Способы взят исслед.матер для микробиолог.исслед

Способы взят исслед.матер для микробиолог.исслед

Взят матер.для исслед.

Для приготов препарата исслед матер берут из пробирки, колбы или чашки петри бактер петлей или стерильн пипеткой. Пробирку с бакт культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель- в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращат движ вынимают из пробирки ватную пробку. Вводят петлю в пробирку,охлаждая ее о внутр пов-ть. Вынимают петлю из пробирки, жидкий материал из пробирки или колбы можно набирать пипеткой.,удерживая ее в прав руке и закрывая отверстие 2 пальцем

Приготовить мазок из исследуемого материала

1.чистка стекла

2.нанесение материала

3.размазывание материала на предметном стекле(мазок)

4.высушивание

5.фиксация

6.окрашивание

7.микроскопирование.

Высушивание. Высушивание мазка производится на воздухе. Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращенным кверху, подержать в струе теплого воздуха, высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя.
Фиксация. Используют физический и химический методы фиксаций. Физический - фиксация мазка над пламенем горелки или спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх. Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок так как при перегревании могут произойти необратимые изменения в клетке. Химический метод фиксации - более мягкий по сравнению с фиксацией на пламени.

Окраска мазка. На мазок нанести несколько капель раствора красителя так, чтобы весь мазок был покрыт краской. Оставить краску на определенное время. Промыть препарат водой, просушить фильтровальной бумагой.
Различают простые и сложные методы окраски
К простым относятся методы с использованием одного вида красителя, к сложным - нескольких красителей.
Простые методы окраски: метиленовым синим - окраска в течение 3-5 мин;
генцнанвиолетом - окраска в течение 1 -2 мин;
фуксином водным - окраска в течение 1-2 мин.
Простыми методами окраски пользуются для обнаружения в микроскопируемом материале микробов, определения их количества, формы и расположения.
Сложные методы окраски используют для дифференциации микробов по морфологическим и тинкториальным свойствам.

Работа с микроскопом

1. Микроскоп поставьте штативом к себе на расстоянии 5-10 см от края стола. Приведите микроскоп в рабочее положение, наклонив верхнюю часть штатива на 45 градусов. В отверстие предметного столика при помощи зеркала направьте свет.

2. Приготовленный препарат поместите на предметный столик и закрепите предметное стекло зажимами.

3. Пользуясь винтом, плавно опустите тубус так, чтобы нижний край объектива оказался на расстоянии 1-2 мм от препарата.

4. В окуляр смотрите одним глазом, не закрывая и не зажмуривая другой. Глядя в окуляр, при помощи винтов медленно поднимайте тубус, пока не появится чёткое изображение объекта исследования.

5. После работы микроскоп приведите в нерабочее положение и уберите в футляр.

Микроскоп - хрупкий и дорогой прибор: работать с ним надо аккуратно, строго следуя правилам.

 

Механизм окраски по ГРАМу

На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1-2 мин

Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин

Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15-20 мин в зависимости от толщины мазка

Спирт смыть дистиллированной водой

Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2-3 мин

Краситель смыть водой, препарат высушить, промикроскопировать с иммерсией

Микроскопия с иммерсией.

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный цвет.

ОКРАСКА ПО МЕТОДУ ОЖЕШКО

1. На высушенный мазок (нефиксированный!) + несколько капель 0,5% НCl, держать над пламенем спиртовки до образования паров

2. Высушивают и фиксируют физическим способом

3. Окрашивают по методу Циля-Нильсена:

1) На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)

2) Н₂О

3) 5% Н₂SО₄ (погружая 2-3 раза)

4) Н₂О

5) Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин

6) Н₂О

4. Микроскопия с иммерсией

 

Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.

Выделение чистой культуры

При бактериологическом методе в анаэростат помещают посевы анаэробов. Из аэростата удаляют воздух и заменяют его газовой смесью, которая не содержит кислород.

Основой бактериологического метода является выделение чистой культуры возбудителя, которое происходит на первом этапе исследования. Для выделения чистой культуры возбудителя делают посев взятого материала. Посев делается, как правило, на плотные питательные среды, которые выбирают исходя из свойств предполагаемого возбудителя.

При бактериологическом методе применяют по возможности среды, на которых растет только конкретный вид бактерий — элективные среды, или среды, позволяющие отличить предполагаемого возбудителя от других микроорганизмов или по-другому дифференциально-диагностические среды.

Например, при бактериологической диагностике кишечных инфекций – среду Эндо, для выделения дифтерийной палочки используют теллуритовые среды, и т. д. При выделении условно-патогенных микроорганизмов при бактериологическом методе посев взятого материала осуществляют на универсальные питательные среды. Примером такой среды может служить кровяной агар.

Все манипуляции, которые связанны с выделением бактериальных культур, проводятся над пламенем горелки.

При выделении из патологического материала чистой культуры возбудителя, который существенно загрязнен посторонней микрофлорой, часто пользуются биологическим методом выделения чистой культуры. Делают это следующим образом: заражают исследуемым материалом чувствительных к возбудителю лабораторных животных. Еще один пример биологического метода – при исследовании больного на содержание в мокроте пневмококков, материал внутрибрюшинно вводят белым мышам. Из их крови через 4-6 часов получают чистую культуру пневмококка.

4)приготовление мазка с помощью импрессионной системы

На предметное стекло, при помощи бактериальной петли, нанести мазок. Высушить его на воздухе, а затем зафиксировать в пламени спиртовки. Мазок должен быть равномерно растертым и не густым. Фиксированный мазок – носит название ПРЕПАРАТ (5 баллов).

2. Приступить к окраске по Граму (5 баллов).
Этап 1: на препарат нанести несколько капель раствора генцианвиолета. Окрашивать 1 – 2 минуты. Слить остатки красителя.
Этап 2: не промывая водой, нанести раствор Люголя до почернения
(1 мин.), затем раствор слить.
Этап 3: не промывая водой, нанести 96% спирт до отхождения красителя (30-60 с).
Этап 4: промыть препарат водой. Этап 5: докрасить фуксином 3 мин, промыть водой и высушить.
3. Микроскопировать окрашенный препарат при помощи иммерсионной системы светового микроскопа. По результатам окрашивания грамположительные микроорганизмы окрасятся в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные в розово-малиновый. Внимание! Приготовленный и окрашенный препарат продемонстрируйте преподавателю! (5 баллов).
4. Зарисовать увиденные в поле зрения микроскопа объекты в отведенное для этого поле справа на бланке работы (3 балла).
5. Сравнить полученный рисунок с изображениями основных форм бактерий (см. приложение 1). Определить родовую принадлежность исследованного микроорганизма и предположить его видовое название (2 балла).

Способы взят исслед.матер для микробиолог.исслед

Взят матер.для исслед.

Для приготов препарата исслед матер берут из пробирки, колбы или чашки петри бактер петлей или стерильн пипеткой. Пробирку с бакт культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель- в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращат движ вынимают из пробирки ватную пробку. Вводят петлю в пробирку,охлаждая ее о внутр пов-ть. Вынимают петлю из пробирки, жидкий материал из пробирки или колбы можно набирать пипеткой.,удерживая ее в прав руке и закрывая отверстие 2 пальцем