Плазменные и клеточные факторы свертывания крови

В свертывании крови принимает участие комплекс белков, находящих­ся в плазме (плазменные факторы гемокоагуляции), большинство из кото­рых является проферментами и обозначается римскими цифрами (фактор I, II и т.д.). Активация плазменных факторов осуществляется за счет про­теолиза и сопровождается отщеплением пептидных ингибиторов. Для обо­значения этого процесса к номеру фактора присоединяют букву «а» (фак­тор Па, Va и т.д.).

Плазменные факторы разделяются на две группы:

• витамин-К-зависимые, которые образуются преимущественно в печени при участии витамина К;

• витамин-К-независимые, для синтеза которых витамин К не требуется (табл. 5.7).

Таблица 5.7. Плазменные факторы свертывания крови

Фактор

Характеристика фактора

I, фибриноген II, протромбин III, тканевый фактор IV, Са^++ V, акцелератор- глобулин VII, проконвер- тин VI1IC, антигемо- фильный глобу­лин А (АГГ) IX, фактор Крист­маса, антигемо- фильный фактор В X, фактор Стюар­та—Прауэра XI, плазменный предшественник тромбопластина

Белок. Образуется в печени. Под влиянием тромбина переходит в фибрин. Принимает участие в агрегации тромбоцитов. Необхо­дим для репарации тканей Гликопротеин. Образуется в печени в присутствии витамина К. Под влиянием протромбиназы переходит в тромбин (фактор На) Трансмембранный белок. Входит в состав мембран многих тка­ней. Является матрицей для развертывания реакций, направлен­ных на образование протромбиназы по внешнему механизму Участвует в образовании комплексов, входящих в состав теназы и протромбиназы. Необходим для агрегации тромбоцитов, реак­ции высвобождения, ретракции Белок. Образуется в гепатоцитах. Витамин-К-независим. Акти­вируется тромбином. Входит в состав протромбиназного комп­лекса Витамин-К-зависимый гликопротеин. Образуется в печени, при­нимает участие в формировании протромбиназы по внешнему механизму. Активируется при взаимодействии с тромбопласти­ном и факторами Alla, Ха, 1Ха, На Гликопротеин. В плазме образует комплекс с vWF и специфиче­ским антигеном. Активируется тромбином. Входит в состав те- назного комплекса. При его отсутствии или резком снижении концентрации возникает заболевание гемофилия А Гликопротеин. Образуется в печени при участии витамина К. Активируется тромбином и фактором Vila. Переводит фактор X в Ха. При его отсутствии или резком снижении концентрации возникает заболевание гемофилия В Гликопротеин. Образуется в печени при участии витамина К. Активируется факторами Vila и 1Ха. Фактор Ха является основ­ной частью протромбиназного комплекса. Переводит фактор II в Па Гликопротеин. Активируется фактором ХПа, калликреином со­вместно с высокомолекулярным кининогеном (ВМК)

 

Продолжение табл. 5. 7

Фактор

Характеристика фактора

XII, фактор Хаге­мана, или фактор контакта XIII, фибринста- билизируюиций фактор (ФСФ), фибриназа Фактор Флетчера, пре калл икре ин Фактор Фитцдже­ральда, высокомо­лекулярный кини­ноген (ВМК)

Белок. Активируется отрицательно заряженными поверхностя­ми, адреналином, калликреином. Запускает внешний и внутрен­ний механизмы образования протромбиназы и фибринолиза, ак­тивирует фактор XI и прекалликреин Глобулин. Синтезируется фибробластами и мегакариоцитами. Стабилизирует фибрин. Необходим для нормального течения ре­паративных процессов Белок. Участвует в активации фактора XII, плазминогена и ВМК. Активируется калликреином, принимает участие в активации фактора XII, XI и фибринолиза

 

В эритроцитах обнаружены соединения, аналогичные тромбоцитарным факторам. Важнейшим из них является частичный тромбопластин (напо­минает фактор Р₃), который входит в состав мембраны. Кроме того, эрит­роциты содержат большое количество АДФ, фибриназу и другие факторы. При травме сосуда около 1 % эритроцитов вытекающей крови разрушает­ся, что способствует образованию тромбоцитарной пробки и фибринового сгустка.

