Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Определение билирубина в сыворотке крови по методу иендрашика в модификации левченка В. И. И влизла В. В.
Принцип. Диазореактив, который образуется при взаимодействии сульфаниловой кислоты с натрием азотнокислым, реагирует с билирубином сыворотки крови, образуя комплекс розово-фиолетвого цвета. Конъюгированный (прямой) билирубин дает быструю реакцию, а свободный (неконъюгированный) – только после добавления кофеинового реактива. Реактивы. 1. 0,85 %-ный раствор натрия хлорида, чда; 2. Кофеиновый реактив: 5 г чистого кофеина, 7,5 г натрия бензойнокислого и 12,5 г натрия уксуснокислого растворяют в 90 мл дистиллированной воды, нагревают до 50-60 0С, перемешивают; 3. Диазосмесь: готовят смешением деазореактивов А и Б. Деазореактив А: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют при нагревании в 300-400 мл дистиллированной воды, добавляют 15 мл концентрированной серной кислоты. После полного растворения сульфаниловой кислоты и охлаждения раствора доливают дистиллированной водой до 1 л. Реактив стоек, хранить в посуде из темного стекла; Деазореактив Б: 0,5 %-ный раствор натрия азотнокислого (хч), хранить в посуде из темного стекла 2-3 недели; Непосредственно перед работой смешивают 10 мл деазореактива А и 0,3 мл деазореактива Б. Оборудование. Фотоэлектроколориметр, водяная баня, мерные колбы, пипетки на 1 и 2 мл, пробирки. Ход определения. В четыре пробирки вносят по 0,5 разведенной вдвое сыворотки крови. Первая пробирка является контролем для определения общего билирубина. В нее добавляют 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида и 1,75 мл кофеинового реактива. Во второй пробирке определяют содержание общего билирубина: вносят 0,25 мл диазореактива и 1,75 мл кофеинового реактива. Третья пробирка – контроль для определения прямого (конъюгированного) билирубина. В нее вносят 2 мл изотонического раствора натрия хлорида. В четвертую пробирку добавляют 1,75 мл изотонического раствора натрия хлорида и 0,25 мл диазосмеси. Конъюгированный билирубин определяют через 5 мин после добавления диазосмеси, общий – через 20 мин при длине волны 560 нм в кювете с оптическим путем 5 мм против дистиллированной воды. От показателей экстинкции проб для определения общего и связанного билирубина отнимают показатели соответствующих контролей и по калибровочному графику определяют фактическое содержание данных параметров. Построение калибровочных графиков производят с помощью реактивов выпускаемых фирмами «Филисит» и «Реагент».
Клиническое значение. Увеличение концентрации билирубина в сыворотке крови – гипербилирубинемия наблюдается при болезнях, которые сопровождаются гемолизом эритроцитов (за счет свободного билирубина): пироплазмозы, отравление гемолитическими ядами, лептоспироз. Увеличение содержания связанного билирубина отмечается при механической желтухе. Одновременное повышение обоих фракций билирубина - при паренхиматозной желтухе. Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ)и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) по методу Рейтмана-Френкеля. Принцип. Вследствие переаминирования, что происходит под действием АлАТ и АсАТ, образуется щавелевоуксусная и пировиноградные кислоты, которые при добавлении 2,4-динитрофенилдигразина образуют в щелочной среде окрашенные гидразоны. Реактивы. 1. Субстратный раствор АлАТ (или АсАТ), чда: буфер 0,1 моль/л рН 7,4±0,2; 2-оксоглутарат – 2 ммоль/л; DL-аланин (для АлАТ) или DL-аспартат (для АсАТ) – 0,2 моль/л 105 мл; 2. 2,4-динитрофенилдигразин, чда (1 ммоль/л в 1 моль/л соляной кислоты – 105 мл; 3. Стандартный раствор пирувата, чда (2 ммоль/л) – 3 мл; 4. 0,4 М (16 г/л) раствор едкого натра или 0,4 М (22,4 г/л) раствор едкого кали, чда. Возможно применение набров реактивов НПФ «Филисит» и «Реагент». Оборудование. Фотоэлектроколориметр, водяная баня или термостат, пипетки на 0,1; 1 и 5 мл, пробирки. Ход определения. В пробирку вносят 0,25 мл субстатного раствора АлАТ (АсАТ) и инкубируют при температуре 37 0С 3 мин, затем добавляют 0,05 мл сыворотки крови и нагревают при той же температуре точно 60 мин. Затем внсят 0,25 мл раствора 2,4-динитрофенилдигразина и выдерживают 20 мин при комнатной температуре. Определяют оптическую плотность при длине волны 500-560 нм в кювете с толщиной 10 мм против контроля. Контролем выступает 0,05 мл изотонического раствора, который обрабатывается аналогичным образом. Расчет активности ферментов проводят по калибровочному графику. Его построение приведено в таблице
Клиническое значение. АсАТ и АлАТ находятся во многих клетках организма. Определение их активности используют при диагностике болезней печени. Максимальное увеличение активности данных ферментов наблюдается при некрозе печени, остром паренхиматозном гепатите. При хроническом гепатите, а так же при гепатодистрофии отмечают менее выраженный подъем их активности. Для КРС более информативным является определение АсАТ, для мелких животных – АлАТ и АсАТ.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-05-12; просмотров: 96; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.221.41.214 (0.006 с.) |