Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Определение активности антибиотиков
Величины биологической активности антибиотиков обычно выражают в условных единицах, которые содержатся в 1 мл раствора или в 1 мг препарата. Если имеется антибиотик, полученный в чистом виде, то его активность выражают в мкг\мг препарата или мкг\мл препарата. За единицу антибиотической активности принимают минимальное количество антибиотика, которое способно подавить развитие или задерживать рост определенного числа тест-микроба (стандартного штамма) в единице объема питательной среды. За единицу активности пенициллина принимают минимальное количество антибиотика, которое способно задерживать рост St.aureus 209 в 50 мл бульона. Для стрептомицина за единицу активности принимают минимальное количество антибиотика, который задерживает рост E.coli К12 в 1 мл бульона.
Количественное определение антибиотика в культуральной жидкости или в других растворах осуществляется несколькими методами: биологическими, химическими и физико-химическими. Наиболее распространенным, удобным и достаточно точным является биологический метод. Его можно применять к любым антибиотикам. В основу положен метод серийных разведений. Берут стерильный бульон, который мерно разливается в пробирки, в этом бульоне делается последовательно серийное разведение антибиотика (на уровне культуральной жидкости или раствора) с различным шагом – 2х, 10х, 100х. После этого вносится тест-культура в определенном количестве и инкубируют. На следующий день определяют единицы активности по тому максимальному разведению, которое задерживает рост тест-культуры, и это разведение принимают за единицы активности данного антибиотика. Более точный метод определения при большом шаге разведения: средняя концентрация между последним минусом и первым плюсом (минус – отсутствие роста, плюс – наличие роста). Методом серийных разведений можно определять активность антибиотика и в весовых единицах – мкг\мл. Но это только в том случае, если мы точно знаем, какой антибиотик мы изучаем. Делается тоже ряд разведений (опытного и стандартного антибиотика, который берется в определенной известной концентрации) с последующим посевом, через некоторое время отмечается то максимальное разведение, которое дает задержку роста, и концентрацию антибиотика определяют по отношению разведения испытуемого раствора к разведению стандартного антибиотика, и умножают на концентрацию стандартного антибиотика. Например:
Cисслед.= (Розвед. исслед. / Розвед. тест)* Стест = 8/2*10=40мкг/мл
Этот метод сопоставим только в том случае, если эксперимент проводится с соблюдением стерильности (асептики), используют одни и те же среды для разведения, вносятся одни и те же количества клеток, соблюдается длительность инкубации, температура и т.д. Еще одна разновидность биологических методов – диффузный метод. Основан на том, что антибиотики могут диффундировать в агар и вызывать зону задержки роста тест-культуры. Величина зоны задержки роста будет определяться составом агаровой пластины, рН, температурой, а также химической природой антибиотика, его молекулярной массой, и концентрацией антибиотика (чем выше концентрация, тем больше зона задержки). На основе диффузных методов основываются метод с использованием металлических цилиндров, метод с использованием лунок в агаре, метод с использованием бумажных дисков. Метод с использованием металлических цилиндров: на поверхность агара, засеянного тест-клуьтурой, вставляют стандартные металлические цилиндры, которые сделаны из алюминия или нержавеющей стали, и вносят в них определенное количество испытуемого раствора, чередуя его с антибиотиками известной концентрации. Для известного антибиотика строят стандартную (калибровочную) кривую, где по оси ординат отмечают зону задержки роста в мм, а по оси абсцисс – соответствующую концентрацию антибиотика. По этой стандартной кривой определяют концентрацию исследуемого антибиотика в культуральной жидкости. Метод с применением лунок в агаре основан на том же принципе. Лунки в агаре пробивают специальным пробочным сверлом, дно лунок герметизируют одной каплей расплавленного агара. Затем в эти лунки помещают разные концентрации стандартного и испытуемого антибиотика. Метод с использованием бумажных дисков используют если антибиотик находится в культуральной жидкости. Из фильтровальной бумаги дыроколом вырезают диски, их стерилизуют, и стерильным пинцетом смачиваются в разных концентрациях антибиотика и накладываются на засеянную тест-культуру.
Химические и физико-химические методы. Преимущество: быстрые. Недостаток: уступают в точности биологическим методам, не ко всем антибиотикам можно использовать. Относят колориметрические и спектрофотометрические методы. В основу колориметрических методов положен принцип превращения препарата или его группировок в окрашенные соединения. Спектрофотометрический метод основан на том, что антибиотики имеют характерные спектры поглощения в видимом свете (360-720 нм) и\или в УФ-области (200-360 нм). Для этого также обязательно строится калибровочная кривая для стандартного антибиотика с разными концентрациями (по оси ординат отмечают значение спектрофотометра – ОД). Химические методы определения антибиотиков применяются очень редко. Существует несколько методик определения концентрации пенициллина, в основу которых положено поглощение йода продуктами гидролиза антибиотика. Лабораторный регламент Венцом лабораторных исследований является лабораторный регламент. Лабораторный регламент – это технологический документ, которым завершаются исследования в лабораторных условиях по разработке метода получения антибиотика. Он служит основой для разработки промышленного регламента. Основная его задача – разработка оптимального метода производства антибиотического вещества. Лабораторный регламент включает: 1) Характеристика АБ · название антибиотика · основное назначение · краткое описание свойств препарата · описание организма, который вырабатывает АБ · методы определения биологической активности · условия хранения 2) Прилагается технологическая схема 3) Указывается сырье и материал: требования к качеству сырья и материалов (ориентировка на отечественное сырье) 4) Аппаратурная схема производства 5) Изложение технологического процесса (описывается процесс получения АБ на основе завершенных научных и экспериментальных результатов, которые получены в лабораторных условиях). ТС описывается по этапам. Описывается обьем, концентрация, среда, рН, степень аэрации, условия перемешивания, пеногасители, температура, продолжительность процесса и т.д. 6) Отходы производства, технологические и вентиляционные выбросы в атмосферу, их использование и обезвреживание · перечень возможных отходов и выбросов · наличие в отходах ценных веществ и рекомендации к их использованию · наличие вредных веществ с точки зрения загрязнения окружающей среды и способы их обезвреживания 7) Контроль производства Указывают особые требования к оборудованию (герметичность ферментера и комплектаций и т.д.); режимы стерилизации сред, отдельных веществ и воздуха; методы анализа процесса биосинтеза АБ и готовой продукции 8) Техника безопасности, пожарная безопасность и производственная санитария: перечень веществ способных воспламеняться и взрываться. Все вещества, которые используются в процессе биосинтеза АБ, должны быть изучены с точки зрения безопасности. 9) Перечень производственных инструкций, которые должны быть разработаны на основе лабораторного регламента 10) Технико-экономические нормативы · выход продукта и промежуточных продуктов · удельные нормы расхода сырья и материалов · удельные нормы энергозатрат (пара, воды, ЕЕ, сжатого воздуха) 11) Информационный материал · биологические и физико-химические свойства вещества · степень очистки · фармакологические свойства · сравнение с показателями идентичных зарубежных препаратов · сведенья о патентной чистоте препарата с перечнем охраняющихся авторских свидетельств · вредность веществ и меры предосторожности работы с веществами Повышение антибиотикообразования микроорганизмов продуцентов: Для этого используют 3 этапа: - селекция найболее активных форм подцуентов антибиотиков - подбор ПС и подбор условий культивирования которые обеспецивают увеличение выхода антибиотика продуцентом - порведение направленнгого биосинтез антибиотиков
|
||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-12-15; просмотров: 71; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.144.77.71 (0.012 с.) |