Возбудитель катаральной лихорадки овец («синий язык»), характеристика, методы специфической диагностики и биопрепараты.

Вирусная болезнь жвачных, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Culicoides. Характеризуется лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями ротовой полости, особенно языка, пищеварительного тракта, эпителия венчика и основы кожи копыт, а также дегенеративными изменениями скелетной мускулатуры. Поражает овец, реже крупный рогатый скот и коз. Впервые зарегистрирована в Южной Африке в 1876 г. комиссией по болезням крупного рогатого скота и овец.

Характеристика возбудителя. Возбудитель — РНК-геномный вирус — относится к семейству Reoviridae, роду Orbivirus. Вирионы реовирусов сферической формы, диаметром 60— 80 нм, с двойным капсидом — наружным и внутренним, кубического типа симметрии; суперкапсидной оболочки нет. Геном представлен двуспиральной фрагментированной (10—12 сегментов) линейной РНК. Вирион содержит транскриптазу (РНК-зависимую PHK-полимеразу). Внутренний капсид и геномная РНК составляют сердцевину вириона. Реовирусы содержат 78-86 % белка и 14-22 % РНК. Реовирусы репродуцируются в цитоплазме клетки с образованием характерных цитоплазматических включений, содержащих РНК, вирусные белки, зрелые и незрелые вирусные частицы.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус довольно устойчив и сохраняется в крови, консервированной раствором Эдингтона в течение 25 лет при комнатной температуре. Гниение не влияет на вирус. При медленном замораживании до минус 10 или минус 20°С он разрушается, но хорошо сохраняется при более низких температурах. Например, при минус 60° титр вируса не изменяется в течение шести месяцев. В лиофилизованных препаратах, хранящихся при 2-4°С, вирус не теряет активность в течение нескольких лет. Нагревание при 60°С инактивирует его за 5 минут. Вирус устойчив к эфиру, дезоксихолату натрия, хлороформу, антибиотикам, но чувствителен к трипсину. 3%-ный раствор формалина инактивирует вирус в течение 48-72 часов, хинозол в соотношении 1:2000 - через 30 минут, 3%-ный раствор едкого натра и 70%-ный этиловый спирт - в течение 5 минут. При рН раствора ниже 6,3 вирус инактивируется. В растворе с рН 9,0 и с низкой концентрацией солей он очень стабилен. В бараньих тушах при 4°С, если рН мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дней.

Антигенная структура. Различают 16 серотипов вируса катаральной лихорадки овец, антигенную классификацию которых проводят при помощи перекрестной реакции нейтрализации. Каждый тип создает прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных типов различна. Некоторое иммунологическое родство между типами указывает на существование общего антигенного компонента у всех штаммов данного вируса. Вирус имеет два группоспецифических неинфекционных растворимых антигена: комплементсвязывающий и преципитирующий. Комплементсвязывающий антиген представлен частицами диаметром 8 нм и входит в состав вириона, а преципитирующий антиген может быть компонентом самой вирусной частицы или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках.

Культивирование вирусов. Вирус культивируют в куриных эмбрионах 6-8-дневного возраста, в организме новорожденных мышей и в различных культурах клеток. Эмбрионы заражают в желточный мешок, на хорионаллантоисную оболочку или внутривенно. В последнем случае используют эмбрионы 11-13-дневного возраста. Зараженные эмбрионы инкубируют при 33,6°. Вирус достигает максимального титра между 36 и 72 часами после заражения. Эмбрионы погибают через 3-6 дней. Они характерного вишнево-красного цвета. Последовательное пассирование вируса в куриных эмбрионах приводит к его аттенуации, что легло в основу приготовления вакцины против катаральной лихорадки овец.

Вирус размножается в мозге новорожденных мышей при интрацеребральном заражении и вызывает их гибель через 3-5 дней с симптомами энцефалита. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дневного возраста. У взрослых мышей вирус размножается, но инфекция протекает инаппарантно (без проявлений). Ткань мозга инфицированных мышей используют для приготовления комплементсвязывающего антигена для РСК.

К вирусу чувствительны культуры клеток почек ягнят, эмбрионов крупного рогатого скота, молодых хомяков, перевиваемые линии клеток HeLa, ВНК-21, синовиальные клетки Мак Коя, амниотические клетки человека, клетки мышиных фибробластов и др. Культуры клеток почек ягнят и эмбрионов крупного рогатого скота в настоящее время широко используют при изготовлении вакцины против катаральной лихорадки овец для размножения аттенуированных штаммов вируса.

