Гемостатические лекарственные средства

 

Лекарственная смесь «Тхаший-тханг» состоит из равных весовых количеств: травы горца птичьего, горечавки крупнолистной, зубчатки поздней и корней опосмы песчаной. К этому составу добавляется желчь медведя, которую можно заменить желчью крупных домашних животных [БАЖ, л. 9-10].

Для приготовления все составные части берут в необходимых количествах и тщательно измельчают в порошок до размера частиц приблизительно 0,5 мм [Найдакова, 1979].

В практике тибетской медицины смесь назначали один раз в день по 0,5 г. рабочая доза лекарственной смеси, выбранная экспериментально, составляла 1800 мг/кг. Согласно рекомендациям БАЖ смесь лекарственных растений кипятили 3 мин. В полученный отвар добавляли необходимое количество желчи. Эффективность лекарственной смеси «Тхаший-тханг» была выявлена при скрининге. Кроме того, достоинство «Тхаший-тханг» " в том, что в ее составе отсутствует импортное сырье, и в простоте приготовления. В тибетской медицине эта лекарственная смесь рекомендована при кровотечениях разной этиологии: «...из носа, истечении (крови) из легких, дефектах кровеносных сосудов» [БАЖ, л. 9-10].

Качественный химический анализ лекарственной смеси «Тхаший-тханг»¹ показал содержание в ней разнообразных биологически активных веществ: флавоноиды (+), дубильные вещества (++), алкалоиды (++), антрахиноны (+), кумарины (+).

По показаниям к применению каждого из отдельных компонентов, согласно данным трактатов, трое являются собственно кровоостанавливающими (горец птичий, оносма песчаная и желчь). Присутствие горечавки крупнолистной и зубчатки поздней, по-видимому, направлено на устранение патологических явлений, сопутствующих кровотечениям (табл. 28).

Рассмотрим потенциальные возможности обеспечения гемостатической активности отдельных компонентов смеси «Тхаший-тханг». Для этого приведем имеющиеся литературные данные о химическом составе каждого из названных ингредиентов и фармакологической их активности.

В листьях горца птичьего содержится флавоновый гликозид авикулярин ["Ironchet, Vuilleman, 19641. Кроме того, по сведениям Е. С. Bate-Smith [1962] и J. Tronchet, В. Vuilleman [1964], в траве названного растения содержатся флавоноиды: кверцетин, кемпферол. мирепетин, дельфинидин. Из стеблей выделены кумарины скополетин и умбелиферон. Содержание флавоноидов достигает 9,1-13,4 мг/г сухой массы растения; эфирного масла - следы; каротина - 0,4 мг/г, аскорбиновой кислоты – 1,2, сахара - до 25 мг/г [Фруентов, 1972; Турова, 1974; Минаева, 1978]. Установлено, что основным действующим веществом, повышающим скорость свертывания крови, является флавоновый гликозид авикулярин [Пакудина, Садыков, 1970]. Различные вытяжки из травы горца птичьего повышают свертывающую способность крови и обладают мочегонным действием [Алуф, Распопова, 1945];

Свойства компонентов смеси «ТхашиЙ-тханг»

Сухой экстракт зубчатки поздней, используемый для экспериментальной фармакотерапии крыс с тетрахлорметановым гепатитом в дозе 0,3 г/кг, увеличивал секрецию желчи, улучшал белковый и жировой обмен и оказывал мембранно-стабилизирующее действие на гепатоциты [Гармаев, Николаев, 1978; Николаев и др., 1978]..Внутривенное введение кроликам экстракта в той же дозе через 30 мин приводило к сокращению времени рекалъцификаци и плазмы на 48 % и повышению толерантности плазмы к гепарину на 43 %. Через 6 ч эти показатели отличались от таковых в контроле на 22 % [Хапкин, Гармаев, 1981].

Показано, что для настоя зубчатки поздней ЛДбо при внутрибрюшинном и пероральном пути введения соответственно составила 15,3 и 18,7 г/кг массы [Насыров, 1971].

Третьим компонентом лекарственной смеси «Тхаший-тханг» является горечавка крупнолистная. В надземной части этого вида обнаружены флавоноиды, содержание которых в одном грамме сухого измельченного сырья зависит от фазы вегетации и колеблется от 4,9 до 10,6 мг [Галинская, 1978; Минаева, 1978]. Методом количественной хроматографии показано, что флавоноидные соединения в надземной части горечавки представлены гликозидированными формами [Галинская, 1978].

