозином не окрашиваются и состоят из гиалинового мицелия /4 мкм/. По периферии - раздутые клетки до 12 мкм.

Распространение: Различные виды акремониум широко распространены в окружающей среде.

Заболевание: Мицетомы. Диагноз опирается на триаду: опухоль, дренирование синусы и наличие гранул. В последнее десятилетие отмечены диссеминированные инфекции у нейтропенических больных. Входными воротами в этих случаях, возможно, является желудочно-кишечный тракт.

Методы диагностики:

• Получение, микроскопия и посев материала из очагов поражения (отделяемое из свищей, биопсии).
• Гистологическое исследование биопсийного материала /поиск гранул-друз гриба в участках нагноения.
• В случаях предположения диссеминированной инфекции посев крови.

Fusarium spp.

Например: Fusarium moniliforme.

Характеристика: Колонии богаты воздушным мицелием, часто продуцируют розовый, пурпурный или желтый пигмент. Конидиеофоры простые или группируются в Sporodochia (подушкообразная строма, покрытая конидиефорами), мицелий тонкий и толстый с нерегулярным ветвлением. Фиалиды появляются непосредственно от вегетативных рифов или от конидеофор, расположенных

дистально; конидии зарождаются простыми или в виде "мячиков"; макроконидии с одной или более септами, гиалиновые, цилиндрические или, как правило, в виде полумесяца; микроконидии мелкие, овоидные до короткоцилиндричесих, иногда искривленные, несептированные или с одной септой.

Распространение: встречаются повсеместно на различных растениях, зернах злаков, овощах, в почве, на некоторых насекомых.

Заболевания: фузариум может быть причиной кератита, онихомикоза, мицетомы, перитонита у пациентов, получавших перитонеальный диализ, у ожоговых больных под струпом. В последние годы всё чаще обнаруживаются диссеминированные формы у больных с нейтропенией различного генеза. Следует выделить две формы диссеминированного фузариоза. Во-первых, множественные кожные поражения, похожие на ecthymagaurenosum. Во-вторых, фунгемии, обусловленные вазотропностью возбудителя. Важным аспектом при фузариозе является наличие у гриба микотоксина, выделяющегося в ткани и утяжеляющего ход инфекции.

Методы диагностики:

• Получение материала из очагов поражения.
• Микроскопия и посев крови, материала из очагов поражения.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения.
• Посев материала из пораженных ногтей при наличии онихомикоза.

5.4 ВОЗБУДИТЕЛИ ГЛУБОКИХ МИКОЗОВ
(первично-патогенные микромицеты)

Coccidioides immitis Rixford a. Gilchrist

Характеристика: диморфный гриб. При культивировании характерны два типа культур - мицелиальная (при 28 С) и дрожжеподобная (при 37 С). Мицелиальные колонии плоские, вначале бархатисто-пушистые, позже мучнистые, серовато-белого цвета, с желтовато-коричневой обратной стороной. Поверхность колонии иногда концентрически исчерчена. При микроскопии выявляется септированный, ветвящийся мицелий 2-4 мкм в диаметре, многочисленные прямоугольные артроспоры 3-4 мкм в диаметре. Непостоянно округлые хламидоспоры. Дрожжеподобные колонии кожистые, складчатые, воздушный мицелий отсутствует. При микроскопии преобладают дрожжевые клетки размером 3-4 х 5-7 мкм, иногда короткий септированный мицелий. В пораженных тканях образуются толстостенные сферулы диаметром от 10 до 200 мкм, заполненные эндоспорами. После разрыва созревших сферул эндоспоры, попавшие в ткани, трансформируются в промежуточные формы - трофоциты - округлые клетки от 10 до 20 и более мкм, содержащие центральную вакуоль, заполненную гликогеном. Трофоциты трансформируются в сферулы, заполненные эндоспорами.

Распространение: эндемичен для США (Калифорния), Северных областей Мексики, Гватемалы, Венесуэлы, Аргентины. Заболевают люди, грызуны, собаки, домашний скот. Источником инфекции является почва, из которой артроспоры гриба попадают в организм ингаляционным путем. Неоднократно описаны случаи заболевания работников лабораторий. Кокцидиоидоз отнесен к группе особо опасных инфекций.

Заболевания: кокцидиоидоз встречается в острой и хронической формах. Острая весьма напоминает гриппозные поражения верхних дыхательных путей и легких и заканчивается, как правило, за 2-3 недели выздоровлением. Хроническая форма напоминает туберкулез и длится годами. Постоянно поражаются легкие, эндокард, селезенка, кости. Генерализация процесса часто сопровождается поражением головного мозга. Описаны кожные поражения в виде Erythema nodosum и Erythema multiforme. У не леченных больных заболевание заканчивается летально. Патоморфологически характеризуется чередованием гранулом и микроабсцессов в зависимости от стадии развития гриба.