В культуре клеток почек ягнят цитопатические изменения появляются через 48-72 часа после заражения и характеризуются округлением клеток, появлением зернистости в цитоплазме, фрагментацией ядра и, наконец, их распадом. Вирус формирует в культуре клеток включения двух типов: внутриплазматические (РНК-положительные) и внутриядерные (ДНК-положительные). Предполагают, что синтез вируса осуществляется в цитоплазме.

Изучение цикла репродукции в клетках мышиных фибробластов показало, что вирус начинает размножаться через 4 часа после заражения и достигает максимального титра к 12 часам. Цитопатические изменения появляются лишь через 24 часа культивирования, полное разрушение клеток наступает через 72-96 часов. Таким образом, цитопатогенное действие вируса значительно отстает от его формирования. Все штаммы вируса катаральной лихорадки овец образуют бляшки.

Клинические признаки. Инкубационный период болезни длится предположительно 6-9 дней. При экспериментальном заражении он варьируется от 2 до 18 дней. У овец различают острое, подострое, хроническое и абортивное течение болезни. Первым симптомом является внезапное или постепенное повышение температуры тела до 40,6-42°. Лихорадочный период продолжается 2-3, иногда 6-10 дней. Высота температурной реакции не коррелирует с выраженностью клинических признаков. При остром течении болезни через 1-2 дня после подъема температуры появляются гиперемия слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, слюнотечение, истечения из носовой полости серозного или гнойного характера, засыхающие впоследствии корочкой. Развиваются отеки в области головы (ушей, губ, иногда языка), межчелюстного пространства, распространяющиеся на шею и грудь. Губы становятся чувствительными и болезненными на ощупь, нижняя губа сильно отвисает. На слизистой оболочке ротовой полости появляются кровоизлияния, кровоточащие эрозии, язвы и вследствие некроза ткани гнилостный запах изо рта. Опухший и воспаленный язык приобретает багровый или грязно-синий цвет и высовывается из ротовой полости. Через 3-5 дней после заживления повреждений на слизистой оболочке ротовой полости и нормализации температуры тела развиваются пододерматиты. Нередко у больных животных отмечают искривление шеи, выпадение шерсти, а в тяжелых случаях болезни кровавый понос. Отсутствие аппетита, специфические мышечные поражения приводят к резкому истощению, слабости, глубокой астении. При остром течении болезнь продолжается от 6 до 20 дней. Через 2-8 дней после появления первых симптомов болезни может наступить смерть.

При подостром и хроническом течении болезни все симптомы развиваются медленно и выражены слабее. Характерно истощение животных, сухость и выпадение шерсти, поражение конечностей, сопровождающееся хромотой. Длительность болезни при подостром течении 30-40 дней, при хроническом - до года. Выздоравливают животные медленно. Иногда после кажущегося выздоровления наступает смерть.

Абортивное течение характеризуется незначительным повышением температуры тела, быстро проходящей гиперемией слизистых оболочек ротовой полости. Другие симптомы болезни не развиваются.

Патологоанатомические изменения. Трупы истощены. При вскрытии трупов павших животных обнаруживают обширные студневидные отеки подкожной клетчатки в области головы, шеи, подгрудка, конечностей; гиперемию, отек и цианоз слизистых оболочек головы. Основные изменения локализуются в органах пищеварения, скелетной мускулатуре и сердце. Слизистая оболочка ротовой полости, рубца, сетки, сычуга, тонкого отдела кишечника отечна, гиперемирована, с кровоизлияниями. На кончике, спинке и боковых поверхностях языка, а также на внутренней поверхности щек видны изъязвления и некрозы. Наиболее постоянны изменения в скелетной мускулатуре и мышце сердца: дегенерация и очаговые некрозы скелетных мышц с инфильтрацией межмышечной соединительной ткани красноватой жидкостью.

Кровоизлияния встречаются в эпикарде, эндокарде и миокарде, скелетной мускулатуре, у основания легочной артерии, реже в трахее, плевре, мочевом пузыре и мочеточнике. Изменения в легких чаще всего носят вторичный характер и проявляются в виде бронхопневмонии. Изменения в других органах (в печени, почках, селезенке), в лимфатических узлах и толстом отделе кишечника, как правило, слабо выражены или отсутствуют. Характерными для катаральной лихорадки овец считают изменения на коже - гиперемию, экзематозную сыпь, сливающуюся в корочки. Покраснение нередко обнаруживают на венчике копыт задних конечностей.