Б.А. Шухободский [1961] отметил значительное содержание алкалоидов в надземной части горечавки крупнолистной, в связи с этим рекомендовано дальнейшее ее исследование. Из надземной части этого растения выделен алкалоид генциашга [Willaman, Hui-Lmdli, 1970], присутствующий в большинстве горечавковых [Никитина, 1967; Садритдигнов, 1971; Belleman Jacot-Guillarmod, 1973].

Фармакологическое изучение горечавки крупнолистной показало, что она может применяться в качестве заменителя горечавки желтой - при заболеваниях органов системы пищеварения [Галинская, Гельман, 1975; Галинская, 1978]. Результаты фармакологических исследований Ф. Садритдинова [1971] показали, что алкалоиды гепцианип, генциананип, генцианамин и генцианадин малотоксичны при длительном применении. По заключению А. И. Шретера [1975]. перспективны дальнейшие исследования горечавки крупнолистной как кровоостанавливающего средства.

Четвертым компонентом тибетской лекарственной смеси являются корни оносмы песчаной из семейства бурачпиковых. В литературе имеются сведения о том, что из многих видов этого семейства выделены алкалоиды, относящиеся к группе гелиотрндапа - производного метилпярролизидина [Гаммерман, Гром, 1976]. Из корней многих видов опосмы, в том числе опосмы песчаной, выделено несколько красящих веществ, относящихся к нафто-хинонам (шпконин, анхузин, адкапил, алкарот) и обладающих биологической активностью [Романова и др., 1969; Тареева и др., 1969; Karrer, 1959]. В корнях некоторых видов оносмы обнаружены сапонины [Захаров, Боряев, 1968].

Н.И. Николаева [1947] показала на больных, что красящие вещества синтетического происхождения: метиленовый синий, генцианвиолет и конгорот — обладают тромбоцптопоэтической активностью. Р.К. Алиев [I960] подтвердил это действие на красящих веществах растений, обладающих кровоостанавливающим действием. Многие виды оносмы находят применение в пищевой и парфюмерной промышленности [Губанов, Либизов, 1970]. Имеются сведения об использовании корней видов оносмы как слабительных и противовоспалительных средств; в Индии их применяют при лечении бронхиальной астмы, лепры, сердечной аритмии [Kirtikar, Basu, 1934]. В тибетской медицине корни оносмы разных видов, арнебии, воробейника краснокорневого, принадлежащих к одному семейству бурачниковых, упоминаются в составе кровоостанавливающих прописей [БАЖ, л. 9-10].

Пятым компонентом кровоостанавливающей смеси является желчь. Исследования по выяснению ее влияния на функции организма продолжаются [Физер, Физер, 1964; Ганиткевич, 1980].

В химический состав желчи разных видов животных входят разные желчные кислоты, из которых доминирующими являются хенодезоксихолевая и литохолевая. Вместе с тем в свиной желчи содержится гиодезоксихолевая кислота, причем ее содержание составляет до 40 % от общей суммы желчных кислот. Если у многих видов животных кетокислоты содержатся в следовых количествах, то в свиной желчи их концентрация достигает 20 % от суммарного количества желчных кислот. Кроме того, свиная желчь содержит гиохолевую триокспкислоту.

Известно, что желчные кислоты относятся к очень важному классу природных соединений - стероидам. Эту группу биологически активных веществ кроме желчных кислот представляют гормоны, сапогенины, многочисленные алкалоиды, сердечные гликозиды и другие вещества. В экспериментах показано, что желчь в малых дозах ускоряет свертывание крови [Ганиткевич, 1980].

Наши эксперименты выполнены на 455 крысах-самцах массой 150-170 г и на 10 беспородных собаках, содержащихся на стандартном пищевом рационе вивария. В каждой серии экспериментов в подопытную группу набирали от 6 до 16 животных.

Для характеристики функционального состояния свертывающей системы крови использовались следующие методики: время рекальцификации плазмы [Bergerhof, Roka, 'I 1954]; толерантность плазмы к гепарину [Sigg, 1952]; потребление протромбина по М.А. Котовщиковой, 3.Д. Федоровой [1961]; протромбиновый индекс [Quick, 1953]; в модификации В.Н. Туголукова [1953]; активность факторов VIII [Bounameaux, 1957] и XIII [Балуда и др., 1965]; концентрация фибриногена [Апдреенко, 1979]; тромбиновое время [Сирмаи, 1953].

