Правила и методы зараж куриного эмбриона

Исслед матер вводят в аллантоисную и амниотическую полости, хорион-алллантоисную оболочку или желточн мешок куриного эмбриона. Перед заражением скорлупу яйца над воздушной камерой обрабат 70проц спиртом, обжигают на пламени, смазыв 2процен йодной настойкой, вторично протирают спиртом и обжигают. Для заражения в аллантоис полость в скорлупе над воздуш камерой проделыв небольш отверстие с пом ножниц, скапеля. Отверстие залив парафином. После обработки спиртом и 2процент йодной настойкой скорлуку рассек ножницами немного выше очерченной карандашом границы воздушной камеры. Скорлупу отпбрасыв, пастеровской пипеткой прокалыв хорион-аллантоисную оболочку в участке, свободном от сосудов. Извлек хорион-аллан.оболочку, к-ую 2ды промыв р-ром хлорида-натрия, помещают в чашку Петри и отмечают на черном фоне наличие специфич поражений

Реакция агглютинации

Реакция агглютинации представляет собой процесс склеивание и выпадение в осадок корпускулярного антигена (агглютиногена) под воздействием специфических антител (агглютининов) в растворе электролита в виде глыбок агглютината.

РА протекает в две фазы. Первая - специфическая (невидимая) - взаимодействие антител с антигеном, вторая - неспецифическая (видимая) - выпадение глыбок агглютината.

 

Реакция преципитации (РП) - это формирова­ние и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количес­твах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
Механизм. Проводится с прозрачными коллоид­ными растворимыми антигенами, экстрагированными из патоло­гического материала, объектов внешней среды или чистых культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагности­ческие преципитирующие сыворотки с высокими титрами анти­тел. За титр преципитирующей сыворотки принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммун­ной сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.

2-приготовление мазка из исследуемого материала

приготовить мазок из исследуемого материала

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала. 1. Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной среды и из жидкого патологического материала (моча, лик-вор и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят бактериальной петлей на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету. 2. Приготовление мазков из крови. На предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносят каплю крови.

Второе — шлифованное — стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла (рис. 3). Толщин-а мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно-приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и одинаковую толщину на всем протяжении. 3. Приготовление толстой капли. На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле крови, выступающей из пальца.

Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр образующегося мазка соответствовал величине копеечной монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край. 4. Приготовление мазка из вязкого материала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг к другу., После этого свободные концы стекол захватывают I и II пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределенным материалом, занимающим большую часть.

Выделение чистой культуры

При бактериологическом методе в анаэростат помещают посевы анаэробов. Из аэростата удаляют воздух и заменяют его газовой смесью, которая не содержит кислород.

Основой бактериологического метода является выделение чистой культуры возбудителя, которое происходит на первом этапе исследования. Для выделения чистой культуры возбудителя делают посев взятого материала. Посев делается, как правило, на плотные питательные среды, которые выбирают исходя из свойств предполагаемого возбудителя.

При бактериологическом методе применяют по возможности среды, на которых растет только конкретный вид бактерий — элективные среды, или среды, позволяющие отличить предполагаемого возбудителя от других микроорганизмов или по-другому дифференциально-диагностические среды.

Например, при бактериологической диагностике кишечных инфекций – среду Эндо, для выделения дифтерийной палочки используют теллуритовые среды, и т. д. При выделении условно-патогенных микроорганизмов при бактериологическом методе посев взятого материала осуществляют на универсальные питательные среды. Примером такой среды может служить кровяной агар.

Все манипуляции, которые связанны с выделением бактериальных культур, проводятся над пламенем горелки.

При выделении из патологического материала чистой культуры возбудителя, который существенно загрязнен посторонней микрофлорой, часто пользуются биологическим методом выделения чистой культуры. Делают это следующим образом: заражают исследуемым материалом чувствительных к возбудителю лабораторных животных. Еще один пример биологического метода – при исследовании больного на содержание в мокроте пневмококков, материал внутрибрюшинно вводят белым мышам. Из их крови через 4-6 часов получают чистую культуру пневмококка.

4)приготовление мазка с помощью импрессионной системы

На предметное стекло, при помощи бактериальной петли, нанести мазок. Высушить его на воздухе, а затем зафиксировать в пламени спиртовки. Мазок должен быть равномерно растертым и не густым. Фиксированный мазок – носит название ПРЕПАРАТ (5 баллов).

2. Приступить к окраске по Граму (5 баллов).
Этап 1: на препарат нанести несколько капель раствора генцианвиолета. Окрашивать 1 – 2 минуты. Слить остатки красителя.
Этап 2: не промывая водой, нанести раствор Люголя до почернения
(1 мин.), затем раствор слить.
Этап 3: не промывая водой, нанести 96% спирт до отхождения красителя (30-60 с).
Этап 4: промыть препарат водой. Этап 5: докрасить фуксином 3 мин, промыть водой и высушить.
3. Микроскопировать окрашенный препарат при помощи иммерсионной системы светового микроскопа. По результатам окрашивания грамположительные микроорганизмы окрасятся в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные в розово-малиновый. Внимание! Приготовленный и окрашенный препарат продемонстрируйте преподавателю! (5 баллов).
4. Зарисовать увиденные в поле зрения микроскопа объекты в отведенное для этого поле справа на бланке работы (3 балла).
5. Сравнить полученный рисунок с изображениями основных форм бактерий (см. приложение 1). Определить родовую принадлежность исследованного микроорганизма и предположить его видовое название (2 балла).