Методы диагностики:

• Микроскопия и посев мокроты, гноя, суставной жидкости, центрифугата спинномозговой жидкости (при подозрении на менингит), другого материала из очагов поражения при 25 и 37 ^оС.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения при окраске PAS-методом, импрегнации по методу Гомори-Грокотт.
• Кожная проба с кокцидиоидином или сферулином.
• Определение IgМ к Coccidioides immitis в сыворотке крови методом латекс-агглютинации, преципитации или иммунодиффузии.
• Определение IgG к Coccidioides immitis в сыворотке крови методом фиксации комплемента или иммунодиффузии.
• Определение антител к Coccidioides immitis в цереброспинальной жидкости при подозрении на менингит.

Histoplasma capsulatum Darling

Cинонимы: Chyptococcus capsulatus, Histoplasma pyriforme Dodge, Posadasia capsulata, Torulopsis capsulatus. Совершенная форма: Ajellomyces capsulatus (Kwon-Chung) Mc Ginnis.

Распространение: Эндемичен для стран Северной, Центральной и Южной Америки. Описаны случаи гистоплазмоза в Италии, Швейцарии, Бельгии. В странах СНГ достоверные случаи гистоплазмоза - "завозные". Описаны заболевания среди работников лабораторий.

Заболевания: Гистоплазмоз. Так как "входными воротами" инфекции являются дыхательные пути, первичные очаги поражения наблюдаются в легких, с вовлечением региональных лимфатических узлов и возможной генерализацией процесса. Первичная легочная инфекция имеет тенденцию к самоизлечению. Однако, возможны рецидивы. Грануломатозные очаги при гистоплазмозе склонны к кальцификации, где длительное время, иногда несколько лет, сохраняется возбудитель. Довольно часто встречаются поражения кожи и слизистых. Они носят грануломатозный характер и располагаются около рта, на языке, в носу и глотке. Генерализованная форма характеризуется, прежде всего, поражением печени и селезенки с метастазами в желудочно-кишечный тракт, иногда в мозг, в органы зрения. Возбудитель размножается в клетках макрофагальной системы. Генерализованный гистоплазмоз является ВИЧ-ассоциированной инфекцией.

Методы диагностики:

• Микроскопия и посев крови, мокроты, костного мозга, гноя, другого материала из очагов поражении при 25 ^оС и 37°С.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения при импрегнации по методу Гомори-Грокотт, PAS-методом, методом Бауэра.
• Определение антигена Histoplasma capsulatum в крови, моче, спинномозговой жидкости и бронхоальвеолярном лаваже радиоиммунным методом или ELISA-тестом.
• Определение антител к Histoplasma capsulatum методом иммунодиффузии или фиксации комплемента.

Histoplasma capsulatum var. duboisii

Синоним: Histoplasma duboisii Vanbreuseghem

Колонии растут при 30 - 37 С. Вначале беловатого цвета, гладкие, позже - сероватые, затем приобретают порошкообразную поверхность. Среда окрашивается в каштановый цвет. Мицелий септированный, ветвистый. Микроконидии размером 2,5 мкм, на тонком стебельке. Макроконидии сферические размером 13 - 18 мкм, толстостенные, гладкие, реже бугристые, содержат включения жира. Тканевые формы представлены крупными почкующимися клетками диаметром 10 -13 мкм, с толстыми стенками, в цитоплазме - включения жира. Часто образуются цепочки почкующихся клеток. В очаге поражения тканевые формы окружены гранулемой, богатой гигантскими многоядерными клетками, содержащими паразита.

Распространение: эндемичен, для Западной и Центральной Африки. Заболевают люди и обезьяны. Неоднократно описаны завозные случаи африканского гистоплазмоза в странах Европы.

Заболевания: африканский гистоплазмоз. Поражает кожу, кости, суставы, регионарные лимфоузлы, органы пищеварения и легкие. При ВИЧ-инфекции африканский гистоплазмоз протекает более злокачественно с образованием генерализованных форм.

Методы диагностики:

• Микроскопия и посев крови, мокроты, биоптатов при 37°С.
• Гистологическое исследование биопсийного материала при импрегнации по методу Гомори-Грокотт, PAS-методом.

Blastomyces dermatitidis ( Gilchrist and Stokes ).