Гемокоагуляцию цельной крови изучали на отечественном электрокоагулографе Н-333, на котором снимали показатели 7, T_z и Т, соответственно характеризовавшие время образования активного тромбопластина, тромбина и фибрянового сгустка [Вайтмахер и др., 1969].

Исследование сосудисто-тромбоцитарного гемостаза включало следующие показатели: количество тромбоцитов периферической крови [Петере, 1976]; длительность кровотечения [Сушкевич и др., 1969]; адгезию кровяных пластинок [Moolten, Woman, 1948], в модификации Т. А. Одесской и др. [1971].

- Забор крови для исследования производили у крыс, фиксированных к операционному столику, из яремной а бедренной вен без наркоза. Костно-мозговой пунктат брали из бедренных костей. В качестве антикоагулянта in vitro использовали 3,8%-вый раствор лимонно-кислого натрия в соотношении 1:9. У каждого животного одномоментно забирали 2,5 - 3 мл крови. Общая схема эксперимента представлена в табл. 29.

Исследование фармакологической активности отвара лекарственной смеси «Тхаший-тханг» и ее компонентов на проницаемость обменных микрососудов брыжейки крыс проведено с применением метода «меченых» сосудов [Горизонтова и др., 1975]. При этом очищенную тушь «Флора», г. Таллин], по 0,2 мл/100 г массы животного, вводили внутривенно и 0,1 %-ный раствор гистамина гидрохлорида по 0,3 мл/100 г массы - внутрибрюшинно через 2 ч после введения отваров полной смеси и ее компонентов.

Серия экспериментов на интактных животных проведена для выявления точек фармакологического воздействия отвара на систему гемостаза. В предварительных экспериментах выяснено, что максимальное действие отвара лекарственной смеси «Тхаший-тханг» проявлялось через 2 ч:, продолжительность действия отвара сохранялась в течение 28 ч. Поэтому плазменную коагуляцию и показатели сосудисто-тромбоцитарного гемостаза изучали через 2 ч и спустя 7 сут. после введения отвара лекарственной смеси у крыс и собак.

В этой же серии экспериментов было предпринято исследование тромбоцитопоэтической активности донорской сыворотки крови животных, получавших отвар многокомпонентной лекарственной смеси в течение 5 дней. Использовался биологический метод определения тромбоцитопоэтической активности сыворотки крови [Баранов, 1966, 1971; Schulman, Adildgaard et al., 1965], сущность которого заключается в оценке количества прироста тромбоцитов у животных-реципиентов после внутрибрюшинного введения им 1 мл/100 г донорской сыворотки от животных, получавших отвар «Тхаший-тханг». Количество тромбоцитов изучалось через 1, 3 и 6 сут после введения интактным крысам донорской сыворотки.

При изучении мегакариоцитограммы исследовали тромбоцитообразующую функцию мегакариоцитов, разделяя их на функционирующие и нефункционирующие формы. Исследование производили через 3 сут от начала эксперимента. Описание мегакариоцитарного ростка производили в соответствии с классификацией И.А. Кассирского, Н.Г. Алексеева [1970] и Sh. Ebbe [1968], согласно которой морфологически идентифицируемые мегакариоциты в костном мозге подразделяются на четыре типа клеток, представляющих собой последовательные стадии созревания: мегакарпоцитобласты, мегакариоциты (базофильные, полихроматофильные, оксифилъные), метамегакариоциты, свободные ядра. Учитывались также функционально активные и неактивные формы клеток [Пиксанов, Елизарова, 1969].

Одна из основных задач настоящего исследования состояла в изучении возможностей использования препа-

Таблица 29

 

Характеристика методов я условий эксперимента

Исследование фармакологической активности отвара полной смеси и ее компонентов

Исследование проницаемости сосудистой стенки

Исследование гемокоагулящщ у ин-тактиых животных

Коагулография

Исследование сосудисто-тромбоци-тарного гемостаза у интактных животных

Исследование тромбоцитопозтпческой активности сыворотки кропи, мс-гакариоцитограммы и тромбпцитоот-делшощей функции мсгакариоцпгов

Общепргшятые

Метод «меченых» сосудов

Время рекалъцификации плазмы, толераптпость плазмы к гепарину, потребление про-тромбина, протромбияовый ппдокс, активность фактором VIII и XIII, концентрация фибриногена, тромбиноше время

Коагулограф Н-333

Подсчет тромбоцитов в каморе Горяева, определение длительности кровотечении и объема теряемой крови

Подсчет тромбоцитов через определенные промежутки времени после введения сыворотки

Исследование мегакарпоцитограммы и морфометрия мигакариоцитов на мазках костного мозга подсчитывалось способом фазово-контрастной микроскопии крови до и после пропускания ее через фильтр. Количество адгезированных кровяных пластинок выражалось в процентах.

