Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М., Медицина, 1990, стр. 105-123, М., Медицина, 1998, стр. 143-156.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия, М., Высшая школа, 1989, стр. 52-92.

дополнительная:

4. 4. Р. Марри и др. Биохимия человека, М., Мир,1. 1993, том 1, стр. 76-110.

5. 5. Филиппович Ю. Б. Основы биохимии М., Высшая школа, 1993, стр. 100-111.

6. 6. Ленинджер А.Л. Основы биохимии, М., Мир, 1985, том 1., стр. 226-302

7. 8. Албертс Б. и др., Молекулярная биология клетки, М, Мир, 1994 г, том 1, стр. 113-171.

 

ЗАДАЧИ:

1. Аскорбиновая кислота необходима для синтеза и функционирования коллагена и потребляется в реакциях, катализируемых:

а) лизин-гидроксилазой	в) пролин-гидроксилазой
б) лизин-оксидазой	г) АСТ

 

2. Каталитическое действие ферментов связано с:

а) увеличением энергии активации

б) уменьшением энергии активации

в) увеличением свободной энергии реакции

г) уменьшением свободной энергии реакции

 

3. Какие ферменты активируются из зимогенов?

а) карбоксипептидаза	в) пепсин	д) ЛДГ
б) химотрипсин	г) трипсин	е) АСТ

 

4. В катализируемой реакции фермент:

а) увеличивает скорость реакции в обоих направлениях

б) смещает равновесие по направлению к продукту реакции

в) снижает энергию активации

г) уменьшает значение свободной энергии

д) изменяет константу Михаэлиса

Практическая часть:

 

Лаборатоpная работа №1. Действие липазы.

Липаза входит в состав сока поджелудочной железы. В желудочном соке она содержится в небольшом количестве и действует только на предварительно эмульгированные жиры. В кишечнике желчные кислоты и белки способствуют эмульгированию липидов. Действие липазы можно обнаружить, добавив ее раствор к молоку, предварительно слабо подщелоченному раствором карбоната натрия в присутствии фенолфталеина, дающего бледно-розовую окраску.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Липаза ускоряет гидролиз нейтрального жира на глицерин и жирные кислоты, что приводит к снижению pH и исчезновению розовой окраски индикатора - фенолфталеина.

 

 

ХОД РАБОТЫ: В две пробирки наливают по 10 капель молока. В 1-ю пробирку добавляют 5 капель панкреатина, содержащего липазу, во 2-ю - 5 капель воды. В обе пробирки наливают по 1 капле 0,5% раствора фенолфталеина и по каплям 1 % раствор карбоната натрия до появления бледно-розовой окраски при pH 8,0, (нельзя приливать избыток раствора карбоната натрия). Пробирки помещают в термостат при температуре 38°С на 30 мин. Наблюдают обесцвечивание раствора в пробирке, содержащей липазу.

ВЫВОД:

 

 

Действие уреазы.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Уреаза катализирует гидролиз мочевины на двуокись углерода и аммиак, что приводит к увеличению pH, которое регистрируется индикатором фенолфталеином.

 

 

ХОД РАБОТЫ: Берут две пробирки. В 1-ю отмеривают 1мл 1% раствора мочевины, а во 2-ю, 1мл 1% раствора тиомочевины. В каждую пробирку добавляют по 2 капли фенолфталеина и по 1 мл раствора уреазы. Содержимое обеих пробирок встряхивают, оставляют на несколько минут при комнатной температуре и наблюдают за появлением розовой окраски в пробирке с мочевиной и отсутствием окраски в пробирке с тиомочевиной. Содержимое 1-й пробирки приобретает розовую окраску вследствие смещения pH раствора в щелочную сторону за счет образования аммиака.

ВЫВОД:

 

 

Лаборатоpная работа № 2. Изучение влияния различных факторов на скорость ферментативных реакций (УИРС).

Скорость ферментативных реакций зависит от многих факторов: концентрации субстрата, концентрации фермента, pH среды, наличия активаторов и ингибиторов, коферментов и концентрации ионов в реакционной среде.

Фермент a-амилаза содержится в слюне и катализирует гидролиз a(1-4) гликозидной связи крахмала и гликогена до дисахарида мальтозы. Кроме того, в слюне имеется фермент мальтаза, расщепляющая мальтозу до глюкозы. Гидролиз крахмала под действием a-амилазы происходит до стадии образования декстринов. Нерасщепленный крахмал с йодом дает синее окрашивание. Декстрины в зависимости от размера дают с йодом синее окрашивание: амилодекстрины - фиолетовое, эритродекстрины - красно-бурое, ахродекстрины и мальтоза - желтое. Конечные продукты гидролиза крахмала - мальтоза и глюкоза имеют свободные альдегидные группы и могут быть обнаружены реакцией Троммера, в основе которой лежит окислительно-восстановительная реакция. При этом альдегидная группа окисляется до глюконовой кислоты, а медь - в гидрат окиси меди желтого цвета. При дальнейшем нагревании гидрат закиси меди переходит в красную закись меди.

Одним из характерных свойств ферментов является термолабильность, т.е. чувствительность фермента к температуре, при которой протекает ферментативная реакция. Для многих ферментов температурный оптимум составляет 38-40°С.

При нагревании выше 70°C вследствие тепловой денатурации белковой молекулы ферменты утрачивают свои свойства. Степень инактивации зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного процесса резко снижается. В термолабильности ферментов можно легко убедиться на примере действия амилазы слюны. О действии фермента судят по исчезновению субстрата или появлению продуктов реакции.

Реакция Троммера.