При гистологическом исследовании обнаруживают изменения слизистой оболочки пищеварительного тракта, скелетной мускулатуры и сосудистой системы. Находят дистрофию и некроз эпителия языка, сычуга, тонкого отдела кишечника; дегенерацию мышечных волокон, отек и кровоизлияния в межмышечную соединительную ткань; глубокие изменения эндотелия сосудов: некроз, кариорексис, образование вакуолей в цитоплазме, набухание ядер и цитоплазмы.

Источники инфекции. Основным биологическим переносчиком, в организме которого вирус размножается, считают мокрецов Culicoides variipennis. Установлено, что мокрецы воспринимают любой антигенный тип вируса, а передают только тот, к которому в данный момент животное оказывается наиболее восприимчивым. В организме переносчика один штамм, размножаясь, может подавлять размножение других. Распространению болезни могут способствовать некоторые виды комаров и, возможно, птицы, перенося кровососущих членистоногих, ранее кормившихся на больных животных. Катаральная лихорадка овец проявляется в виде энзоотии и в виде эпизоотии с охватом значительного поголовья восприимчивых животных. Течение болезни может быть различным в зависимости от индивидуальной устойчивости животных и вирулентности штамма. Фактор же передачи не оказывает существенного влияния на реакцию организма. Такие же факторы, как неполноценное кормление, большая скученность в помещении, хронические инфекции, гельминтозы, солнечное облучение, отягощают течение болезни. Заболевает от 10 до 100% овец. Летальность в некоторых случаях достигает 90-100%, но обычно погибает от 2 до 30% овец.

Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Выделение вируса (из крови, селезенки, лимфоузлов) проводят в культуре клеток почек ягнят или хомячков, в куриных эмбрионах, которых заражают внутривенно, а также на мышах при интрацеребральной инъекции.

Биопробу ставят на двух овцах, предварительно проверенных серологически на отсутствие комплементсвязывающих антител к вирусу катаральной лихорадки. Им вводят внутривенно по 10 мл крови больного животного, суспензию, приготовленную из органов павших овец, или выделенный на культуре клеток или в куриных эмбрионах вирус. Характерным для катаральной лихорадки овец считается повышение температуры до 41 °С и выше на шестой — восьмой день после заражения с последующим развитием клинических признаков болезни. Во всех случаях выделение вируса подтверждают серологическими методами (РДП, ИФА, МФА, РСК, РН, РНГА).

Иммунитет и специфическая профилактика. Специфических методов лечения нет. Необходимо создать для больных животных спокойную обстановку, защищать от солнечного облучения и улучшить кормление.

Переболевшие овцы приобретают пожизненный иммунитет к тому типу вируса, который вызвал заболевание. Возможна реинфекция другим типом вируса в течение того же сезона или на следующий год.

Активный иммунитет после болезни сопровождается образованием нейтрализующих и комплементсвязывающих антител. Нейтрализующие антитела достигают наивысшего титра к 30-му дню и сохраняются у овец более 12 месяцев. Комплементсвязывающие антитела могут быть обнаружены через 10 дней после подъема температуры, достигают пика к 30-му дню и присутствуют в крови в течение 6-8 недель. Через 12 месяцев они обнаруживаются в едва уловимых концентрациях.

Ягнята, родившиеся от иммунных овцематок, обладают пассивным коллостральным иммунитетом продолжительностью до 3-6 месяцев.

Для иммунизации овец в Южной Африке в течение 40 лет применяли вирус, ослабленный пассированием через овец (вакцина Тейлора). В 1947 г. Александер предложил поливакцину из четырех штаммов вируса, аттенуированного путем серийных пассажей в куриных эмбрионах при пониженной температуре. Эту вакцину успешно применяли для ликвидации эпизоотии болезни в 1956 г. в Португалии и Испании. В Южно-Африканской Республике изготовлена вакцина из 14 антигенно различных типов вируса. Усовершенствованием вакцины явилось также использование культур клеток почек ягнят и почек эмбрионов крупного рогатого скота для размножения вируса. Вакцину вводят подкожно в дозе 1 - 2 мл. Иммунитет продолжительностью до одного года наступает через 10 дней.

 

 

ВОПРОС 72