Для более полного представления о функции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза в условиях данного эксперимента исследовалась длительность кровотечения, а для характеристики общей свертывающей активности крови, сопряженной с функциональным состоянием кровяных пластинок, производилось исследование процесса свертывания нативной крови на коагулографе.

Заболевания печени сопровождаются нарушением процесса свертывания крови [Блюгер, Майоре, 1978; Kaz-mier et al., 1965]. Изучали изменение некоторых показателей системы гемокоагуляции у животных с экспериментальным гепатитом, который вызывали путем 4-кратного подкожного введения тетрахлорметана из расчета 0,25 мл/100 г массы в виде 50 %-ного раствора на растительном масле. Контрольной группе животных вводили эквиобъемное количество стерильного растительного масла [Блюгер, Майоре, 1978]. Группа животных в опыте с первого дня затравки тетрахлорметаном пероралъно получала отвар тибетского препарата один раз в день в течение 7 сут.

В этой серии экспериментов представлялось необходимым исследовать активность фактора V [Owren, 1947], восстановление уровня которого является доказательством нормализации функциональной активности печени [Семенченко, 1973].

Статистическую обработку проводили по методам Вилкоксона - Манна - Уитни [Гублер, Генкин, 1973] и Монцевичготе-Эрингепе [1964].

Фармакологическую активность лекарственной смеси «Тхаший-тханг» и ее компонентов, по-видимому, целесообразно выявлять по отношению к одному-двум звеньям системы гемостаза при помощи нескольких тестов. В связи с этим мы исследовали изменение времени свертывания крови, время рекальцификации плазмы, толерантность плазмы к гепарииу, а также проницаемость сосудистой степки (табл. 30). Отвары большинства компонентов лекарственной смеси проявили фармакологическую активность, сокращая время свертывания крови соответственно: горец птичий - на 25,9%, зубчатка поздняя - на 15,4, горечавка крупнолистная - на 16,2, оносма несча-102

Таблица 30

Действие компонентов лекарственной смеси «Тхаший-тханг» на гемокоагуляцию

 

ная - на 31,4 %. В эксперименте с раствором сухой свиной желчи нам не удалось выявить достоверных изменений времени свертывания крови. Отвар полной смеси сократил время свертывания крови на 58,2 %.

В дальнейших экспериментах отвары всех компонентов лекарственной смеси, за исключением желчи, сокращали время рекальцификации плазмы соответственно на 18,8%; 8,0; 16,4; 28,5; 43,4%. Толерантность плазмы к гепарину повышалась под влиянием отваров: горца птичьего - на 19,2%, горечавки крупнолистной - на 18,5, оносмы песчаной - на 20,0, желчи - на 1,6, зубчатки поздней - на 26,0 и полной смеси - на 37,2 % «

 

Сравнение влияния отваров на изученные тесты гемокоагуляции показывает, что отвар полной смеси «Тхаший-тханг» оказывал более выраженное биологическое действие, чем отвар каждого компонента в отдельности.

Кровоточивость часто обусловливается патологическими изменениями, приводящими к нарушению проницаемости и резистентности сосудов. При субмикроскопическом исследовании структура кровеносных капилляров разных органов имеет ряд общих признаков. Стенка кровеносного капилляра состоит из трех слоев: эндотелиальных клеток, базальной мембраны и слоя периваскулярных клеток, окутанных аргирофильными и коллагеновыми волокнами и погруженных в аморфную часть основного вещества соединительной ткани [Movat, Fernando, 1963]. Ю. М. Шидаков и др. [1981] в экспериментах, выполненных в условиях высокогорья, отметили сопряженность между степенью проницаемости сосудистой стенки и свертывающей способностью крови.

Резистентность сосудистой стенки, или устойчивость ее к механическим воздействиям, в значительной степени лимитирует риск появления кровоточивости.