Лейкоциты содержат факторы свертывания, называемые лейкоцитар­ными. Так, моноциты и макрофаги при стимуляции антигеном синтезиру­ют тканевый фактор. Эти же клетки являются продуцентами факторов свертывания — II, VII, IX и X. Приведенные факторы являются одной из причин возникновения диссеминированного (распространенное) внутри­сосудистого свертывания крови (ДВС-синдром) при онкологических, мно­гих воспалительных и инфекционных заболеваниях.

Важная роль в процессе свертывания крови отводится тканевым фак­торам, к которым относится тромбопластин (фактор III, TF). При разру­шении тканей или стимуляции эндотелия эндотоксином и провоспали- тельными цитокинами большое количество тромбопластина поступает в кровоток и вызывает развитие ДВС-синдрома.

Механизм свертывания крови

Процесс свертывания крови представляет собой проферментно-фер­ментный каскад, в котором проферменты, переходя в активное состояние, способны активировать другие факторы свертывания крови. Подобная ак­тивация может носить последовательный и ретроградный характер.

Процесс свертывания крови включает 3 фазы. Первая — комплекс последовательных реакций, приводящих к образованию протромбиназы; во вторую фазу происходит переход протромбина в тромбин (фактора II в фактор Па); в третью — из фибриногена образуется фибриновый сгусток.

Первая фаза — образование протромбиназы может осуществляться по внешнему и внутреннему механизму. Внешний механизм предполагает обя­зательное присутствие тромбопластина (TF, или F-III), внутренний же связан с участием активированных тромбоцитов. Вместе с тем внутренний и внешний пути образования протромбиназы имеют много общего, так как активируются одними и теми же факторами (фактор ХПа, калликре- ин, ВМК и др.) и приводят в конечном итоге к появлению одного и того же активного фермента — фактора Ха, выполняющего в комплексе с факто­ром Va функции протромбиназы.

Важная роль в процессе свертывания крови отводится глицерофосфолипидам: фосфатидилсерину и фосфатидилэтаноламину. Одной из особенностей бислоя мембраны является его асимметрия. В наружном листке мембраны, контактирую­щей с кровью, преобладают фосфатидилхолин и сфингомиелин. Эти фосфолипи­ды содержат фосфохолин, обеспечивающий атромбогенность мембран. Молекула таких фосфолипидов электронейтральна.

Фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин расположены преимущественно во внутреннем слое мембраны. На головке указанных фосфолипидов преобладает от­рицательный заряд. Инициация свертывания крови может наступить лишь тогда, когда эти фосфолипиды появятся на наружной поверхности мембраны. Следова­тельно, для инициации свертывания крови необходимо нарушить исходную асим­метрию фосфолипидов, что может произойти за счет обмена фосфолипидов между слоями.

Для процесса свертывания крови важна асимметрия в содержании ионов Са²⁺, концентрация которых в плазме и интерстициальной жидкости в 10 тыс. раз боль­ше, чем в цитоплазме клетки и тромбоците. При травме сосуда в цитоплазму из внеклеточной жидкости переходит большое количество ионов Са²⁺ Поступление Са²⁺ в тромбоцит или клетки (травмированный эндотелий и др.) разрыхляет мемб­рану и выключает механизмы поддержания асимметрии фосфолипидного бислоя. При этом отрицательно заряженные молекулы фосфатидилсерина и фосфатидилэ- таноламина переходят на поверхность мембраны.

Зависимый от энергии процесс концентрации аминофосфолипидов во внутрен­нем листке мембраны связан с функционированием специфичных трансмембран­ных белков-переносчиков — транслоказ. осуществляющих однонаправленное пе­редвижение фосфатидилсерина и фосфатидилэтаноламина во внутренний листок мембраны. При активации клеток и повышении уровня цитоплазматического Са²⁺ происходит ингибиция транслоказ. При этом наступает перемещение всех мемб­ранных фосфолипидов, приводящее к выравниванию их концентрации в обоих листках мембраны.

