Идентификация выделенной чистой культуры бактерий по биохимическим свойствам

1. Идентификация E.coli по биохимическим признакам.

1.1. Идентификация по сахаролитической активности E.coli проводится по изменению короткого «пестрого» ряда, который включает в себя среды Гисса (мясопептонный бульон (МПБ), 0,5% углеводов: лактозы, сахарозы, глюкозы, мальтозы, маннита и индикатор Андреде – кислый фуксин; в каждую пробирку помещают «поплавок» - стеклянные трубочки, запаянные с одного конца для улавливания газа); покраснение среды является показателем образования кислоты при ферментации углеводов.

Исследуемую культуру засевают на среды «пестрого» ряда и инкубируют при 37°С в течение 18 – 24 часов. E.coli ферментирует всех углеводов короткого «пестрого» ряда до кислоты и газа, за исключением сахарозы и в отличие от других представителей семейства Enterobacteriaceae, например, возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В: S. typhi, S.P.A и S.P.B.

S. typhi ферментирует всех углеводов короткого «пестрого» ряда до кислоты за исключением сахарозы и лактозы, паратифозные палочки – тех же углеводов, но с образованием кислоты и газа.

1.2. Идентификация по протеолитической активности E.coli. Разложение микробами белка сопровождается образованием индола, сероводорода, аммиака. 

Реакция на сероводород. Исследуемую культуру засевают в МПБ, под пробкой укрепляют полоску бумаги, пропитанной ацетатом свинца. Почернение бумаги после инкубации при 37°С в течение 2 – 3 суток свидетельствует о наличии сероводорода. E.coli, в отличие от возбудителей брюшного тифа и паратифа В, не образует сероводород.

1.3. Проба на индол. Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий прибавляют 2 – 3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор парадиметиламидобензальдегида с хлороводородной кислотой).

В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание, при осторожном наслаивании образуется розовое кольцо. 

 

2. Идентификация стафилококков по биохимическим признакам.

2.1. Определение каталазной активности стафилококков.

На предметное стекло наносят каплю 1 – 3% раствора пероксида водорода и вносят в нее с помощью петли бактериальную культуру. Каталаза разлагает пероксид водорода на кислород и воду. Выделение пузырьков O₂ свидетельствует о наличии у данного вида бактерий фермента каталазы.

Каталазной активностью обладают стафилококки в отличие от стрептокков.

2.2. Определение плазмокоагулазной активности стафилококков.

Плазмокоагулаза – фермент S.aureus сворачивающий фибрин за счет активации предшествующего в плазме крови протромбина, тем самым, защищает бактерии от клеточных и гуморальных факторов иммунитета. 

В пробирку с цитратной плазмой вносят исследуемую культуру, помещают в термостат при (37 ± 1)°С и через 1, 2, 3, 18 и 24 ч проверяют наличие свертывания плазмы. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы. В отличие от других стафилококков S.аureus обладает плазмокоагулазной активностью.

 

Задание 4

Заполните таблицы

Ферментативные свойства E. Coli

 

Сахаролитическая активность				Протеолитическая активность			Наличие каталазы
Глюкоза	Лактоза	Маннит	Сорбит	Индол	Н2S,	NH3

 

Ферментативные свойства S.aureus

 

Сахаролитическая активность				Протеолитическая активность			Наличие каталазы
Глюкоза	Лактоза	Маннит	Сорбит	Индол	Н2S,	NH3

 

Задание 5

Учет результатов идентификации и оформление заключения о виде.

Пример оформления: выделена чистая культура E.coli (S.аureus), идентификация проведена по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам, токсигенности (вирулентности), фагочувствительности и по генетической структуре. 

 

8. Контроль освоения заданий по самостоятельной контактной работе.

8.1. Выполнить тестовые задания.

8.1.1. Выберите один наиболее правильный ответ.