Синонимы: Blastomycoidis dermatitidis, Cryptococcus dermatitides, Glenospora brevis, Mycoderma dermatitis. Совершенная форма: A jellomyces dermatitidis

Характеристика: диморфный гриб. При 24 С вырастают серовато-белые, рыхлые, бархатисто-пушистые колонии, их обратная сторона имеет цвет слоновой кости, мицелий септированный, короткие конидиофоры, конидии округлые, 3 - 5 мкм в диаметре. Хламидоспоры округлые, овальные 7-18 мкм. При 37 С вырастают беловатые, блестящие сметанообразные колонии, состоящие из округлых почкующихся клеток от 3 до 16 мкм. Тканевые формы представлены круглыми униполярно почкующимися клетками (8 - 25 мкм в диаметре), с толстой двухконтурной стенкой. Возбудитель, как правило, обнаруживается в гнойном распаде и внутри гигантских многоядерных клеток.

Распространение: эндемичен для Северной и Центральной Америки. Спорадически возникает в странах Африки (Тунис). Обнаружен в почве, в пыли.

Заболевания: Северо-Американский бластомикоз (болезнь Джилкрайста). Встречается в двух формах - кожной и висцеральной. Кожная проявляется папуло-пустулезными изъязвлениям и бородавчатыми папилломатозными разрастаниями по периферии очагов. Течение хроническое. Висцеральный бластомикоз - хроническая легочная инфекция, клинически похожая на туберкулез. Реже встречается диссеминация с поражением ЦНС, печени, селезенки и предстательной железы. Отмечается высокая летальность.

Методы диагностики:

• Микроскопия и посев гноя, мокроты, бронхоальвеолярного лаважа, мочи при 37°С.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения при окраске PAS-методом и импрегнации по методу Гомори-Грокотт.
• Определение антител к Blastomycoidis dermatitidis в сыворотке крови методом иммунодиффузии.

Paracoccidioides brasiliense ( Conant and Howell )

Синонимы: Blastomyces brasiliensis, Lutziomyces histiosporocellularis, Mycoderma вrasiliense

Характеристика: диморфный гриб. При 25 С месячные культуры представляются складчатыми, в центре покрыты беловато-серым, позднее желтеющим пушком. Мицелий септированный, 4-5 мкм в диаметре, конидии размером 3-5 мкм овальные на коротких конидиофорах. Хламидоспоры крупные размером 30-40 мкм. При выращивании при 37 С на средах, богатых белками, колонии гладкие или церебриформные, состоят из овальных или округлых клеток размером 30-60 мкм, обычно с множественными почками. Тканевые формы в виде крупных округлых клеток от 10-60 мкм, с выраженными двойными стенками и множеством почек по периферии.

Распространение: эндемичен для Южной, Центральной Америки и Мексики. Обнаружены в почве и на растениях.

Заболевания: Южноамериканский бластомикоз (паракокцидиодная гранулома). Заболевание характеризуется грануломатозными очагами на коже и слизистых полости рта и носа. Поражаются лимфатические узлы, желудочно-кишечный тракт и легкие.

Генерализованная форма проявляется поражениями желудочно-кишечного тракта, гепато- и спленомегалией, асцитом. В 80% поражаются легкие в области средостения, у корней легких. Поражения костей обнаруживаются в 25% случаев. Прогноз тяжелый, часто летальный.

Методы диагностики:

• Микроскопия и посев мокроты, гноя, материала из грануломатозных поражений при 25 ^оС и 37°С.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения при окраске PAS-методом и импрегнации по методу Гомори-Грокотт.
• Определение антител к Paracoccidioides brasiliense в сыворотке крови методом фиксации комплемента или ELISA-тестом.

Sporothrix schenckii ( Hectoen and Parkins )

Синонимы: Sporotrichum schenckii, Sporotrichum beurmannii.

Характеристика: диморфный гриб. Поверхность колонии при комнатной температуре бархатисто-ворсистая или мучнистая. По цвету культуры белые, серовато-желтые, коричневые, ржавого оттенка, реже зеленоватые. Поверхность складчатая или бугристая. Мицелий септированный, ветвистый, диаметром от 1-2 до 6-8 мкм. Мелкие овальные, веретенообразные конидии располагаются группами по бокам мицелия. При температуре 37 С образуются дрожжевые колонии, из округлых или яйцевидных клеток с биполярным и множественным почкованием. Тканевые формы в патологическом материале в виде веретенообразных или булавовидных образований и астероидных телец, окруженных распадающимися нейтрофильными лейкоцитами.

Распространение: повсеместно. Гриб обнаруживается на растениях, деревьях. Человек инфицируется при травме, уколом шипов растений и т.п. Описаны вспышки споротрихоза среди рабочих шахт, где гриб обсеменяет деревянные крепления.