Как только на поверхности клеточной мембраны увеличивается концентрация отрицательно заряженных фосфолипидов и они соприкасаются с кровью, содер­жащей высокую концентрацию ионов Са²⁺, образуются кластеры — активные зоны, к которым прикрепляются факторы свертывания. Эта реакция осуществля­ется следующим образом: ионы Са²⁺ с одной стороны присоединяются к головкам фосфатидилсерина, а с другой — соединяются с остатками у-карбоксиглутамино- вой кислоты, входящей в состав факторов свертывания крови (V, VIII, IX др.). За счет таких кальциевых мостиков в результате конформации открываются актив­ные центры.

Формирование протромбиназы по внешнему пути начинается с актива­ции фактора VII при его взаимодействии с тромбопластином, а также с факторами ХПа, 1Ха, Ха и калликреином. В свою очередь фактор Vila ак­тивирует не только фактор X, переводя его в фактор Ха, но и фактор IX, участвующий в образовании протромбиназы по внутреннему механизму.

Образование протромбиназы по внешнему пути происходит быстро и ведет к появлению фактора Ха и небольших порций тромбина (Па), кото­рый способствует необратимой агрегации тромбоцитов, активации факто­ров VIII и V и значительно ускоряет образование протромбиназы по внешнему и внутреннему механизму.

Рис. 5.2. Коагуляционный гемостаз.

Условные обозначения: стрелки — активация, ВМК — высокомолекулярный кининоген,! — фибриноген, Im — фибринмономер, Is — легко растворимый фибрин, Ii — труднораствори­мый фибрин.

 

Инициатором внутреннего пути образования протромбиназы является фактор XII, который активируется травмированной поверхностью стенки сосуда, кожей, коллагеном, адреналином, после чего переводит фактор XI в Х1а. В этой реакции принимает участие калликреин (активируется фак­тором ХИа) и ВМК (активируется калликреином). Фактор Х1а оказывает непосредственное влияние на фактор IX, переводя его в фактор 1Ха. Спе­цифическая деятельность последнего направлена на протеолиз фактора X (перевод его в фактор Ха) и протекает на поверхности фосфолипидов тромбоцита при обязательном участии фактора VIII (или Villa). Комплекс факторов IXa, Villa на фосфолипидной поверхности тромбоцитов называ­ется теназным.

Благодаря прекалликреину и ВМК (как и фактору XII) объединяются внешний и внутренний пути свертывания крови.

Вторая фаза свертывания крови (переход фактора II в фактор Па) осу­ществляется под влиянием протромбиназы (комплекса Xa+Va) и сводится к протеолитическому расщеплению протромбина, благодаря чему появля­ется фермент тромбин, обладающий свертывающей активностью.

Третья стадия свертывания крови — переход фибриногена в фибрин — включает 3 этапа. На первом под влиянием фактора На от фибриногена отщепляются 2 фибринпептида А и 2 фибринпептида В, в результате чего образуются фибрин-мономеры (фактор Im). На втором этапе благодаря процессу полимеризации формируются вначале димеры и олигомеры фиб­рина, трансформирующиеся в дальнейшем в волокна фибрина — прото­фибриллы легкорастворимого фибрина, или фибрина s (soluble), быстро лизирующегося под влиянием протеаз (плазмин, трипсин). В процесс об­разования фибрина вмешивается фактор XIII (фибриназа, фибринстаби- лизирующий фактор), который после активации тромбином в присутствии Са²⁺ прошивает фибринполимеры дополнительными перекрестными свя­зями, благодаря чему появляется труднорастворимый фибрин, или фиб­рин i (insoluble). В результате этой реакции сгусток становится резистент­ным к фибринолитическим (протеолитические) агентам и плохо поддается разрушению (рис. 5.2). Образовавшийся фибриновый сгусток благодаря тромбоцитам, входящим в его структуру, сокращается и уплотняется (ре­тракция) и прочно закупоривает поврежденный сосуд.