 

1. ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДОЙ ЯВЛЯЕТСЯ

1) желточно-солевой агар

2) желчный бульон

3) среда Эндо

4) пептонная вода

 

2. К ВОДОРАСТВОРИМЫМ ПИГМЕНТАМ БАКТЕРИЙ ОТНОСЯТСЯ

1) меланиновые

2) хиноновые

3) пирроловые

4) феназиновые

 

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИЙ ПРОВОДЯТ

1) на средах Гисса

2) в столбике желатины

3) на кровяном агаре

4) методом Фортнера

 

4. СУБСТРАТОМ ДЛЯ РЕАКЦИИ ОБРАЗОВАНИЯ ИНДОЛА ЯВЛЯЕТСЯ

1) глюкоза

2) спирт

3) мочевина

4) пептон

 

8.1.2. Установите соответствие.

5. Установите соответствие между механизмом действия токсина и токсином бактерий: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.

токсин бактерий	механизм действия токсина
А) Тетаноспазмин Б) Гемолизин В) Холероген Г) Энтеротоксин золотистых стафилококков	1. Мембранотоксин 2. Нейротоксин 3. Цитотоксин 4. Термостабильный и теромолабильный энтеротоксин

6. Установите соответствие между ферментом и типом катализируемой реакции: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.

тип катализируемой реакции

Фермент

А) Реакции конденсации или присоединения с образованием новых связей С-С, С-О, С-N, C-S за счет энергии АТФ, что сопровождается ее гидролизом. Б)   Реакции расщепления сложных органических веществ на более простые путем присоединения составных частей воды в месте разрыва химической связи (реакции гидролиза). В) Окислительно-восстановительные реакции. Г) Перевод соединений в другую изомерную форму. Д) Реакции негидролитического расщепления субстрата с образованием двойной связи или присоединение группы атомов по двойной связи: С-С, С-О, С-N, C-S. Е) Перенос функциональных групп атомов (метильной, ацильной, карбоксильной, аминогруппы и др.) от одного соединения к другому в реакциях, не являющихся процессом гидролиза.

1. Оксиредуктазы 2. Трансферазы 3. Гидролазы 4. Лиазы 5. Изомеразы 6. Лигазы (синтетазы)

 

8.1.3. Для каждого вопроса один или несколько ответов являются правильными. Выберите ответ:

Верно	1, 2, 3	1, 3	2, 4	1, 2, 3, 4
Ответ	А	Б	В	Г

 

7. Идентификацию выделенной культуры производят с помощью определения следующих признаков

1) морфологических

2) тинкториальных

3) культуральных

4) биохимических

 

8. Конститутивные ферменты

1) постоянно синтезируются в микробных клетках в определенных концентрациях

2) концентрация резко вырастает при наличии соотвествующего субстра

3) концентрация не зависит от наличия соотвествующего субстрата

4) в отсутствии субстрата находятся в следовых количествах

5) относятся к факторам роста микроорганизмов

 

9. Индуцибельные ферменты

1) постоянно синтезируются в микробных клетках в определенных концентрациях

2) концентрация резко вырастает при наличии соотвествующего субстрата

3) концентрация не зависит от наличия соотвествующего субстрата

4) в отсутствии субстрата находятся в следовых количествах

 

10. Ферменты патогенности бактерий

1) плазмокоагулаза

2) гиалуронидаза

3) лецитиназа

4) нейраминидаза

8.2. Решить ситуационные задачи.

 

Задача 1. При проведении бактериологического метода исследования на 3 этапе был получен рост исследуемой культуры на скошенном МПА.

Назовите цель 3 этапа бактериологического метода диагностики?

Как проверить чистоту культуры, полученной на скошенном МПА?

 

Задача 2. В первичном посеве материала от обследуемого на плотную питательную среду был получен рост нескольких типов колоний микроорганизмов, отличающихся по культуральным, морфо-тинкториальным свойствам. Данной информации оказалось недостаточной для установления видовой принадлежности микроорганизмов.

Назовите свойства микроорганизмов, которые необходимо изучить для определения видовой принадлежности. «Пёстрый ряд»: его состав и назначение.

 

Задача 3. При посеве культуры на «пестрый ряд», через 24 часа в пробирке с пептонной водой наблюдается помутнение среды и изменение окрашивания бумаг с индикаторами – в черный и розовый цвет. Объясните изменение окраски индикаторных бумаг.

 

Задача 4. Произвели посев культуры бактерий уколом в столбик 20% желатина. Через сутки инкубации при температуре 22°С в столбике желатина наблюдается разжижение. Объясните наблюдаемое явление.

 

 

Практическое занятие № 7