Методы лабораторной диагностики. Цель исследования — обнаружение и идентификация токсина

Цель исследования — обнаружение и идентификация токсина, выделение возбудителя является второстепенной задачей. Исследуемым материалом являются остатки пищевых продуктов, материал, полученный от больного (кровь, испражнения, моча, промывные воды желудка, рвотные массы и др.). Исследование проводят одновременно в двух направлениях: обнаружение ботулотоксина (за искл. испражнений) и выделение возбудителя (за искл. крови). Ботулотоксин определяют в биопробе на мышах или с использованием серологических реакций (ИФА, РПГА). Определение типа токсина крайне важно для назначения специфической антитоксической терапии. Для проведения биопробы отбирают партию из 5 животных. Первое заражают исследуемым материалом, а остальным вводят смесь исследуемого материала и 2 мл 200 МЕ определенной антитоксической сыворотки А, В, С и Е. При наличии в материале токсина животные умирают, а выживает животное, получившее антисыворотку, нейтрализовавшую токсин соответствующего типа. Для идентификации токсинов с помощью РПГА используют антительный диагностикум (эритроциты, сенсибилизированные специфическими антитоксинами).

Банки с консервированными продуктами выдерживают в термостате 10-12 суток, растирают, центрифугируют: в надосадочной жидкости определяют наличие токсина, а в осадке — возбудителя. Методы получения культур возбудителя ботулизма аналогичны методикам, используемым при других клостридиозах (табл.9).

 

 

Таблица 9. Схема бактериологического метода диагностики ботулизма

I этап	1 день	Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (среду накопления) или сразу на сахарно-кровяной агар и высокий столбик сахарного МПА, инкубация в анаэробных условиях 37°С
	2 день	1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза Высокий столбик сахарного МПА: в виде комочков ваты или чечевицы 2. Пересев на среду Китта-Тароцци с целью выделения чистой культуры
II этап	3 день	1. Идентификация чистой культуры по: · морфологическим и тинкториальным свойствам (крупные грам+ палочки с субтерминально расположенной спорой — «теннисные ракетки») · культуральным (строгие анаэробы, на сахарно-кровяном агаре неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза; в высоком столбике сахарного МПА колонии в виде комочков ваты или чечевицы · токсигенности и типу токсина (используют биопробу на мышах с поливалентной антитоксической сывороткой и для определения типа токсина с моновалентными сыворотками; ИФА и РПГА для определения типа токсина)

Лечение и профилактика

Наиболее эффективно раннее применение соответствующей антитоксической сыворотки. До установления типа токсина используется поливалентная (А, В, С, Е) лошадиная (гетерологичная) антисыворотка, которую вводят по методу Безредко. После лабораторного определения типа токсина вводят антисыворотку соответствующего типа. Одновременно проводят антибактериальную (пенициллины и др.) и симптоматическую терапию.

Для специфической профилактики используют ботулинический полианатоксин, входящий в состав комплексной вакцины для профилактики анаэробных инфекций. Однако в силу спорадичности данного заболевания иммунопрофилактика ботулизма не нашла широкого применения.

В основе профилактики ботулизма лежит неукоснительное соблюдение санитарно-гигиенических правил при производстве пищевых продуктов. При производстве консервированных продуктов необходимо соблюдать условия стерилизации консервов и их хранения, исключающие накопление токсина, а также использование ингибиторов (нитриты, органические кислоты).

Неспорообразующие анаэробы

Неспорообразующие анаэробные бактерии имеющие отношение к заболеваниям человека представлены грамположительными бактериями родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Actinomyces; грамнегативными родов Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella и др. Некоторые виды потенциально способны вызывать патологические процессы, поэтому они называются условно-патогенными. Инфекции, вызываемые анаэробными бактериями, носят эндогенный характер, и их наиболее часто вызывают ассоциации нескольких видов бактерий. Факторы, предрасполагающие к развитию подобных поражений, включают нарушения целостности кожных покровов и СО, травмы, хирургические вмешательства, нарушение правил проведения внутривенных вливаний и т.п.