5.5.3. Естественные антикоагулянты

Несмотря на то что в циркуляции имеются все факторы, необходимые для образования тромба, в естественных условиях при наличии целости сосудов кровь остается жидкой. Это обусловлено наличием в кровотоке противосвертывающих веществ, получивших название естественных анти­коагулянтов, и фибринолитического звена системы гемостаза.

Естественные антикоагулянты делят на первичные и вторичные. Пер­вичные антикоагулянты всегда присутствуют в циркуляции; вторичные образуются в результате протеолитического расщепления факторов свер­тывания крови в процессе формирования и растворения фибринового сгу­стка.

Первичные антикоагулянты (табл. 5.8.) можно разделить на 3 группы:

• обладающие антитромбопластическим и антипротромбиназным дейст­вием (антитромбопластины);

• связывающие тромбин (антитромбины);

• предупреждающие переход фибриногена в фибрин (ингибиторы само­сборки фибрина).

К антитромбопластинам относится ингибитор внешнего пути сверты­вания (TFPI). Установлено, что он способен блокировать комплекс факто­ров TF+VIIa+Xa, благодаря чему предотвращается образование протром­биназы по внешнему механизму.

К ингибиторам, блокирующим образование протромбиназы, относятся витамин-К-зависимые протеины С, S (РгС, PrS) и белок, синтезируемый эндотелием, — тромбомодулин. Под воздействием тромбомодулина и свя­занного с ним тромбина РгС переходит в активное состояние (РгСа), чему способствует кофактор PrS. РгСа разрезает пополам факторы Va и Villa и тем самым препятствует образованию протромбиназы по внутреннему пути и переходу протромбина в тромбин.

Одним из ведущих антикоагулянтов является белок антитромбин Ш (А-Ш). Самостоятельно A-III обладает слабым антикоагулянтным дейст­вием. В то же время он способен образовывать комплекс с гликозамингли- каном гепарином (Г) — А-П1+Г. Этот комплекс связывает факторы Па, 268

Таблица 5.8. Основные первичные естественные антикоагулянты

Вещество

Характерные признаки

Антитромбин Ill Гепарин Кофактор гепарина II а2-Анти плазм ин а2-Макроглобулин а,-Антитрипсин С1-эстеразный ингиби­тор или ингибитор ком­племента I TFP1 TFP12, или анексин V Протеин С Протеин S Тромбомодулин Ингибитор самосборки фибрина «Плавающие» рецепто­ры Аутоантитела к актив­ным факторам сверты­вания

а2-Глобулин. Синтезируется в печени. Прогрессивно дейст­вующий ингибитор тромбина, факторов Ха, IXa, Xia, ХПа, калликреина и в меньшей степени - плазмина и трипсина. Плазменный кофактор гепарина. Сульфатированный полисахарид. Трансформирует анти­тромбин III из прогрессивного в антикоагулянт немедлен­ного действия, значительно повышая его активность. Обра­зует комплексы с тромбогенными белками и гормонами, обладающие антикоагулянтным и нсферментативным фиб­ринолитическим действием Антикоагулянт, действующий в присутствии гепарина Белок. Ингибирует действие плазмина, трипсина, хемот­рипсина, калликреина, фактора Ха, урокиназы Слабый прогрессивный ингибитор тромбина, калликреина, плазмина и трипсина Ингибитор тромбина, факторов IXa, Х1а, ХПа, трипсина и плазмина а2-Нейроаминогликопротеид. Инактивирует калликреин, предотвращая его действие на кининоген, факторы ХПа, IXa, Xia и плазмин Ингибирует комплекс TF+Vlla+Xa Образуется в плаценте. Ингибирует комплекс TF+VIla+Xa Витамин-К-зависимый белок. Образуется в печени и в эн­дотелии. Обладает свойствами сериновой протеазы. Инак­тивирует факторы Va и Villa и стимулирует фибринолиз Витамин-К-зависимый белок. Образуется эндотелиальны­ми клетками. Усиливает действие протеина С Гликопротеин, фиксированный на цитоплазматической мембране эндотелия. Кофактор протеина С, связывается с фактором Па и инактивирует его Полипептид, образуется в различных тканях. Действует на фибрин-мономер и фибрин-полимер Гликопротеиды, связывают факторы Па и Ха, а возможно, и другие сериновые протеазы Находятся в плазме, ингибируют факторы Па, Ха и др.