Существенное значение в поддержании нормальной резистентности сосудов имеют кровяные пластинки. При этом тромбоциты, внедряясь в эндотелиальные клетки, выделяют в них биологически активные вещества, в том числе факторы III и V, что нормализует функции стенки капилляра [Баркаган, 1980]. Трансфузия свежих ':$ тромбоцитов, взвешенных в плазме, прекращает спонтанные кровотечения [Ширяев, 1970]. Изложенное показывает что проницаемость и резистентность сосудов, состояние сосудистого эндотелия прямо связаны с коагулологической активностью крови. В связи с этим мы исследовали фармакологическую активность отваров полной лекарственной смеси и ее компонентов на проницаемость сосудистой стенки.

Критерием степени проницаемости в наших экспериментах служило изображение разной степени проницаемости частиц туши в стенку микрососуда (рис. 9). У животных интактной группы после перорального введения физиологического раствора и внутривенной инъекции туши микроскопирование брыжейки не позволило выявить окрашенных микрососудов (рис. 11). У животных второй группы, которым вводили физиологический раствор, гистамин и тушь, сосудистая стенка интенсивно пропитывалась частицами туши, что соответствовало IV степени проницаемости (рис. 12).

В группе животных, которым вводили отвар лекарственной смеси «Тхаший-тханг», сосудистая проницаемость также изменялась до IV степени (рис. 13).

Исследование активности каждого компонента лекарственной смеси показало, что введение отвара горечавки крупнолистной вызывало проникновение частичек туши в сосуды брыжейки также как в случае введения отвара полной лекарственной смеси (рис. 14). Введение отваров зубчатки поздней, корня оносмы песчаной и раствора желчи не вызывало проникновения туши в морфологические структуры микрососудов, в связи с чем сосуды у животных в этих группах не отличаются от контроля (рис. 15-17).

В группе животных, получавших отвар из травы горца птичьего, отмечалось очаговое проникновение частиц тущи в стенки брыжеечных сосудов, что соответствовало II степени проницаемости (рис. 18).

Таким образом, исследование биологической активности отвара полной лекарственной смеси «Тхаший-тханг» и ее компонентов выявило различное их действие" на проницаемость сосудистой стенки. Отвары полной смеси, и отдельно горечавки крупнолистной, вызывали внедрение частиц туши в структуры сосудов брыжейки крыс, по интенсивности не уступающее действию гистамина. При этом необходимо подчеркнуть, что частицы туши, вводимые в кровоток животные, могли оседать в разных слоях стенки сосуда [Черных и др., 1975; Томилов и др., 1985].

Таким образом, отвары лекарственной смеси «Тхаший-тханг» и ее компонентов проявляли гемокоагулирующее действие, повышая общую свертывающую активность крови интактных животных. Вместе с тем они активно действовали на сосуды микроциркуляторного русла, что могло инициировать адгезию и динамические функции тромбоцитов.

В серии монографий, а также в многочисленных статьях представлен ряд звеньев регуляции нормального гемостаза, тромботических состояний и кровоточивости [Кузник, Скипетров, 1974; Кудряшов, 1975; Скипетров, 1978; Баркаган, 1980; Raby, 1974]. В этих и других работах [Акопов, 1981] большое значение придается проблемам регуляции функций системы гемостаза. Работа И.Э. Акопова [1981] посвящена поискам новых гемостатических средств резорбтивного действия. Автор справедливо выделяет возможность изыскания эффективных гемостатических препаратов из арсенала лекарственных растений.

Среди 17 групп лекарственных средств, насчитывающихся в классификации тибетской медицины [Вайдурья-онбо, гл. 20-21], выделены лекарства, влияющие на состояние органов кроветворения, и препараты, применяющиеся для остановки кровотечений [Базарон, Асеева, 1985]. Хотя общий гемостатический эффект препаратов отмечался еще и древности, до сих пор остается неясным механизм их действия.

В настоящем разделе представлены результаты изучения системы гемостаза у животных под влиянием однократного и курсового введения тибетского препарата. Использованные методы исследования характеризовали состояние плазменной коагуляции крови, а также позволяли судить об изменениях в сосудисто-тромбоцитарном звене гемостаза.

В исходной коагулограмме контрольной группы животных время рекальцификации плазмы и ее толерантность к гепарину, характеризовавшие общую свертывающую активность крови, имели средние значени - 126 и 311 с (табл. 31). Среднее значение времени рекальцификации, характеризующее также активность плазменных прокоагулянтов,- подтверждалось обычным уровнем активности фактора VIII (43,2 с). Физиологическое соотношение между указанными тестами характеризовало нормальный процесс тромбопластинообразования, что подтверждалось уровнем утилизации протромбина, показатель которого составлял 40,4 с. Протромбиновый индекс, отражающий процесс внешней активации коагуляции крови, не имел существенного отклонения от физиологического уровня и был равен 81,0 %. Тромбиновое время составляло 17,4 с. Конечная стадия процесса свертывания крови в контрольной группе, крыс характеризовалась активностью факторов XIII (38,3 с) с концентрацией фибриногена (3,47 г/л).

