Определение групповой принадлежности

1 способ – способ стандартных сывороток. Сыворотки готовят из донорской крови. У сывороток известна концентрация, срок хранения, серийный номер. Сыворотка представляет собой дефибринизированную плазму. Титры сывороток окрашивают разными красителями:

I – естественный цвет (бесцветная сыворотка);

II – сыворотка синего цвета, на флаконе – 2 полоски по диагонали;

III – сыворотка окрашена красным кралителем, на флаконе – 3 полоски по диагонали;

IV – сыворотка ярко жёлтого цвета, 4 полоски по диагонали.

 

 

       

 

 

    

 

 

 

 

Если агглютинации нет ни в одной лунке, в крови нет А и В антигенов, значит данная кровь I группы.

Если агглютинация произошла в 1 и 3 лунке, значит в крови есть А-антиген и это кровь II группы.

Если агглютинация произошла с 1 и 2 сывороткой, значит в крови есть В-антиген. Это кровь III группы.

Если агглютинация произошла с 1, 2, 3 сыворотками, в крови есть и А, и В антигены. Это кровь IV группы.

2 способ – способ стандартных эритроцитов. Эритроциты готовятся из донорской крови. Из вены берут 3-4 мл крови, центрифугируют, осадок эритроцитов отмывают в физиологическом растворе. Хранятся эритроциты недолго, поэтому готовятся ex tempori. Для определения берут известные эритроциты и неизвестную сыворотку.

«-» - агглютинации нет;

«+» - агглютинация есть.

IO     IIA   IIIB

 -        +       +     - в сыворотке есть α и β антитела, это I группа

 -        -        +     - в сыворотке есть β антитело, это II группа

 -        +        -     - в сыворотке есть α антитело, это III группа

3 способ – метод цоликлонов. Цоликлоны – это моноклональные антитела. Эти АТ производят в культуре тканей, в клетках гибридомы.

Цоликлон антиА – аналог α-агглютинина, красного цвета;

Цоликлон антиВ – аналог β-агглютинина синего цвета.

        антиА               антиВ

        - (О)                  - (О)          I

        + (А)                 - (О)          II

        - (О)                  + (В)         III

        + (А)                 + (В)         IV

Резус-фактор. Система резус-фактор (Rh) открыта К. Ланштейнером. Данная система состоит из 3 фрагментов гликопротеидной природы: Д, С, Е.

Д – самый сильный фрагмент, является настоящим антигеном, вызывает агглютинацию.

С – неполный антиген, гаптен.

Е – гаптен, отвечает за конглютинацию.

Все фрагменты могут быть доминантными и рецессивными. Существует 8 сочетаний фрагментов:

СДЕ         СдЕ

СДе          Сде

сДЕ          сдЕ

сДе           сде

Донор является положительным по Rh, если у него хотя бы один антиген доминантный (сочетания: СДЕ, СДе, сДЕ, сДе, СдЕ, Сде, сдЕ. Донор отрицателен при наличии всех рецессивных генов: сде.

Реципиент – либо положительный, либо отрицательный, определяется по антигену Д. Если он доминантный, реципиент положительный (первая колонка генотипов); если рецессивный – реципиент отрицательный (вторая колонка генотипов).

Резус-принадлежность определяется экспресс-способом на чашке Петри с помощью антирезусной сыворотки (лошадиная). Уникальную сыворотку можно приготовить из крови Rh - женщины с IV группой крови, которая была беременна Rh + плодом.

К антиД-сыворотке добавляют эритроциты, ставят в термостат (45ºС) на 7-10 минут. Затем наблюдают за результатом:

· Если агглютинация произошла, фрагмент Д присутствует, кровь резус-положительная;

· Если агглютинации нет, фрагмент Д отсутствует, кровь резус-отрицательная.

Все антигенные системы термолабильны. Чем меньше температура, тем активнее агглютинация. Резус-система – термостабильная система.

Лекция 3