 

[Ха, Ха, Xia, XI 1а, калликреин и плазмин. Существует высокомолекуляр- чый гепарин с ММ от 25 до 35 кД и низкомолекулярный гепарин с ММ иенее 5 кД. Последний в меньшей степени нуждается во взаимодействии с X-III и нейтрализует преимущественно фактор Ха. Ингибитором сверты­вания является кофактор гепарина II, связывающий тромбин. Его действие эезко усиливается при взаимодействии с гепарином.

Ингибитором тромбина, факторов IXa, Xia, ХИа и плазмина является ^-антитрипсин. Слабым ингибитором тромбина, калликреина и плазмина служит а₂-макроглобулин.

К первичным антикоагулянтам следует также отнести аутоантитела к активным факторам свертывания крови (Па, Ха и др.), которые всегда

присутствуют в кровотоке, а также покинувшие клетку рецепторы — так называемые плавающие рецепторы к активированным факторам свертыва­ния крови.

К вторичным антикоагулянтам относят «отработанные» факторы свер­тывания крови (уже принявшие участие в свертывании) и продукты дегра­дации фибриногена и фибрина (ПДФ), обладающие антиагрегационным и противосвертывающим действием, а также стимулирующие фибринолиз. Роль вторичных антикоагулянтов сводится к ограничению внутрисосуди­стого свертывания крови и распространения тромба по сосудам.

5.5.4. Фибринолиз

Фибринолиз является неотъемлемой частью системы гемостаза, всегда сопровождает процесс свертывания крови и активируется факторами ХПа, калликреином, ВМК и др. Являясь важной защитной реакцией, фибринолиз предотвращает закупорку кровеносных сосудов фибрино­выми сгустками. Кроме того, фибринолиз ведет к реканализации сосу­дов после остановки кровотечения.

Ферментом, разрушающим фибрин, является плазмин, находящийся в циркуляции в неактивном состоянии в виде профермента плазминогена. Под воздействием его активаторов происходит расщепление пептидной связи Arg_J61—Val₅₆₂ плазминогена, в результате чего образуется плазмин.

В кровотоке плазминоген встречается в двух основных формах — в виде профермента с N Нетерминальной глутаминовой кислотой — глу-плазми- ногена и в виде частично подвергшегося протеолизу лиз-плазминогена. По­следний приблизительно в 20 раз быстрее трансформируется активаторами в плазмин и имеет большее сродство к фибрину.

Фибринолиз, как и процесс свертывания крови, может протекать по внешнему и внутреннему пути. Внешний путь активации фибринолиза осу­ществляется при участии тканевых активаторов, которые синтезируются в эндотелии сосудов. К ним относится тканевой активатор плазминогена (ТАП). Кроме того, активатором плазминогена является урокиназа, обра­зуемая в почках, а также фибробластами и эндотелиоцитами.

Внутренний путь активации фибринолиза, осуществляемый плазменны­ми активаторами, разделяется на Хагеман-зависимый и Хагеман-незави- симый. Хагеман-зависимый фибринолиз протекает под влиянием факторов ХПа, калликреина и ВМК, которые переводят плазминоген в плазмин. Ха­геман-зависимый фибринолиз осуществляется наиболее быстро и носит срочный характер. Его основное назначение сводится к очищению сосуди­стого русла от нестабилизированного фибрина, образующегося в процессе внутрисосудистого свертывания крови. Хагеман-независимый фибринолиз может осуществляться под влиянием протеинов С и S.

Образовавшийся в результате активации плазмин вызывает расщепление фибрина. При этом появляются ранние (крупномолекулярные) и поздние (низкомолекулярные) продукты деградации фибрина — ПДФ (рис. 5.3).

В плазме находятся и ингибиторы фибринолиза. Важнейшим из них яв­ляется ингибитор первого типа (PAI-1), который нередко называют эндо­телиальным.