Однократное введение многокомпонентного тибетского препарата из сырья природного происхождения другой группе крыс вызывало значительное изменение процесса свертывания крови. Через 2 ч после введения отвара препарата время рекальцификации плазмы достоверно сократилось по сравнению с контролем, а толерантность плазмы к гепарину в активность фактора VIII, напротив, повысились (см. табл. 31). Протромбиновый индекс, характеризующий активность факторов протромбинового комплекса, повысился на 26,7 %. Антикоагулянтная активность крови, о которой можно было судить по тесту утилизации протромбина, сохранялась на физиологическом уровне. Тромбиновое время составляло 14,5 с, в контроле - 17,4 с. Активность фактора XIII у крыс под влиянием препарата повышалась на 3,3 с, концентрация фибриногена существенно не увеличивалась. (Таблица 31)

У крыс, однократно получавших отвар многокомпонентного препарата, количество тромбоцитов достоверно увеличилось, а длительность кровотечения и объем теряемой крови уменьшились по сравнению с контролем (табл.32).

Анализ электрокоагулограммы, дающий представление об интегральном процессе свертывания крови при участии форменных элементов и плазменных факторов коагуляции, показал, что время начала свертывания крови (показатель Т,) у крыс, получавших отвар тибетского препарата, достоверно сокращалось по сравнению с контролем (табл. 33). Аналогичным образом изменялись показатели Т_г и Т. Иллюстрацией результатов эксперимента, представленных в табл. 33, являются рис. 19 и 20, на которых представлена запись электрокоагулограммы у крыс контрольной и подопытной групп.

(Таблица 32)

       Таблица 33.

 

       Представляло интерес исследовать состояние свертывающей системы крови и количество тромбоцитов у животных при курсовом применении гемостатического препарата «Тхаший-тханг». Такая постановка вопроса связана с принципом применения этого препарата в тибетской медицине, где его назначали курсом; на 7-10 дней в дозе не более;, 1 г в сутки [БАЖ, л. 3-4].:

       В экспериментах данной серии, использовали ту же дозу препарата, что и в опытах на животных при однократном его введении.

При курсовом введении отвар препарата вызывает состояние гиперкоагуляции, фиксируемое по большинству тестов (табл. 34). Причем сравнение результатов, полученных у животных при однократном применении препарата, с таковыми при курсовом его введении показало более выраженное стимулирующее воздействие на систему гемостаза во втором случае. Существенное различие отмечено по следующим тестам: толерантность плазмы к гепарину, протромбинотшй индекс, активность фактора VIII и концентрация фибриногена. При этом возрастание свертывающего потенциала крови происходило на фоне физиологического уровня утилизации протромбина и практически не изменившегося тромбинового времени, что,

 

Таблица 35

 

Показатели гемостаза у собак после курсового введения отвара тибетского препарата вероятно, следует считать адаптивной реакцией организма, нивелирующей риск спонтанного тромбогенеза.

Известно, что на одни и те же биологически активные вещества реакция животных разных видов неодинакова [Петков, 1974; Балуда и др., 1978]. Мы провели исследование изменений системы гемостаза у собак. Использовали ту же дозу препарата, с которой работали в экспериментах на крысах.

Курсовое введение препарата стимулировало систему гемостаза. Достоверно выраженная гиперкоагуляция, по сравнению с контролем, констатировалась по тестам: время рекальцифакадии плазмы и ее толерантность к гепарину (табл. 35). Гиперкоагудяция по этим тестам подтверждалась достоверным повышением активности фактора VIII и протромбинового индекса. Процесс гиперкоагуляции по данным тестам сопровождался нормальным уровнем утилизации протромбина, тромбинового времени и активности фактора XIII. Как и в предыдущем эксперименте, зафиксировано достоверное возрастание количества тромбоцитов по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе.

При сравнении стимулирующего действия препарата на общие коагуляционные тесты при длительном его применении у крыс и собак выяснилось, что более выраженное влияние препарат оказывает на систему свертывания крови крыс. Так, время рекальцификации плазмы у крыс сократилось на 52%, а у собак - на 37; толерантность плазмы к гепарину у крыс повышалась на 53, а у собак - на 41,5; протромбиновый индекс у крыс повышался до 110,2, а у собак - до 102,7 %.