Заболевания: споротрихоз - язвенные поражения кожи и слизистых, лимфадениты. Реже поражаются легкие, органы пищеварения, суставы и мышцы. Септикопиемические формы заканчиваются нередко смертельно.

Методы диагностики:

• Получение материала из очагов поражения.
• Микроскопия при окраске PAS-методом и посев гнойного отделяемого, биопсийного материала, крови.
• Гистологическое исследование биопсийного материала.

Penicillium marneffei Segretan, Cappohi, Sureau

Характеристика: диморфный гриб, дающий мицелиальные и дрожжевые колонии при различных условиях развития. При 25 С развивается мицелиальная форма, соответствующая пенициллам. Молодая колония - пушистая, розовая, в центре светло-коричневая с зеленоватой периферией. Воздушный мицелий короткий, колония исчерчена бороздками, исходящими из центра. Обратная сторона колонии красновато-розоватая, пигмент диффундирует в субстрат. Конидиеносцы в виде кисточки с метулами, стеригмами и цепочками округлых конидий с гладкими стенками; встречаются клетки в виде прямоугольных артроспор и спиралей. При 37 С колония дрожжевой консистенции, церебриформная, бороздчатая, светло-коричневая, мягкая, при старении крошковатая. При микроскопии обнаруживаются округлые и овальные дрожжевые клетки около 3 мкм в диаметре, иногда встречаются гифальные элементы, формирующие артроспоры.

Распространение повсеместное, но чаще встречается в странах Юго-Восточной Азии. Поражает человека, бамбуковых крыс, мышей и домашних животных.

Заболевания: у грызунов генерализованные поражения ретикуло-эндотелиальной системы, поражение печени. У человека описаны случаи кожных и подкожных поражений с вовлечением региональных лимфатических узлов. При ВИЧ-инфекции развиваются генерализованные формы, в 80% поражения кожи напоминают контагиозный моллюск.

Методы диагностики:

• Микроскопия окрашенных поРайту, PAS-методом мазков гноя,мокроты, бронхоальвеолярного лаважа, костного мозга, материала из очагов поражения кожи, биоптатов лимфатических узлов.
• Посев гноя, мокроты, бронхоальвеолярного лаважа, костного мозга, биопсийного материала при 25 и 37 ^оС.
• Гистологическое исследование биопсийного материала ив очагов поражения.
• Определение антител к Penicillium marneffei сыворотке крови ELISA-тестом.

Chrysosporium var.parvum, var.crescens (Carmichel, 1962)

Синонимы: Haplosporium parvum, Emmonsia parva, Emmonsia crescens.

Характеристика: Диморфный гриб. На питательных средах при 25 ^оС растет первоначально в виде округлых бесцветных колоний, которые затем покрываются белым воздушным мицелием. Колонии за 2недели достигают 5 см в диаметре. При микроскопии обнаруживается септированный и ветвящийся мицелий, диаметром от 0,5 до 2 мкм. Алейроспоры продуцируются на конидиофоpax, которые отходят под прямым углом от вегетативного мицелия. Споры сферические, слегка сплюснутые /3 -3,5 мкм/. От первичных алейроспор могут формироваться вторичные споры.

Если вариант pavumпоместить на среду при 40 ^оС, то мицелий дегенерирует, а споры сохраняются и увеличиваются в размерах до 15-25 мкм, но не вырастают долее 40 мкм, с толщиной стенок до 2 мкм. Они остаются одноядерными и не реплицируются.

Вар. crescens при 40 ^оС преобразуется 8 крупные адиаспоры от 200 до 700 мкм в диаметре, с тещиной стенок до 70 мкм и содержит сотни ядер.

Если адиаспоры вновь инкубировать при 25 ^оС, то адиаспоры вновь дадут множественные ростковые трубочки, выходящие из стенок адиаспоры и формирующие гифы мицелия.

Распространение: Гриб поражает большое количество животных в различных странах мира. Заболевают мыши, крысы, кроты, кролики и другие грызуны. Обнаружено заболевание у плотоядных - куницы, ласки, норки. Первый случай заболевания человека описан в 1964 роду Doby-Dubois. Источником заражение является земля. Адиаспиромикоз у человека описан в России, во Франции, в Чехословакии, в Бразилии, Гондурасе, Гватемале, Венесуэле.

Заболевание: Адиаспиромикоз. Поражение легких. В большинстве случаев у человека диагноз ставится как случайная находка при оперативном вмешательстве по другим поводам. Длительное время у больного не определяется видимых клинических проявлен