Ингибитором фибринолиза является а.₂-аитиплазмин, связывающий не только плазмин, но и калликреин, урокиназу, ТАП и, следовательно, вмешивающийся как на ранних, так и на поздних стадиях фибринолиза. 270

Рис. 5.3. Фибринолиз

Условные обозначения ТАП — тканевый активатор плазминогена; ВМК — высокомолеку­лярный кининоген, ПДФ — продукты деградации фибриногена/фибрина

 

Сильным ингибитором плазмина служит аi-протеазный ингибитор (а,-ан- титрипсин). Кроме того, фибринолиз тормозится а₂-макроглобулином и Сi-эстеразным ингибитором.

При ускорении свертывания крови и одновременном торможении фиб­ринолиза создаются благоприятные условия для развития тромбозов, эм­болий и ДВС-синдрома.

Наряду с ферментативным фибринолизом существует и нефермента­тивный, который обусловлен комплексными соединениями естественного антикоагулянта гепарина с ферментами и гормонами. Неферментативный фибринолиз приводит к расщеплению нестабилизированного фибрина, очищая сосудистое русло от фибринмономеров и фибрина s.

5.5.5. Регуляция свертывания крови и фибринолиза

Свертывание крови, контактирующей со стеклом или кожей, осуществ­ляется за 5—10 мин. Основное время в этом процессе уходит на образова­ние протромбиназы, тогда как переход протромбина в тромбин и фибри­ногена в фибрин осуществляется быстро. Время свертывания крови может уменьшаться (гиперкоагуляция) или удлиняться (гипокоагуляция).

При острой кровопотере, гипоксии, интенсивной мышечной работе, болевом раздражении, стрессе свертывание крови значительно ускоряется, что может привести к появлению фибринмономеров и даже фибрина S в сосудистом русле.

Ускорение свертывания крови и усиление фибринолиза при всех пере­численных состояниях обусловлены повышением тонуса симпатической части автономной нервной системы и поступлением в кровоток адренали­на и норадреналина При этом активируется фактор Хагемана (XII), что

приводит к запуску внешнего и внутреннего механизмов образования про­тромбиназы, а также стимуляции Хагеман-зависимого фибринолиза. Кро­ме того, под влиянием адреналина усиливается образование тканевого фактора и наблюдается отрыв от эндотелия фрагментов клеточных мемб­ран, обладающих свойствами тромбопластина, что способствует резкому ускорению свертывания крови. Из эндотелия также выделяются ТАП и урокиназа, приводящие к стимуляции фибринолиза.

При повышении тонуса парасимпатической части автономной нервной системы также наблюдается ускорение свертывания крови и стимуляция фибринолиза. В этих условиях происходит выделение тромбопластина и активаторов плазминогена из эндотелия сердца и сосудов. Следовательно, основным эфферентным регулятором свертывания крови и фибринолиза явля­ется сосудистая стенка.

Вместе с тем развивающаяся гиперкоагуляция может смениться гипо­коагуляцией, которая носит в естественных условиях вторичный характер и обусловлена расходом (потреблением) тромбоцитов и плазменных фак­торов свертывания крови, образованием вторичных антикоагулянтов, а также рефлекторным выделением в сосудистое русло гепарина и A-III в ответ на появление фактора Па.

При многих заболеваниях, сопровождающихся разрушением эритроци­тов, лейкоцитов, тромбоцитов и тканей или гиперпродукцией тканевого фактора стимулированными эндотелиальными клетками, моноцитами и макрофагами, развивается ДВС-синдром. ДВС-синдром обнаружен более чем при 150 различных заболеваниях. Особенно часто он возникает при переливании несовместимой крови, обширных травмах, отморожениях, ожогах, длительных оперативных вмешательствах на легких, печени, серд­це, предстательной железе, всех видах шока, краш-синдроме (длительное сдавление конечностей), инфекционных, воспалительных и онкологиче­ских заболеваниях, а также в акушерской практике при попадании в кро­воток матери околоплодных вод, насыщенных тромбопластином плацен­тарного происхождения.