Таким образом, серия экспериментов, проведенных на крысах и собаках, показала, что действие препарата вызывает у животных гиперкоагуляцию крови, повышает функцию компонентов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, увеличивая при этом количество тромбоцитов, сокращая время кровотечения и объем теряемой крови.

В процессе изучения функций тромбоцитарно-сосудистого гемостаза, наступающих под влиянием однократного и длительного применения тибетского препарата, обнаружено, что во всех случаях увеличивается количество кровяных пластинок.

Продукция тромбоцитов в физиологических условиях осуществляется гигантскими клетками костного мозга - мегакариоцитами, которые отшнуровывают их от цитоплазмы. В свою очередь, процессы мегакариоцитопоэза и тромбодитопоэза, осуществляемые кроветворной тканью, тесно связаны между собой и регулируются холинореактивными системами [Мосягина и др., 1976; Денисенко, 1У80; Kimura, 1986].

Известно, что введение в организм животного мелкого стекла, скипидара, яичного белка и некоторых других iopRi^CTu вызывает реактивный тромбоцитоз [Баранов, Ubb ]. Наряду с этим показано, что стимуляция функциональной активности мегакариоцитарно-тромбоцитарного аппарата в физиологических и экстремальных условиях осуществляется тромбоцитопоэтинами [Кассирский Алексеев, 1970; Mizoguchi, Nomura, 1986]. Учитывая это, для выяснения возможного механизма тромбоцитоза, возникающего у животных под влиянием тибетского гемостатического препарата, изучали тромбоцитопоэтическую активность сыворотки крови крыс, получавших отвар тибетского препарата в течение 5 дней. В контрольных сериях изучена динамика количества тромбоцитов у крыс после введения физиологического раствора и сыворотки от интактных животных (табл. 36). Полученные данные показали, что инъекция физиологического раствора и сыворотки крови от интактных животных-доноров не изменяет числа тромбоцитов в периферической крови крыс-реципиентов через 1,3 и 6 сут от начала эксперимента. В то же время введение сыворотки от крыс, получавших отвар тибетского препарата, привело к значительному увеличению количества тромбоцитов у животных-реципиентов. При этом существенное увеличение числа кровяных пластинок на 94,3 • 10³/л зарегистрировано уже через сутки после введения сыворотки. Известно, что накопление тромбоцитов в мегакариоцитах происходит постепенно, тогда как отторгаются они от цитоплазмы этих клеток путем «взрыва» [Пиксанов, 1969]. Очевидно, что у животных, получавших препарат, ускоряется процесс накопления и отторжения кровяных пластинок. Это положение не противоречит данным других исследователей, так как многие гемостатические препараты из растений увеличивают количество тромбоцитов [Алиев, 1960; Аконов, 1981]. Через 3 и 6 сут тромбоцитоз продолжал нарастать: количество пластинок увеличивалось соответственно на 222,4 и 238,1 • 10^п/л.

В костном мозге крыс, получавших физиологический раствор (контроль 1), количество мегакариоцитобластов составляло 1,0%, базофильных мегакариоцитов насчитывалось 6,4, полихроматофильных мегакариоцитов - 69,6, оксифильных форм - 16,0, голоядерных - 4,2 и дегенератшшых мегакариоцитов - 3,8 % (табл. 37).

В то же время у животных-реципиентов, получавших сыворотку крови интактных животных (контроль 2), существенных изменений в мегакариоцитограмме по сравнению с контролем не произошло.

Сравнение мегакариоцитограмм и функциональной активности мегакаряоцитов показало, что под влиянием сыворотки крыс-доноров у крыс-редипиентов (опыт) по сравнению с контролем 2 количество мегакариоцитоблйстов и базофильных мегакариоцитов увеличилось на 50 и 40 % соответственно, показатели полихроматофильных и оксифильных форм мало отличались от показателей группы контроля и составляли 76 и 12%. Число голо-ядерных и дегенеративных форм значительно уменьшилось по сравнению с таковым крыс первой и второй контрольных групп и было равно соответственно 1,4 и 1,0 %. Существенная разница выявлена в количестве шнурующих тромбоциты мегакариоцитов, показатель которых в этой группе крыс достигал 54 %.

