Скарификационная кожная проба.

У морской свинки вызывают сенсибилизацию путем трехкратного подкожного введения разведенной физ раствором вакцины БЦЖ.Промежутки между инъекциями 5 дней. Через 5-7 дней после окончания инъекций сенсибилизированное животное фиксируют в положении на спине. Стерильной скарификационной иглой наносят две царапины длиной 4-5мм через каплю нанесенного на кожу аллергена.

Реакцию следует оценивать через 24-48 часов. Реакция считается положительной при появлении папулы 4-5 мм

    На счет следующего опыта не знаю как, но со свинкой точно должны знать.!)

Для проведения пробы используют препараты, содержащие аллерген.

Пробу проводят следующим образом: раствор с аллергеном либо накапывают на предварительно сделанную царапину на руке, либо с помощью шприца вводят внутрикожно во внутреннюю поверхность предплечья. Если повышенная чувствительность к какому-либо аллергену имеется, то на месте царапины через 15— 20 мин появляются краснота и отек местные проявления аллергической реакции. Обычно ставят пробы с 15—20 аллергенами одновременно.

23. Изучение сосудистых реакций при воспалении (опыт Конгеймма).

    Берется спинальная лягушка (это значит живой режут верхнюю челюсть перед перекрестом зрительных бугров, потом тыкают иглой в отверстие спинного мозга), фиксируют на дощечке вверх брюшком.

    Вскрывается брюшная полость, пинцетом осторожно извлекается кишечная петля, расправляется и фиксируется при помощи булавок.

    Под малым увеличением студенты наблюдают и изучают фазы сосудистых реакций при воспалении.

1) Кратковременное сужение, затем расширение сосудов и замедление кровотока.

2) Дальнейшее сужение сосудов и замедление кровотока.

3) Маятникообразное течение крови в сосудах и стаз.

4) Внутрисосудистое перераспределение форменных элементов, краевое стояние нейтрофилов.

5) Эмиграция лейкоцитов.

Наблюдаемые сосудистые изменения возникают от механического воздействия и соприкосновения брыжейки с воздухом. Т.о., внешнее воздействие достаточно для возникновения воспаления.

24. Методы определения полового хроматина.

1) Наиболее простым и широко используемым методом является цитологическое исследование полового хроматина в клетках эпителия полости рта. Взяв металлическим шпателем соскоб со слизистой оболочки внутренней поверхности щеки или оттянутой книзу нижней губы.

Окраска по Романовскому. Концом шпателя, которым взят материал, делают мазок на предметном стекле и после высыхания погружают в фиксатор или наливают 3-4 капли этилового спирта на 10 минут. КрасительРомановского-Гимзы наливают на фиксированный препарат на 25-30 минут, после чего промывают и высушивают.

Начинают исследование с обзора под малым увеличением микроскопа, выбирая скопления клеток светлой и овальной формы и рыхлым нежно-петлистым строением (в фазе интерфазы). Хроматиновые палочки, располагающиеся внутри ядра, но не прилегающие к оболочке не учитываются.

    Подсчет телец ведут на 100 клеток промежуточного эпителия, имеющих овальные ядра. Форма телец мб треугольной с вершиной, обращенной к центру ядра, прямоугольной овальной или в виде тельца. После подсчетов результаты исследования обозначают как хроматин-позитивные

2) Техника определения в крови.

Мазки крови для определения полового хроматина в лейкоцитах обычно изготавливают на предметных стеклах. На предметное стекло ближе к одному концу, помещает небольшую каплю крови. Для этого поверхностью стекла прикасаются к капле, но не к коже! Размазывают шпателем, потом высушивают. Высохший мазок помещают для фиксации в банку с фиксирующей жидкостью (смесь Никифорова или в этиловый спирт на 10 мин). Затем окрашивают по методу Романовского-Гимзы.

Половой хроматин в сегментоядерных нейтрофилах носит название «барабанных палочек» или ядерных отростков. Он имеет вид круглой головки, диаметром 1-1,5 мк/метров, окрашивается в такой же цвет как и ядро.

В норме у женщин 20-40%, у мужчин – 0-4% хроматин-положительных клеток.

 

 

25. Методика определения активности ферментов гноя.

Состав набора:

- гепарин 250 ед (5 мл)

- полистероловый латекс

- метанол

- буферный раствор

- краситель по Романовскому

 

Подготовка реактивов к работе:

    Суспензию латекса готовят, вводя во флакон «Латекс» 2 мл буферного раствора, и интенсивно встряхивая в течение 2 мин.

Краситель для фагоцитоза разводят дист водой по 20 мл

 

Описание метода

    В 2 центрифужные пробирки с 0,05 мл раствора гепарина вносят 0,1 мл исследуемой крови, взятой из пальца натощак, В одну центрифужную пробирку добавляют 0, 05 мл раствора продигиозана для стимуляции фагоцитарной активности клеток. А в другую – такой же объем буферного раствора для контроля.

    После этого в обе пробирки вносят по 0,05 мл суспензии латекса, взвесь перемешивают аккуратным встряхиванием и инкубируют 30 мин при 37 градусах, повторно встряхиваю через каждые 5 мин.

    Далее пробирки охлаждают проточной водой и центрифугируют при 1500 оборотах в мин в течение 5-7 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок суспензируют в остатке.

    Для определения поглотительной способности нейтрофилов из полученной взвеси готовят мазки и окрашивают по Романовскому.

 

Учет и оценка результатов

Подсчет ведут в 200 нейтрофилах по фагоцитарному показателю и фагоцитарному числу.

1. Фагоцитарный показатель (активность) – процент фагоцитарных клеток из числа сосчитанных н/ф (в норме 30-80%)

2. Фагоцитарное число (индекс) – среднее число частиц, поглащенное одним активным нейтрофилом (в норме 2-9)

3. Резервную возможность фагоцитарной реакции определяют по отношению показателей фагоцитоза при стимуляции продигиозана к аналогичным в базальных условиях.