5.6. ИНСТРУМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ КРОВИ

Наиболее точными и менее трудоемкими методами исследования сис­темы крови являются автоматические. Многие из применяемых в настоя­щее время автоматических счетчиков способны определять не только чис­ло клеток, но и другие гематологические показатели. Электронные счетчи­ки могут анализировать значительное количество проб крови, сводя к ми­нимуму технические ошибки. Наиболее часто для определения числа кле­ток крови используются кондуктометрические счетчики, принцип работы которых сводится к подсчету клеток путем пропускания их суспензии че­рез отверстие малого диаметра (апертуру) и изменения электрического со­противления, вызванного прохождением клеток. Для подсчета различных форменных элементов крови пользуются разными по размеру апертурами. Более того, при подсчете лейкоцитов и тромбоцитов необходимо предва­рительно лизировать эритроциты. Существуют более современные кондук­тометрические счетчики, в которых подсчет эритроцитов и тромбоцитов проводится одновременно.

В последнее время получили распространение приборы, позволяющие одновременно анализировать до 18 параметров крови: число эритроцитов, 272 количество гемоглобина, гематокритное число, средний корпускулярный объем эритроцита, ширину распределений эритроцитов по объему, сред­нее содержание и среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, ко­личество лейкоцитов, процент гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов, а также их абсолютное количество в 1 мм³, количество тромбоцитов в 1 мм³, средний объем тромбоцита, ширину распределения тромбоцита по объему и тромбокрит (доля объема цельной крови, занимаемой тромбоцитами). Дифференцированный подсчет перечисленных групп лейкоцитов основан на том, что специальный лизирующий реагент разрушает эритроциты и сжимает лейкоциты. Особенно сильно сжимается цитоплазма лимфоци­тов, в меньшей степени гранулоцитов и еще в меньшей — моноцитов, что отражается на их сопротивлении и регистрируется счетчиком.

Используют автоматизированные счетчики лейкоцитарной формулы. Су­ществует два типа автоматов:

• системы компьютерного анализа клеточного изображения;

• проточные системы, идентифицирующие различные формы лейкоцитов по размерам клетки и особенностям окрашивания. Однако они не спо­собны полностью заменить визуального анализа мазка крови, ибо не су­ществует аппаратов, способных надежно идентифицировать все незре­лые или патологические клетки.

Современные методы определения концентрации гемоглобина основаны на способности этого протеина интенсивно окрашиваться. В качестве на­дежного способа измерения применяется цианметгемоглобиновый метод, в основе которого лежит переход всех известных соединений гемоглобина в устойчивое производное — циангемоглобин. Концентрация гемоглобин- цианида определяется на спектрофотометре при длине волны 540 нм и сравнивается с известным стандартом.

Определение различных органических ингредиентов плазмы производит­ся или фотометрическим, или иммуноферментным методом, с использова­нием меченых антител или антигенов. Концентрация отдельных ингреди­ентов определяется по интенсивности окраски и сравнивается с имею­щимся эталоном.

Состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза оценивают по времени кровотечения при проколе пальца или мочки уха с регистрацией капли крови на фильтровальной бумаге. Для оценки сосудисто-тромбоцитарного гемостаза внедряют аппаратные методы. Чаще используют фильтрометр, в котором регистрируется скорость блокады микрофильтра агрегатами тром­боцитов при стандартизируемом пропускании через него исследуемой крови.

Исследование агрегации тромбоцитов осуществляют с помощью прибо­ров агрегометров. Принцип их работы основан на фотометрической реги­страции процесса агрегации по падению оптической плотности плазмы. Применяют различные типы агрегометров, соединенных для обработки полученных данных с компьютером, а для записи — с принтером. Сущест­вует стандартный набор агрегирующих агентов (АДФ, коллаген, адрена­лин, тромбин и другие), с помощью которых активируются тромбоциты и запускается процесс агрегации. В последние годы нашли применение аг­регометры, основанные на кондуктометрических принципах склеивания тромбоцитов между собой и пригодные для исследования цельной крови.