Следовательно, увеличение в костном мозге тромбоцитоотделяющих клеток мегакариоцитарного ряда и появление периферического тромбоцитоза обусловлены введением тромбоцитопоэтически активной сыворотки крови крыс-доноров.

Таким образом, в данной серии экспериментов изучены изменения системы гемостаза у здоровых животных в процессе применения многокомпонентной смеси из лекарственного сырья природного происхождения. Результаты экспериментов показали, что отвар многокомпонентной лекарственной смеси повышал общую свертывающую активность крови, которая характеризовалась ускорением времени рекальцификации плазмы, повышением толерантности плазмы к гепарину и протромбинового индекса. При этом у животных через 2 ч после введения отвара повышалась активность фактора VIII. Гиперкоагуляция цельной крови зарегистрирована на электрокрагулограмме по показателям T^ T_Z и Т.

Вместе с тем доказано, что под влиянием отвара лекарственной смеси значительно повышались функции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Увеличивалось количество тромбоцитов, сокращалось время кровотечения и при этом снижался объем теряемой крови. Показано, что возникающий тромбоцитоз периферической крови обусловлен тромбоцитопоэтической активностью сыворотки крови крыс-доноров, получавших отвар многокомпопептпой лекарственной смеси.

При длительном введении отвара многокомпонентной смеси «Тхаший-тханг» состояние гиперкоагуляции усиливалось, судя по показателям общекоагуляционных тестов и нарастанию концентрации фибриногена. Отвар многокомпонентной смеси «Тхаший-тханг» вызывал пь перкоагуляцию крови и повышал функции сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза у разных видов животных.

Для сравнения влияния отвара изучаемого препарата на скорость свертывания крови и других препаратов, применяемых в практической медицине, ыы выбрали 5%-ный настой травы л агохилуса опьяняющего п   1,0%-ный раствор хлорида кальция. Результаты эксперимента показали, что отвар препарата «Тхаший-тханг» ускоряет время свертывания оксалатной плазмы в среднем на 54,4% по сравнению с 1 %-ным раствором хлорида кальция, тогда как 5%-ный настой травы лагохилуса опьяняющего - лишь на 22,7 %.

Антикоагулянтная терапия в клинической практике занимает значительное место. Антикоагулянты непрямого действия могут быть разделены на четыре подгруппы: монокумарины, дикумарины, циклокумарины, производные ипдандиона. Являясь антагонистами витамина К, антикоагулянты непрямого действия, введенные в организм, приводят к нарушению синтеза протромбина, факторов протромбинового комплекса и появлению аномальных белков, что затрагивает концевую часть полипептидной цепи, где находятся Са-связывающие участки, играющие большую роль в активации протромбина. Оказалось, что витамин К принимает участие в карбоксилировании глутаминовой кислоты; из-за отсутствия или блокирования карбоксилирования этого остатка дефектная молекула протромбина теряет способность, связывать кальций, что исключает его участие в свертывании крови [Kazmier et al., 1965; Stenflo, Ferlund, 1974].

Действие непрямых антикоагулянтов на систему гемостаза не ограничивается снижением синтеза факторов протромбинового комплекса, их введение приводит к нарушению резистентвости и проницаемости сосудистой стенки. Получены данные о нарушении адгезивной функции тромбоцитов [Mikita et al., 1986].

       Вместе с тем следует иметь в виду, что широкое применение антикоагулянтов в ряде случаев сопряжено с передозировкой препаратов, что увеличивает риск развития геморрагических осложнений [Лужников, Фирсов, 1968],^:

 

Таблица 38

Влияние отвара гемостатического препарата на показатели системы гемостаза у крыс с гипокоагуляцией после введения пелентана

 

Мы исследовали влияние препарата на систему гемостаза животных с плазменной гипокоагуляцией, возникшей после введения непрямого антикоагулянта пелептана (10 мг/100 г, дважды в день, в течение 2 сут). Одновременно исследовали показатели плазменной коагуляции и количество кровяных пластинок.

Коагулограмма животных, составлявших группу дополнительного контроля (контроль 1), характеризовалась физиологическими уровнями показателей. Время рекальцификации плазмы и толерантность плазмы к гепарину соответственно были равны 89,7 и 355,8 с (табл. 38). Протромбиновый индекс был равен 85,7 %. При этом показатель потребления протромбина, активность факторов VIII и X11I составляли соответственно 39,0 28 и 33,3 с. Показатель тромбинового времени был равен 17,8 с. Количество кровяных пластинок составляло 629,0 • 10^э/л.